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miR-137过表达慢病毒的包装和鉴定
1
作者
律东
梁春梅
+4 位作者
李明颖
殷静雯
罗旭东
林举达
马国达
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期694-697,I0002,共5页
目的:构建miR-137过表达慢病毒载体并进一步包装慢病毒,探讨miR-137在HEK293T细胞中的感染效率和表达水平。方法:化学合成miR-137序列并克隆到慢病毒载体GV209,得到并鉴定含有目的片段的重组质粒,采用Lipofectamine 2000共转miR-137重...
目的:构建miR-137过表达慢病毒载体并进一步包装慢病毒,探讨miR-137在HEK293T细胞中的感染效率和表达水平。方法:化学合成miR-137序列并克隆到慢病毒载体GV209,得到并鉴定含有目的片段的重组质粒,采用Lipofectamine 2000共转miR-137重组质粒与慢病毒辅助包装质粒到HEK293T细胞中生产慢病毒。以感染复数(MOI)值为40感染HEK293T细胞48h后,荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,采用荧光定量PCR法检测HEK293T细胞中miR-137的表达水平。结果:测序结果,目的基因序列与GenBank公布的miR-137基因序列完全一致。在感染的HEK293T细胞中观察到GFP的表达。过表达慢病毒感染细胞中miR-137表达水平是对照细胞的12.74倍。结论:成功包装miR-137过表达慢病毒,并可高效感染HEK293T细胞。
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关键词
miR-137
慢病毒
HEK293T细胞
绿色荧光蛋白
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题名
miR-137过表达慢病毒的包装和鉴定
1
作者
律东
梁春梅
李明颖
殷静雯
罗旭东
林举达
马国达
机构
广东医科大学附属医院精神心理科
广东
医科
大学
神经病学研究所
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期694-697,I0002,共5页
基金
国家自然科学基金资助课题(81670252)
广东省科技厅自然科学基金资助课题(2015A030313523)
广东省湛江市科技局科技计划项目资助课题(2016A01008)
文摘
目的:构建miR-137过表达慢病毒载体并进一步包装慢病毒,探讨miR-137在HEK293T细胞中的感染效率和表达水平。方法:化学合成miR-137序列并克隆到慢病毒载体GV209,得到并鉴定含有目的片段的重组质粒,采用Lipofectamine 2000共转miR-137重组质粒与慢病毒辅助包装质粒到HEK293T细胞中生产慢病毒。以感染复数(MOI)值为40感染HEK293T细胞48h后,荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,采用荧光定量PCR法检测HEK293T细胞中miR-137的表达水平。结果:测序结果,目的基因序列与GenBank公布的miR-137基因序列完全一致。在感染的HEK293T细胞中观察到GFP的表达。过表达慢病毒感染细胞中miR-137表达水平是对照细胞的12.74倍。结论:成功包装miR-137过表达慢病毒,并可高效感染HEK293T细胞。
关键词
miR-137
慢病毒
HEK293T细胞
绿色荧光蛋白
Keywords
miR-137
lentivirus
HEK293T cell
green fluorescent protein
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
miR-137过表达慢病毒的包装和鉴定
律东
梁春梅
李明颖
殷静雯
罗旭东
林举达
马国达
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017
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