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长链非编码核糖核酸肺腺癌转移相关转录本1和核旁斑组装转录本1在低氧预适应小鼠海马神经保护中的作用研究
1
作者
侯海东
闫磊
+4 位作者
王丽平
杨静
桂玉成
杜永强
邵国
《中国脑血管病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第8期525-536,共12页
目的探索长链非编码核糖核酸(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)和核旁斑组装转录本1(NEAT1)在低氧预适应(HPC)小鼠海马细胞中的表达及其与神经保护的关系。方法(1)将36只雄性美国癌症研究所(ICR)小鼠按照随机数字表法完全随机分为3...
目的探索长链非编码核糖核酸(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)和核旁斑组装转录本1(NEAT1)在低氧预适应(HPC)小鼠海马细胞中的表达及其与神经保护的关系。方法(1)将36只雄性美国癌症研究所(ICR)小鼠按照随机数字表法完全随机分为3组:对照组、低氧组和低氧预处理组,每组12只。对照组小鼠不进行低氧暴露,低氧组小鼠低氧暴露1次,低氧预处理组小鼠低氧暴露4次。低氧处理结束后立即将所有小鼠脱颈椎处死并分离海马组织分组保存。(2)将HT22细胞培养于含10%胎牛血清和100 U/ml青霉素-链霉素的培养基,细胞汇合率大于90%时将其转移至24孔板中培养后分2批进行处理。通过转染试剂将6 pmol的乱序小干扰核糖核酸(siRNA)、MALAT1 siRNA(siMALAT1)、siNEAT1、siMALAT1+siNEAT1分别一一对应转染至第一批HT22细胞的阴性对照组、siMALAT1组、siNEAT1组、siMALAT1+siNEAT1组细胞中,空白组不做任何处理;然后在正常条件下(5%CO_(2)和95%空气)培养48 h;第二批HT22细胞中,利用转染试剂分别将6 pmol的乱序siRNA、乱序siRNA、siMALAT1、siMALAT1、siNEAT1、siNEAT1分别一一对应转染至阴性对照组、阴性对照+氧糖剥夺-再灌注(OGD/R)组、siMALAT1组、siMALAT1+OGD/R组、siNEAT1组、siNEAT1+OGD/R组的HT22细胞中,转染后48 h将阴性对照组、siMALAT1组、siNEAT1组HT22细胞在正常条件下(5%CO_(2)和95%空气)继续培养,将阴性对照+OGD/R组、siMALAT1+OGD/R组、siNEAT1+OGD/R组细胞进行OGD/R处理,即低氧条件下(1%O_(2)+5%CO_(2)+94%N_(2))暴露8 h,之后再进行正常条件下培养16 h。(3)通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)及蛋白免疫印迹法测定各组小鼠海马组织中MALAT1、NEAT1、N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基2B(NR2B)信使核糖核酸(mRNA)、NR2B蛋白水平的相对表达量和各组HT22细胞转染处理后NR2B mRNA、NR2B蛋白水平的相对表达量及各组HT22细胞转染和OGD/R后的血影蛋白分解产物、活化半胱氨酸蛋白酶蛋白3的相对表达量,并计算各组HT22细胞存活率。结果(1)3组小鼠海马中MALAT1(F=43.92)、NEAT1(F=506.40)、NR2B mRNA(F=50.64)及NR2B蛋白(F=41.24)的相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05)。与对照组相比,低氧组MALAT1[(1.68±0.06)比(1.00±0.08)]、NR2B mRNA[(1.26±0.06)比(1.00±0.01)]及NR2B蛋白[(1.47±0.05)比(1.00±0.01)]的相对表达量均增加(均P<0.05),而NEAT1[(1.02±0.10)比(1.00±0.03)]的相对表达量组间差异无统计学意义(P>0.05),低氧预处理组中MALAT1[(1.12±0.13)比(1.00±0.08)]和NEAT1[(2.88±0.10)比(1.00±0.03)]的相对表达量增加;与低氧组比较,低氧预处理组NR2B mRNA[(0.54±0.07)比(1.26±0.06)]及NR2B蛋白[(1.17±0.07)比(1.47±0.05)]的相对表达量均降低(均P<0.05)。(2)5组HT22细胞转染后NR2B mRNA(F=36.92)及NR2B蛋白(F=56.98)的相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05)。与阴性对照组相比,siMALAT1组[NR2B mRNA:(2.04±0.08)比(0.94±0.04),NR2B蛋白:(1.72±0.13)比(0.93±0.02)]、siNEAT1组[NR2B mRNA:(2.15±0.13)比(0.94±0.04),NR2B蛋白:(1.87±0.46)比(0.93±0.02)]、siMALAT1+siNEAT1组[NR2B mRNA:(2.09±0.16)比(0.94±0.04),NR2B蛋白:(2.07±0.30)比(0.93±0.02)]的NR2B mRNA及NR2B蛋白的相对表达量均增加(均P<0.05)。(3)6组HT22细胞转染及OGD/R处理后血影蛋白分解产物(145/150 kDa蛋白;F=12.43)、血影蛋白分解产物(120 kDa蛋白;F=7.15)、活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白(F=6.61)的相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05)。与siMALAT1组比较,siMALAT1+OGD/R组的145/150 kDa[(1.42±0.48)比(0.85±0.34)]、120 kDa[(1.33±0.37)比(0.52±0.19)]的血影蛋白分解产物及活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白[(2.43±0.35)比(1.15±0.24)]相对表达量均增加(均P<0.05);与阴性对照+OGD/R组比较,siMALAT1+OGD/R组的145/150 kDa[(1.42±0.48)比(1.23±0.17)]、120 kDa[(1.33±0.37)比(0.80±0.21)]的血影蛋白分解产物及活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白[(2.43±0.35)比(1.46±0.39)]相对表达量均增加(均P<0.05);与siNEAT1组比较,siNEAT1+OGD/R组的145/150 kDa[(1.28±0.44)比(0.87±0.32)]、120 kDa[(0.81±0.36)比(0.63±0.16)]的血影蛋白分解产物及活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白[(1.51±0.45)比(1.01±0.27)]相对表达量均增加(均P<0.05)。(4)6组HT22细胞存活率差异有统计学意义(F=5.54,P<0.05)。与阴性对照组比较,siMALAT1组、siNEAT1组、siMALAT1+OGD/R组及siNEAT1+OGD/R组HT22细胞存活率均降低[(0.65±0.40)、(0.76±0.35)、(0.24±0.17)、(0.23±0.16)比(0.84±0.04),均P<0.05];与siMALAT1组比较,siMALAT1+OGD/R组细胞存活率降低[(0.24±0.17)比(0.65±0.40),P<0.05];与siNEAT1组比较,siNEAT1+OGD/R组细胞存活率降低[(0.23±0.16)比(0.76±0.35),P<0.05]。结论HPC增加了小鼠海马组织中MALAT1和NEAT1的表达,MALAT1和NEAT1可能通过影响NR2B的表达参与小鼠缺血缺氧后的神经保护作用。
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关键词
低氧预处理
长非编码RNA
MALAT1
NEAT1
NR2B
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职称材料
题名
长链非编码核糖核酸肺腺癌转移相关转录本1和核旁斑组装转录本1在低氧预适应小鼠海马神经保护中的作用研究
1
作者
侯海东
闫磊
王丽平
杨静
桂玉成
杜永强
邵国
机构
广东省东莞市清溪医院神经外科
内蒙古低氧适应转化医学重点实验室
广东省
深圳市龙岗区第三人民
医院
转化医学中心
出处
《中国脑血管病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第8期525-536,共12页
基金
国家自然科学基金(82060337)
深圳市科技计划项目基础研究面上项目(JCYJ20220531092412028、JCYJ20230807121306012)
深圳市龙岗区医疗卫生科技计划项目(LGKCYLWS2021000033、LGKCYLWS2023025)。
文摘
目的探索长链非编码核糖核酸(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)和核旁斑组装转录本1(NEAT1)在低氧预适应(HPC)小鼠海马细胞中的表达及其与神经保护的关系。方法(1)将36只雄性美国癌症研究所(ICR)小鼠按照随机数字表法完全随机分为3组:对照组、低氧组和低氧预处理组,每组12只。对照组小鼠不进行低氧暴露,低氧组小鼠低氧暴露1次,低氧预处理组小鼠低氧暴露4次。低氧处理结束后立即将所有小鼠脱颈椎处死并分离海马组织分组保存。(2)将HT22细胞培养于含10%胎牛血清和100 U/ml青霉素-链霉素的培养基,细胞汇合率大于90%时将其转移至24孔板中培养后分2批进行处理。通过转染试剂将6 pmol的乱序小干扰核糖核酸(siRNA)、MALAT1 siRNA(siMALAT1)、siNEAT1、siMALAT1+siNEAT1分别一一对应转染至第一批HT22细胞的阴性对照组、siMALAT1组、siNEAT1组、siMALAT1+siNEAT1组细胞中,空白组不做任何处理;然后在正常条件下(5%CO_(2)和95%空气)培养48 h;第二批HT22细胞中,利用转染试剂分别将6 pmol的乱序siRNA、乱序siRNA、siMALAT1、siMALAT1、siNEAT1、siNEAT1分别一一对应转染至阴性对照组、阴性对照+氧糖剥夺-再灌注(OGD/R)组、siMALAT1组、siMALAT1+OGD/R组、siNEAT1组、siNEAT1+OGD/R组的HT22细胞中,转染后48 h将阴性对照组、siMALAT1组、siNEAT1组HT22细胞在正常条件下(5%CO_(2)和95%空气)继续培养,将阴性对照+OGD/R组、siMALAT1+OGD/R组、siNEAT1+OGD/R组细胞进行OGD/R处理,即低氧条件下(1%O_(2)+5%CO_(2)+94%N_(2))暴露8 h,之后再进行正常条件下培养16 h。(3)通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)及蛋白免疫印迹法测定各组小鼠海马组织中MALAT1、NEAT1、N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基2B(NR2B)信使核糖核酸(mRNA)、NR2B蛋白水平的相对表达量和各组HT22细胞转染处理后NR2B mRNA、NR2B蛋白水平的相对表达量及各组HT22细胞转染和OGD/R后的血影蛋白分解产物、活化半胱氨酸蛋白酶蛋白3的相对表达量,并计算各组HT22细胞存活率。结果(1)3组小鼠海马中MALAT1(F=43.92)、NEAT1(F=506.40)、NR2B mRNA(F=50.64)及NR2B蛋白(F=41.24)的相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05)。与对照组相比,低氧组MALAT1[(1.68±0.06)比(1.00±0.08)]、NR2B mRNA[(1.26±0.06)比(1.00±0.01)]及NR2B蛋白[(1.47±0.05)比(1.00±0.01)]的相对表达量均增加(均P<0.05),而NEAT1[(1.02±0.10)比(1.00±0.03)]的相对表达量组间差异无统计学意义(P>0.05),低氧预处理组中MALAT1[(1.12±0.13)比(1.00±0.08)]和NEAT1[(2.88±0.10)比(1.00±0.03)]的相对表达量增加;与低氧组比较,低氧预处理组NR2B mRNA[(0.54±0.07)比(1.26±0.06)]及NR2B蛋白[(1.17±0.07)比(1.47±0.05)]的相对表达量均降低(均P<0.05)。(2)5组HT22细胞转染后NR2B mRNA(F=36.92)及NR2B蛋白(F=56.98)的相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05)。与阴性对照组相比,siMALAT1组[NR2B mRNA:(2.04±0.08)比(0.94±0.04),NR2B蛋白:(1.72±0.13)比(0.93±0.02)]、siNEAT1组[NR2B mRNA:(2.15±0.13)比(0.94±0.04),NR2B蛋白:(1.87±0.46)比(0.93±0.02)]、siMALAT1+siNEAT1组[NR2B mRNA:(2.09±0.16)比(0.94±0.04),NR2B蛋白:(2.07±0.30)比(0.93±0.02)]的NR2B mRNA及NR2B蛋白的相对表达量均增加(均P<0.05)。(3)6组HT22细胞转染及OGD/R处理后血影蛋白分解产物(145/150 kDa蛋白;F=12.43)、血影蛋白分解产物(120 kDa蛋白;F=7.15)、活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白(F=6.61)的相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05)。与siMALAT1组比较,siMALAT1+OGD/R组的145/150 kDa[(1.42±0.48)比(0.85±0.34)]、120 kDa[(1.33±0.37)比(0.52±0.19)]的血影蛋白分解产物及活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白[(2.43±0.35)比(1.15±0.24)]相对表达量均增加(均P<0.05);与阴性对照+OGD/R组比较,siMALAT1+OGD/R组的145/150 kDa[(1.42±0.48)比(1.23±0.17)]、120 kDa[(1.33±0.37)比(0.80±0.21)]的血影蛋白分解产物及活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白[(2.43±0.35)比(1.46±0.39)]相对表达量均增加(均P<0.05);与siNEAT1组比较,siNEAT1+OGD/R组的145/150 kDa[(1.28±0.44)比(0.87±0.32)]、120 kDa[(0.81±0.36)比(0.63±0.16)]的血影蛋白分解产物及活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白[(1.51±0.45)比(1.01±0.27)]相对表达量均增加(均P<0.05)。(4)6组HT22细胞存活率差异有统计学意义(F=5.54,P<0.05)。与阴性对照组比较,siMALAT1组、siNEAT1组、siMALAT1+OGD/R组及siNEAT1+OGD/R组HT22细胞存活率均降低[(0.65±0.40)、(0.76±0.35)、(0.24±0.17)、(0.23±0.16)比(0.84±0.04),均P<0.05];与siMALAT1组比较,siMALAT1+OGD/R组细胞存活率降低[(0.24±0.17)比(0.65±0.40),P<0.05];与siNEAT1组比较,siNEAT1+OGD/R组细胞存活率降低[(0.23±0.16)比(0.76±0.35),P<0.05]。结论HPC增加了小鼠海马组织中MALAT1和NEAT1的表达,MALAT1和NEAT1可能通过影响NR2B的表达参与小鼠缺血缺氧后的神经保护作用。
关键词
低氧预处理
长非编码RNA
MALAT1
NEAT1
NR2B
Keywords
Hypoxic preconditioning
Long non-coding RNA
MALAT1
NEAT1
NR2B
分类号
R743.3 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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长链非编码核糖核酸肺腺癌转移相关转录本1和核旁斑组装转录本1在低氧预适应小鼠海马神经保护中的作用研究
侯海东
闫磊
王丽平
杨静
桂玉成
杜永强
邵国
《中国脑血管病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024
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