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基于pyrF的乳酸乳球菌食品级表达载体的构建
被引量：
1
1
作者
王帅
邓木兰
+6 位作者
梁志成
周泓宇
何少媚
张智
穆云萍
李芳红
赵子建
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2024年第9期124-130,共7页
基于pyrF筛选标记和来源于乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)的基因组DNA为表达元件,构建L.lactis食品级表达载体,用于食品和药用多肽的表达和生产。首先,利用NZ3900 pyrF基因列构建同源重组突变盒,构建NZ3900 ΔpyrF突变株;然后...
基于pyrF筛选标记和来源于乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)的基因组DNA为表达元件,构建L.lactis食品级表达载体,用于食品和药用多肽的表达和生产。首先,利用NZ3900 pyrF基因列构建同源重组突变盒,构建NZ3900 ΔpyrF突变株;然后,分别以来源于L.lactis的repA和repC基因为复制元件、pyrF基因为筛选标记、P_(32)和P_(8)为启动子、以及Tusp_(45)和TpepN为终止子,构建食品级表达质粒pLD;最后以绿色荧光蛋白ZsGreen为报告基因,验证ZsGreen在NZ3900 ΔpyrF突变株的表达及pLD-ZsG的遗传稳定性。实验结果表明,原养型ZsGreen阳性转化子可在普通Elliker培养基中正常生长,在荧光显微镜下观察到明显的绿色荧光信号;此外,PCR和Western blotting也证实ZsGreen能在NZ3900中表达且能稳定传代至30代,说明pLD食品级表达载体构建成功且使得外源蛋白在L.lactis中稳定表达。综上所述,基于pyrF营养缺陷型标记构建的L.lactis食品级表达载体的方法切实可行,可为推动L.lactis在食品和药用多肽生产中的应用提供研究基础。
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关键词
pyrF
乳酸乳球菌
食品级表达载体
筛选标记
绿色荧光蛋白
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职称材料
题名
基于pyrF的乳酸乳球菌食品级表达载体的构建
被引量：
1
1
作者
王帅
邓木兰
梁志成
周泓宇
何少媚
张智
穆云萍
李芳红
赵子建
机构
广东工业大学生物医药研究院
华南理工
大学
医学院
深圳
大学
生命与海洋科学学院
出处
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2024年第9期124-130,共7页
基金
国家重点研发计划项目(2018YFA0800603)
国家自然科学基金青年项目(82100064)
+1 种基金
广东省“珠江人才计划”项目(2016ZT06Y432)
广东省重点领域研发计划项目(2019B020201015)。
文摘
基于pyrF筛选标记和来源于乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)的基因组DNA为表达元件,构建L.lactis食品级表达载体,用于食品和药用多肽的表达和生产。首先,利用NZ3900 pyrF基因列构建同源重组突变盒,构建NZ3900 ΔpyrF突变株;然后,分别以来源于L.lactis的repA和repC基因为复制元件、pyrF基因为筛选标记、P_(32)和P_(8)为启动子、以及Tusp_(45)和TpepN为终止子,构建食品级表达质粒pLD;最后以绿色荧光蛋白ZsGreen为报告基因,验证ZsGreen在NZ3900 ΔpyrF突变株的表达及pLD-ZsG的遗传稳定性。实验结果表明,原养型ZsGreen阳性转化子可在普通Elliker培养基中正常生长,在荧光显微镜下观察到明显的绿色荧光信号;此外,PCR和Western blotting也证实ZsGreen能在NZ3900中表达且能稳定传代至30代,说明pLD食品级表达载体构建成功且使得外源蛋白在L.lactis中稳定表达。综上所述,基于pyrF营养缺陷型标记构建的L.lactis食品级表达载体的方法切实可行,可为推动L.lactis在食品和药用多肽生产中的应用提供研究基础。
关键词
pyrF
乳酸乳球菌
食品级表达载体
筛选标记
绿色荧光蛋白
Keywords
pyrF
Lactococcus lactis
food-grade expression vector
selective marker
green fluorescent protein
分类号
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于pyrF的乳酸乳球菌食品级表达载体的构建
王帅
邓木兰
梁志成
周泓宇
何少媚
张智
穆云萍
李芳红
赵子建
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2024
1
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