罗非鱼链球菌检测方法研究进展

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作者 胡毅军 丁文桂 +5 位作者 黄洁莹 罗律 赖颖 王自强 李敏 张险朋 《中国动物检疫》 CAS 2024年第1期80-86,共7页

罗非鱼链球菌在世界范围内广泛分布,是威胁全球水产养殖业的重要病原体之一。无乳链球菌(Sreptococcus agalactiae)和海豚链球菌(Sreptococcus iniae)是引起罗非鱼链球菌病的主要病原体,严重危害罗非鱼养殖业的健康发展。适合应用场景... 罗非鱼链球菌在世界范围内广泛分布,是威胁全球水产养殖业的重要病原体之一。无乳链球菌(Sreptococcus agalactiae)和海豚链球菌(Sreptococcus iniae)是引起罗非鱼链球菌病的主要病原体,严重危害罗非鱼养殖业的健康发展。适合应用场景的快速、准确无乳链球菌和海豚链球菌检测技术,对于预防罗非鱼链球菌病的大规模暴发十分必要。本文总结了近年来罗非鱼链球菌检测方法研究状况,包括细菌分离培养鉴定、免疫学方法和分子生物学检测方法等,以期为罗非鱼链球菌病的诊断和预防提供技术支撑。 展开更多

关键词 罗非鱼 无乳链球菌 海豚链球菌 检测方法

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抗副溶血弧菌卵黄抗体制备及其与不同血清型菌株交叉反应研究

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作者 陈静妮 仲颖 +4 位作者 黄春萍 李硕 黄锦炉 王贵平 赵立宁 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期176-185,共10页

为探索卵黄抗体对防控凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖中副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)病的潜在作用,将2种血清型(O1:KUT和OUT:KUT)的3株副溶血弧菌制备成灭活疫苗,分别免疫产蛋鸡制备卵黄抗体。通过ELISA实验和试管凝集实... 为探索卵黄抗体对防控凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖中副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)病的潜在作用,将2种血清型(O1:KUT和OUT:KUT)的3株副溶血弧菌制备成灭活疫苗,分别免疫产蛋鸡制备卵黄抗体。通过ELISA实验和试管凝集实验,评估了卵黄抗体的效价消长规律、抑菌效果和交叉反应情况。结果显示:3株副溶血弧菌均能诱导高特异性水平的卵黄抗体,抗体凝集效价和ELISA效价的消长趋势相近,均在4免后10~60 d达到卵黄抗体的效价平台期,凝集效价在1∶8以上,ELISA效价在1∶6400以上;卵黄抗体与血清型相同的其他副溶血弧菌发生强烈的交叉ELISA和交叉凝集反应,但与血清型不同的副溶血弧菌有较低的交叉ELISA反应,无交叉凝集反应。研究表明副溶血弧菌能刺激蛋鸡产生高特异性水平的卵黄抗体,对不同血清型菌株不具有交叉保护效果,可为抗副溶血弧菌卵黄抗体产品的开发与应用提供参考。 展开更多

关键词 副溶血弧菌 凡纳滨对虾 高特异性卵黄抗体 ELISA 凝集

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石榴皮水提物对猪源多重耐药大肠杆菌的抑菌作用研究 被引量：8

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作者 刘琳 吴保庆 +2 位作者 郭晓银 于文会 田浪 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期328-340,共13页

【目的】筛选腹泻仔猪中携毒力基因且多重耐药的大肠杆菌菌株,评估中药水提物对该菌株的抑菌活性,并探索中药抑菌机制。【方法】通过PCR方法与Kirby-Bauer(K-B)药敏纸片法评估临床大肠杆菌菌株的肠毒素基因携带情况和耐药性;通过微量肉... 【目的】筛选腹泻仔猪中携毒力基因且多重耐药的大肠杆菌菌株,评估中药水提物对该菌株的抑菌活性,并探索中药抑菌机制。【方法】通过PCR方法与Kirby-Bauer(K-B)药敏纸片法评估临床大肠杆菌菌株的肠毒素基因携带情况和耐药性;通过微量肉汤稀释法评估中药水提物对多重耐药大肠杆菌菌株的抑菌活性,确定最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC);通过电导率仪以及相关试剂盒检测评估石榴皮水提物对多重耐药菌株作用不同时间后菌液电导率、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)含量及菌体内ATP含量的变化;通过SDS-PAGE和蛋白含量检测评估菌体内可溶性蛋白的含量变化;通过扫描电镜观察大肠杆菌形态变化。【结果】PCR检测14株临床大肠杆菌中肠毒素基因携带率达到78.57%,抗生素药敏试验结果显示,所有菌株至少对2种抗生素耐药,均属于多重耐药菌株。中药药敏试验结果显示,黄连、黄芩、石榴皮水提物对多重耐药菌株抑菌活性较好,其中石榴皮水提物的MIC和MBC分别为31.25和62.5 mg/mL。石榴皮水提物在1/2MIC和MIC浓度下能显著抑制质控菌株和多重耐药菌株的生长繁殖。在石榴皮水提物作用大肠杆菌3 h内,菌液电导率相比于对照组极显著上升(P<0.01)。AKP与ATP检测结果显示,与对照组相比,石榴皮水提物在作用大肠杆菌6 h内,菌液中AKP含量极显著增加(P<0.01),菌体内ATP含量极显著降低(P<0.01)。SDS-PAGE和蛋白含量检测结果显示,随着石榴皮水提物刺激时间增加,菌体内可溶性蛋白含量减少。扫描电镜结果显示,石榴皮刺激后菌体形态发生碎裂和溶解。【结论】本研究结果表明,石榴皮水提物能显著抑制多重耐药且携带肠毒素基因的大肠杆菌生长,为临床治疗大肠杆菌性仔猪腹泻提供理论参考和药物开发依据。 展开更多

关键词 耐药性 大肠杆菌 石榴皮水提物 抑菌机制

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广东地区健康猪群和发病猪群猪链球菌流行病学调查分析 被引量：28

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作者 刘琪 王娟 +2 位作者 周如月 贾爱卿 王贵平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第6期1825-1831,共7页

为了解广东地区猪群中猪链球菌(Streptococcus suis,SS)的流行情况,本研究对在广东地区养殖场采集的228份发病猪群样品及698份健康猪群样品(包括455份鼻拭子样品及243份屠宰场扁桃体样品)进行了SS携带情况的统计分析。结果显示,发病猪... 为了解广东地区猪群中猪链球菌(Streptococcus suis,SS)的流行情况,本研究对在广东地区养殖场采集的228份发病猪群样品及698份健康猪群样品(包括455份鼻拭子样品及243份屠宰场扁桃体样品)进行了SS携带情况的统计分析。结果显示,发病猪群SS的阳性率为82.02%(187/228),健康猪群的SS阳性率为42.20%(192/455),其中屠宰场屠宰猪群的SS阳性率为32.10%(78/243)。将从发病猪群分离到的187株SS及健康猪群(含养猪场和屠宰场)分离得到的154株SS进行血清型定型分析,结果显示,发病猪群共检测到11个血清型,包括SS1、SS2、SS3、SS4、SS7、SS8、SS9、SS16、SS19、SS29和SS31型,主要以SS2、SS3和SS19型为主,分别占16.58%、9.63%和7.49%;其次为SS7型(6.95%)和SS9型(5.34%),未定型菌株占48.66%;健康猪群共检测到17个血清型,包括SS2、SS3、SS4、SS5、SS7、SS8、SS9、SS10、SS12、SS15、SS16、SS17、SS19、SS21、SS23、SS29和SS30型,主要以血清型SS2和SS29型为主,分别占18.83%和14.94%,其次为SS16型(6.50%),未定型菌株占31.82%。 展开更多

关键词 猪链球菌 健康猪群 发病猪群 流行病学分析

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细胞适应性猪流行性腹泻病毒部分基因序列分析及其致病力研究 被引量：3

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作者 冯晓声 刘琪 +4 位作者 王悦芸 周如月 安欣宇 王贵平 贾爱卿 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期792-799,共8页

对已经适应Vero细胞生长的猪流行性腹泻病毒CHYJ130330亲本代、第38代、第60代、第80代和第100代病毒的S、M、N基因分别进行测序及序列比对分析,结果显示M和N基因具有高度的保守性,多次传代后未发生氨基酸的改变;S基因在第38代时未发生... 对已经适应Vero细胞生长的猪流行性腹泻病毒CHYJ130330亲本代、第38代、第60代、第80代和第100代病毒的S、M、N基因分别进行测序及序列比对分析,结果显示M和N基因具有高度的保守性,多次传代后未发生氨基酸的改变;S基因在第38代时未发生任何突变,第100代时发生了17个核苷酸的点突变,导致15个氨基酸发生改变。动物试验显示,第60代病毒仍能引起仔猪呕吐、腹泻等症状,而第100代的病毒毒力已经减弱。S基因的突变是否与病毒的毒力减弱有关还需进一步试验验证。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 突变 S基因 毒力减弱

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广东某规模化猪场2014—2017年伪狂犬病野毒抗体水平监测结果与分析

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作者 陈善真 曹仁祺 +2 位作者 杨洁 刘博奇 王贵平 《养猪》 2019年第1期116-117,共2页

2014—2017年4年期间对广东某规模化猪场(存栏基础母猪1 300头)多次采集送检血清样品1 262份,其中PRV gE野毒抗体检测数量为594份,检测结果发现,2014—2017年猪伪狂犬病野毒抗体阳性率分别为6.58%、7.25%、51.26%和68.34%,呈连续上升的... 2014—2017年4年期间对广东某规模化猪场(存栏基础母猪1 300头)多次采集送检血清样品1 262份,其中PRV gE野毒抗体检测数量为594份,检测结果发现,2014—2017年猪伪狂犬病野毒抗体阳性率分别为6.58%、7.25%、51.26%和68.34%,呈连续上升的趋势,检测结果结合猪场几年来多种疫苗毒株交替免疫的情况下PRV野毒抗体持续上升的情况表明该猪场存在PRV新型毒株的感染或毒株毒力增强的情况,需引起足够的重视。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病野毒 抗体检测 分析

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发酵中草药对育肥猪生长性能、血液生化指标及免疫机能的影响 被引量：4

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作者 刘琳 朱万江 +4 位作者 吴保庆 朱明恩 平李军 何彦侠 田浪 《中国饲料》 北大核心 2024年第3期149-155,共7页

为研究日粮中添加发酵中草药(黄芪、板蓝根、大枣、党参、石榴皮、连翘、黄芩)对育肥猪临床表现、生产性能、血液生化指标等的影响,试验将32头100日龄、体重为(48±1)kg的“杜×长×大”三元杂交育肥猪随机均分为4组,包括... 为研究日粮中添加发酵中草药(黄芪、板蓝根、大枣、党参、石榴皮、连翘、黄芩)对育肥猪临床表现、生产性能、血液生化指标等的影响,试验将32头100日龄、体重为(48±1)kg的“杜×长×大”三元杂交育肥猪随机均分为4组,包括对照组(饲喂基础日粮)、低剂量组(饲喂基础日粮+0.5%发酵中草药)、中剂量组(饲喂基础日粮+1%发酵中草药)和高剂量组(饲喂基础日粮+2%发酵中草药),试验周期为35 d,试验期间监测受试猪只精神状态、腹泻情况、体温、生产性能、栏舍氨气含量,试验后采集受试猪只血液用于测定血液常规和生化指标。结果表明:试验组猪只饲喂发酵中草药后精神状态、体温无明显异常(P>0.05),发酵中草药能够一定程度改善猪只腹泻和生产性能,尤其是中剂量组增重相比于对照组增加5.97 kg,提升26.49%(P<0.01),采食量相比于对照组多11.90 kg,提升了20.55%,差异极显著(P<0.01),且料肉比降低0.12(P<0.05)。栏舍氨气监测结果显示,发酵中草药连续使用28 d后,栏舍氨气含量相比于对照组下降1.48 ppm,降幅为26.24%(P<0.01);血常规检测结果显示,试验组白细胞数、淋巴细胞数、中间细胞数、粒细胞数以及血小板计数无明显变化(P>0.05),试验组相比于对照组红细胞数有轻微提升(P>0.05),低、中、高试验组猪只血液中血红蛋白含量显著提高20.49 g/L(17.22%)、24.01 g/L(20.18%)、25.48 g/L(21.41%)(P<0.01);血液生化检测结果显示,试验组谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、肌酐、尿素氮、葡萄糖含量均无明显变化(P>0.05),而总蛋白和球蛋白含量相比于对照组呈现剂量依赖性增加,高剂量组相比于对照组分别提升5.11 g/L(9.94%)和5.56 g/L(17.14%),差异显著(P<0.05)。进一步ELISA检测结果显示,试验组IgA、IgG、IgM含量均显著上升(P<0.01),高剂量组相比于对照组分别增加248.50 mg/mL(38.37%)、7.25 mg/mL(105.99%)、146.29 mg/mL(24.68%),差异极显著(P<0.01),说明基础日粮中添加发酵中草药对猪只机体无明显不良影响,且能够提升猪只生产性能、降低栏舍氨气,同时改善机体免疫功能。 展开更多

关键词 发酵中草药 育肥猪 生长性能 血液生化指标 免疫机能

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抗大口黑鲈蛙虹彩病毒卵黄抗体的制备及其间接ELISA检测方法的建立 被引量：1

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作者 李硕 陈静妮 +4 位作者 赵立宁 黄春萍 黄锦炉 王贵平 仲颖 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期129-139,共11页

大口黑鲈(Micropterus salmoides)蛙虹彩病毒(Largemouth bass ranavirus,LMBV)是我国大口黑鲈养殖中的常发病原,主要引起大口黑鲈病毒性溃疡病,制约其养殖业的健康发展。为探究卵黄抗体在防控LMBV中的潜在作用,利用LMBV灭活疫苗免疫蛋... 大口黑鲈(Micropterus salmoides)蛙虹彩病毒(Largemouth bass ranavirus,LMBV)是我国大口黑鲈养殖中的常发病原,主要引起大口黑鲈病毒性溃疡病,制约其养殖业的健康发展。为探究卵黄抗体在防控LMBV中的潜在作用,利用LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡,制备了抗LMBV卵黄抗体;通过筛选捕获物浓度、包被条件和封闭条件,建立了抗LMBV卵黄抗体的间接酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法;使用构建的方法,评估了LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡后卵黄抗体的效价消减规律。结果表明,1‰(φ)β-丙内酯4℃作用72 h可完全灭活LMBV。间接ELISA反应中,每孔包被105 TCID50灭活病毒,37℃孵育2 h后,使用5%(φ)牛血清白蛋白37℃封闭2 h,可有效降低阴性对照组卵黄抗体的背景值;此外,所建立的检测方法与杂交醴弹状病毒卵黄抗体、未免疫的蛋黄提取物和空白细胞不存在交叉反应,特异性较高。LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡约48 d可产生特异性卵黄抗体,免疫后58 d效价升高至峰值(1∶12800),峰值水平可持续至免疫后128 d。所构建的LMBV卵黄抗体检测方法,可实时监测LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡后的特异性卵黄抗体效价水平的变化规律,确定LMBV卵黄抗体的高效免疫程序及高免蛋收集持续期,为LMBV卵黄抗体产品的开发、应用及LMBV的防治提供了新思路。 展开更多

关键词 大口黑鲈 蛙虹彩病毒 卵黄抗体 间接ELISA

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金针菇子实体多糖抗新城疫病毒活性及对鸡免疫器官的影响 被引量：11

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作者 汪雯翰 贾爱卿 +4 位作者 张劲松 杨焱 张赫男 孙文博 贾薇 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期78-84,共7页

金针菇(Flammulina velutipes)子实体经脱脂、水提、醇沉、离子交换柱层析分离得到多糖组分FVP30A、FVP30B、FVP60A和FVP60B。用先加多糖后接种病毒(A)、先接种病毒后加多糖(B)、病毒与多糖同时添加(C)3种给药方式研究分离得到的4个多... 金针菇(Flammulina velutipes)子实体经脱脂、水提、醇沉、离子交换柱层析分离得到多糖组分FVP30A、FVP30B、FVP60A和FVP60B。用先加多糖后接种病毒(A)、先接种病毒后加多糖(B)、病毒与多糖同时添加(C)3种给药方式研究分离得到的4个多糖组分对成纤维鸡胚细胞抗新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的影响。结果表明:在给药方式A和C下,FVP30A和FVP30B在50、100μg/mL作用浓度下,能显著减轻NDV病毒对成纤维鸡胚细胞的损伤,其中FVP30A效果明显好于FVP30B,并且其作用效果具有浓度依赖性。分别用添加0.01%和0.04%FVP30A的饲料饲喂5日龄白羽肉鸡30d,添加量为0.01%处理中成鸡的脾脏、胸腺和法氏囊指数比正常对照组分别提高了30.6%、24.5%和15.0%。实验表明:金针菇子实体中具有抗NDV活性的多糖,将活性多糖按一定量添加在饲料中,对鸡的免疫功能有一定的促进作用。 展开更多

关键词 成纤维鸡胚细胞 存活率 免疫器官

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2021-2022年我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因变异分析 被引量：6

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作者 王志远 刘博奇 +5 位作者 许志颖 徐思佳 邢家宝 张桂红 王衡 孙彦阔 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3812-3823,共12页

为深入了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行和遗传变异情况,2021—2022年,本课题组在我国13个省份约50个养殖场收集了117份临床疑似猪繁殖与呼吸综合征患猪样品,针对PRRS... 为深入了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行和遗传变异情况,2021—2022年,本课题组在我国13个省份约50个养殖场收集了117份临床疑似猪繁殖与呼吸综合征患猪样品,针对PRRSV的ORF5基因进行了遗传变异分析。通过实时荧光定量PCR鉴定PRRSV阳性样品和基因型,应用RT-PCR扩增PRRSV ORF5和ORF7基因,将阳性样本进行测序并开展系统发育学分群和GP5氨基酸突变分析。结果显示,共检出PRRSV-2阳性样品48份(总体阳性率约41%),经测序共获取38条ORF5序列和10条ORF7序列。所有ORF5序列间核苷酸相似性为77.1%~99.8%,ORF7序列间核苷酸相似性为83.3%~98.7%。系统发育学分群显示,谱系1占比60%(29/48,28株NADC30-like毒株,1株NADC34-like毒株),谱系3占比25%(12/48),谱系5.1占比5%(2/48),谱系8.7占比10%(5/48)。GP5氨基酸分析表明,信号肽(aa 1—26)、中和表位C(aa 52—61)及潜在的N-糖基化位点(aa 32—35、aa 44、aa 51)3个区域氨基酸存在显著变异。研究结果表明:多个谱系PRRSV同时在我国流行,谱系1已替代谱系8.7成为主要流行谱系,并分布于我国大多数省份;谱系3仅次于谱系1,主要在华南局部地区流行;谱系8.7毒株检出率较低。需要注意的是,在广东省惠州市检出1株NADC34-like毒株,说明该毒株可能已在华南地区潜在流行。近几年来,PRRSV在我国的流行日趋复杂,谱系1毒株的广泛流行增加了PRRSV的遗传多样性。本研究结果将为制定PRRSV防控策略提供参考。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 系统发育学分析 NADC30 NADC34

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奶牛乳房炎常见致病菌多重PCR检测方法的建立 被引量：4

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作者 刁巧虹 卞国志 +6 位作者 王娟 罗蔼剑 张莹 高潇祎 贾坤 孙凌霜 袁建丰 《动物医学进展》 北大核心 2017年第12期59-63,共5页

为建立同时快速检测奶牛奶样中无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌和金黄色葡萄球菌的方法,根据无乳链球菌sip基因、停乳链球菌isp基因、乳房链球菌pauA基因和金黄色葡萄球菌nuc基因各设计1对特异性引物,建立多重PCR检测体系。结果显示... 为建立同时快速检测奶牛奶样中无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌和金黄色葡萄球菌的方法,根据无乳链球菌sip基因、停乳链球菌isp基因、乳房链球菌pauA基因和金黄色葡萄球菌nuc基因各设计1对特异性引物,建立多重PCR检测体系。结果显示,该检测方法具有高特异性,无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌和金黄色葡萄球菌敏感性分别为105、104、105、105 CFU/mL。对临床采集的460份奶样检测结果表明,建立的多重PCR体系可以用于临床上无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌和金黄色葡萄球菌感染引起的奶牛乳房炎的检测。 展开更多

关键词 乳房炎 多重PCR 无乳链球菌 停乳链球菌 乳房链球菌 金黄色葡萄球菌

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氧化鱼油饲料中添加维生素C对大口黑鲈幼鱼生长及抗氧化能力的影响 被引量：5

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作者 袁瑞敏 刘永坚 +4 位作者 王贵平 姜瑞丽 佘泽杰 梁桂英 田丽霞 《广东农业科学》 CAS 2016年第1期136-144,共9页

以鱼粉作为主要蛋白源、脂肪源选用鱼油、面粉为糖源,设计了等氮(45.2%)等能的6组试验饲料,分别为新鲜鱼油加VC0 mg/kg(FF0)、新鲜鱼油加VC700 mg/kg(FF700)、氧化鱼油加VC0 mg/kg(OF0)、氧化鱼油加VC350 mg/kg(OF350)、氧化鱼油加VC700... 以鱼粉作为主要蛋白源、脂肪源选用鱼油、面粉为糖源,设计了等氮(45.2%)等能的6组试验饲料,分别为新鲜鱼油加VC0 mg/kg(FF0)、新鲜鱼油加VC700 mg/kg(FF700)、氧化鱼油加VC0 mg/kg(OF0)、氧化鱼油加VC350 mg/kg(OF350)、氧化鱼油加VC700 mg/kg(OF700)及氧化鱼油加VC1 400 mg/kg(OF1400)。新鲜鱼油和氧化鱼油的过氧化值分别为7.67 meq/kg和128.47 meq/kg。饲喂大口黑鲈75 d后,评价氧化鱼油和VC对大口黑鲈幼鱼抗氧化能力的影响。结果表明:各组间大口黑鲈存活率差异显著;肝脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性随着差异添加量的增加而升高。新鲜鱼油的两个饲料组中,肝脏GSH-PX活性在FF0和FF350组之间没有显著性差异,但其含量FF700组高于FF0组。在氧化鱼油的4个饲料组中,肝脏GSH-PX活性OF0组显著低于其他组,且随着VC添加量的升高呈现上升趋势。总之,饲料的氧化鱼油会增加鱼体内的氧化压力,但添加超过700 mg/kg的VC即可改善大口黑鲈幼鱼的生长及健康状况。 展开更多

关键词 大口黑鲈 维生素C 存活率 抗氧化能力

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牛乳中乳房链球菌PCR检测方法的建立 被引量：4

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作者 刁巧虹 卞国志 +6 位作者 王娟 罗蔼剑 张莹 高潇祎 贾坤 孙凌霜 袁建丰 《动物医学进展》 北大核心 2017年第8期14-18,共5页

奶牛乳房炎是危害奶牛业最常见的疾病之一,对奶牛业造成了严重的经济损失。引起奶牛乳房炎的病原菌较多,其中乳房链球菌是常见的致病菌之一。为快速准确地检测样品中的该菌,参照GenBank公布的乳房链球菌pauA基因序列设计引物,建立了乳... 奶牛乳房炎是危害奶牛业最常见的疾病之一,对奶牛业造成了严重的经济损失。引起奶牛乳房炎的病原菌较多,其中乳房链球菌是常见的致病菌之一。为快速准确地检测样品中的该菌,参照GenBank公布的乳房链球菌pauA基因序列设计引物,建立了乳房链球菌的PCR检测方法。对460份临床奶样进行检测,传统细菌分离方法共检出11份(2.39%)阳性奶样;PCR方法共检出40份(8.70%)阳性奶样,2种方法的吻合率为93.7%。结果显示,建立的乳房链球菌PCR检测法敏感性高,特异性强,适用于临床检测。 展开更多

关键词 奶牛乳房炎 乳房链球菌 聚合酶链反应

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一株猪伪狂犬病病毒变异株的分离鉴定 被引量：8

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作者 庞旋飞 练斯南 +2 位作者 李中圣 万曾培 白挨泉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第1期196-205,共10页

为了解广东省猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)野毒株的基因变异及遗传演化的情况,本试验对广东佛山疑似暴发伪狂犬病的猪场采集的病料(脑、肺脏、扁桃体、肝脏、脾脏)进行了PCR鉴定,初步鉴定为PRV毒株后,将阳性病料接种非洲绿... 为了解广东省猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)野毒株的基因变异及遗传演化的情况,本试验对广东佛山疑似暴发伪狂犬病的猪场采集的病料(脑、肺脏、扁桃体、肝脏、脾脏)进行了PCR鉴定,初步鉴定为PRV毒株后,将阳性病料接种非洲绿猴肾细胞(Vero),进行毒株传代培养,对分离毒株进行PCR检测及小鼠感染试验,证实该病毒为PRV,并命名为PRV FS-2015株;并对该毒株进行细胞病变观察、病毒TCID50测定、毒株gC和TK基因扩增及序列分析。结果显示,PRV FS-2015株TCID50为10-7.5/0.1mL。PRV FS-2015株的gC和TK基因序列与国内外PRV参考毒株进行同源性比对分析发现,其核苷酸序列同源性分别为95.8%~100.0%和99.4%~100.0%,氨基酸同源性分别为92.3%~100.0%和98.7%~100.0%。遗传进化分析表明,PRV FS-2015株与国内近几年分离的PRV变异株GY、ZJ01、HB1201、HN1201、JS2012、BJ/YT和BP属于同一分支,同源性较高,亲缘关系更近;但与PRV经典株Kaplan、Becker、NIA3、Kolchis、Bartha、Yangsan、Min-A、SS和SL株的同源性较低,基因变异较大,表明PRV FS-2015毒株属于近几年流行的变异株。本研究结果可为广东省伪狂犬病的防控工作和疫苗株的选择提供科学依据。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病毒 分离鉴定 序列分析 GC基因 TK基因 遗传变异

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非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA方法的建立 被引量：5

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作者 徐玲玉 曹琛福 +4 位作者 李中圣 陈俊宏 柳腾飞 王新凯 贾伟新 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期813-821,共9页

旨在建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)血清抗体的阻断ELISA方法。采用原核表达的ASFV p54蛋白作为包被抗原,并制备了针对p54蛋白的单克隆抗体,采用方阵滴定法确定了阻断ELISA方法的最佳反应条件,并对建立的方法进行了敏感性、特异性、重复性... 旨在建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)血清抗体的阻断ELISA方法。采用原核表达的ASFV p54蛋白作为包被抗原,并制备了针对p54蛋白的单克隆抗体,采用方阵滴定法确定了阻断ELISA方法的最佳反应条件,并对建立的方法进行了敏感性、特异性、重复性和符合性评价。结果显示,抗原最佳包被浓度为2.0μg·mL^(-1),抗原包被温度及时间为4℃过夜,被检血清稀释度为1∶40,酶标单抗稀释度为1∶1000,被检血清作用时间为1 h,酶标单抗作用时间为30 min,底物作用时间为10 min。经阴、阳性样品检测和特异性、敏感性试验,当临界值阻断率≥55.2%时,判定为阳性,当阻断率<43.4%时,判定为阴性,介于两者之间判定为可疑。该方法与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、口蹄疫病毒、猪流感病毒、猪伪狂犬病病毒阳性血清不发生交叉反应,特异性好。批内重复试验及批间重复试验的变异系数(CV)均在10%以内。将该方法进行初步应用,并与商品化ELISA试剂盒进行符合性试验,两者的检测符合率为98%。综上表明,建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于ASFV临床样品的抗体检测。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 ASFV 阻断ELISA p54蛋白 单克隆抗体

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伪狂犬病病毒FS-2015株gE和gB基因序列分析 被引量：5

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作者 庞旋飞 练斯南 +4 位作者 伍建敏 万曾培 王征帆 李中圣 白挨泉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第12期3524-3534,共11页

为了解猪伪狂犬病病毒(porcine pesudorabies virus,PRV)gB和gE基因变异及遗传演化情况,本研究针对PRV FS-2015野毒株,应用"蚀斑法"对组织病料中病毒进行三轮纯化,应用全长扩增引物对FS-2015株gB和gE基因进行全基因扩增,并对... 为了解猪伪狂犬病病毒(porcine pesudorabies virus,PRV)gB和gE基因变异及遗传演化情况,本研究针对PRV FS-2015野毒株,应用"蚀斑法"对组织病料中病毒进行三轮纯化,应用全长扩增引物对FS-2015株gB和gE基因进行全基因扩增,并对PCR产物进行测序和序列分析。结果显示,PRV FS-2015株的gB、gE基因与国内外PRV参考毒株的核苷酸同源性分别为97.0%～100.0%和97.5%～99.7%,氨基酸同源性分别为96.4%～100.0%和95.3%～99.7%。氨基酸变异位点分析表明,FS-2015株的gB和gE基因均有位点突变和缺失。遗传进化分析表明,FS-2015株与国内近几年分离的PRV变异株GY、ZJ01、HB1201、HN1201、JS2012、BJ-YT和BP属于同一分支,同源性较高,亲缘关系较近;与PRV经典株Kaplan、Becker、NIA3、Kolchis、Bartha和Yangsan株属于不同分支,同源性较低,亲缘关系较远。从PRV FS-2015毒株与国内外经典毒株和当前国内流行的变异毒株的分析结果可知,PRV FS-2015毒株发生了一定的变异,属于当前国内流行变异毒株。本研究结果为广东省伪狂犬病分子流行病学调查、伪狂犬病的防控和疫苗株挑选工作提供参考数据。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒(PRV) FS-2015株 GB基因 GE基因 序列分析

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PDCoV与TGEV双重实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：6

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作者 王征帆 朱利塞 +6 位作者 王娟 李祎云 向蕊 应碧云 王贵平 贾爱卿 白挨泉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第10期3855-3863,共9页

试验旨在建立快捷、高效而准确的鉴别诊断猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)与传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的双重实时荧光定量PCR方法。通过绘制双重实时荧光定量PCR的标准曲线,检验... 试验旨在建立快捷、高效而准确的鉴别诊断猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)与传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的双重实时荧光定量PCR方法。通过绘制双重实时荧光定量PCR的标准曲线,检验该方法的特异性、敏感性和重复性,并对临床样品进行检测。结果显示,双重实时荧光定量PCR方法的循环阈值与PDCoV和TGEV质粒拷贝数的对数之间存在良好的线性关系,且对应的相关系数分别为R2(P)=0.9994和R2(T)=0.996;能特异性地检测PDCoV和TGEV,而与PEDV、PRV、PRRSV、CSFV和RV无交叉反应,具有较强的特异性;检验PDCoV与TGEV质粒标准品的最低检测限度分别达到2和20拷贝/μL,且分别比常规RT-PCR高1000和100倍,具有较高的敏感度;PDCoV与TGEV的批内和批间重复性检测的Ct均值基本相同,且变异系数(CV)均<2%,具有较好的重复性。用该方法对114份仔猪腹泻样品检测结果显示,PDCoV和TGEV的阳性率分别为5.6%(6/114)和8.8%(10/114),混合感染检出率为4.6%(5/114),比常规RT-PCR具有更高的检出率和敏感性。结果表明,本试验建立的双重实时荧光定量PCR方法具有特异性强、灵敏度高、重复性和稳定性好等优点,适用于病毒早期诊断和批量临床样品检测,为疾病防控、流行病学调查及相关性研究提供了技术支持及数据参考。 展开更多

关键词 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV) 传染性胃肠炎病毒(TGEV) TAQMAN探针 双重实时荧光定量PCR

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猪德尔塔冠状病毒CH7328株的致病性及全基因组序列分析 被引量：1

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作者 王征帆 朱利塞 +6 位作者 李菲 向蕊 李祎云 应碧云 王贵平 白挨泉 贾爱卿 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第11期4143-4153,共11页

为了解猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)CH7328株的致病性,并分析其基因变异和遗传演变规律,试验通过病毒培养、间接免疫荧光试验(IFA)、病毒生长曲线及仔猪致病性试验鉴定病毒的生长特性和致病性,并分析该毒株的全基... 为了解猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)CH7328株的致病性,并分析其基因变异和遗传演变规律,试验通过病毒培养、间接免疫荧光试验(IFA)、病毒生长曲线及仔猪致病性试验鉴定病毒的生长特性和致病性,并分析该毒株的全基因组序列。结果显示,感染PDCoV CH7328株的ST细胞出现肿大变圆、细胞呈碎玻璃状且拉丝、细胞集聚成簇和脱落等病变。IFA结果显示,PDCoV CH7328株主要分布在细胞质中。生长曲线结果显示,PDCoV CH7328株在6 h就已开始增殖,在36 h时达到峰值,对应的TCID_(50)为10^(-8.0)/mL,随后逐渐下降。仔猪致病性结果显示,攻毒组仔猪出现腹泻、脱水和厌食等临床症状,仔猪小肠明显变薄、透明而充盈,小肠绒毛严重脱落、萎缩或减少、肠绒毛细胞坏死等。粪便病原检测结果显示,在攻毒第2天便能检测到病毒,之后排毒持续增加,而正常对照仔猪无任何临床现象。全基因组测序及序列分析显示,PDCoV CH7328株的基因组全长为25420 bp,与国内GD株的相似性最高,达到99.9%;遗传演化结果显示,PDCoV CH7328株与国内HKU15-155、CHN-HN-2014和GD株处在同一进化分支,亲缘关系最近。本研究结果为中国PDCoV疫苗候选株的筛选及猪场疫病防控提供了参考数据和理论依据。 展开更多

关键词 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV) CH7328株 致病性 全基因序列分析

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宝石鲈无乳链球菌的分离鉴定及耐药性分析 被引量：10

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作者 黄木珍 黎炯 +1 位作者 潘忠超 石和荣 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期247-251,共5页

2013年高温季节在广东广州2个养殖场患病宝石鲈(Scortum barcoo)病灶处共分离到2株细菌Py1和Py2。宝石鲈攻毒试验结果显示2株分离菌均具有较强毒力(半致死量分别为7.42×106和1.72×106 CFU/mL),且都对罗非鱼具有高度感染性(半... 2013年高温季节在广东广州2个养殖场患病宝石鲈(Scortum barcoo)病灶处共分离到2株细菌Py1和Py2。宝石鲈攻毒试验结果显示2株分离菌均具有较强毒力(半致死量分别为7.42×106和1.72×106 CFU/mL),且都对罗非鱼具有高度感染性(半致死量分别为3.39×106和8.66×105 CFU/mL)。经ATB生化鉴定及cfb基因序列分析,确定分离株为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae),并对其进行了相关药敏试验检测,以期为该病的预防提供参考。 展开更多

关键词 宝石鲈 无乳链球菌 鉴定 药敏试验

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利用多肽抗原建立同时检测CSFV和PRRSV抗体的胶体金免疫层析方法 被引量：4

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作者 陈善真 林礼锟 +5 位作者 王志花 刘博奇 李中圣 杨洁 王贵平 李其昌 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第11期1-5,共5页

利用合成多肽作为抗原,建立一种同时检测猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的胶体金免疫层析方法。用人工筛选合成的CSFV多肽和PRRSV多肽葡聚糖偶联物作为包被抗原,以多肽-Biotin-链霉亲和素作为胶体金标记物,羊抗猪Ig... 利用合成多肽作为抗原,建立一种同时检测猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的胶体金免疫层析方法。用人工筛选合成的CSFV多肽和PRRSV多肽葡聚糖偶联物作为包被抗原,以多肽-Biotin-链霉亲和素作为胶体金标记物,羊抗猪IgG包被硝酸纤维膜作为质控带,建立了同时检测CSFV和PRRSV抗体的胶体金免疫层析方法(GICA)。结果表明,多肽与葡聚糖和生物素的偶联效率较高,分别为84.65%和91.37%;链霉亲和素与胶体金结合最佳pH和最佳标记量分别为8.2μg/mL和30μg/mL。试纸卡灵敏度试验表明,血清1∶80稀释仍可检出,与Idexx ELISA试剂盒检出结果基本一致,特异性良好,不与伪狂犬病病毒、口蹄疫病毒、猪圆环病毒和细小病毒的阳性血清发生交叉反应。与Idexx ELISA试剂盒平行检测结果表明,CSFV抗体总体符合率为86.36%;PRRSV抗体总体符合率为83.33%。说明利用偶联多肽制备的试纸卡灵敏度高,特异性好,能够同时检测两种病毒抗体,适于基层养殖场使用。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 偶联多肽 胶体金 抗体

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