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orexin-1受体抑制剂通过Wnt通路促进骨髓间充质干细胞的成骨分化 被引量:3
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作者 张丽媛 纳青青 +3 位作者 吴天秀 李近 吴敬开 刘钰瑜 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期606-611,共6页
目的研究Wnt/β-catenin信号通路对orexin-1受体抑制剂介导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法(1)分离提取SD大鼠股骨、胫骨的BMSCs,用流式细胞仪进行细胞表型鉴定;(2)实验分组:对照组、10-5mol/L、10-6mol/L质量浓度的or... 目的研究Wnt/β-catenin信号通路对orexin-1受体抑制剂介导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法(1)分离提取SD大鼠股骨、胫骨的BMSCs,用流式细胞仪进行细胞表型鉴定;(2)实验分组:对照组、10-5mol/L、10-6mol/L质量浓度的orexin-1受体抑制剂溶液,于成骨诱导第5天免疫印迹法和实时荧光定量PCR法观察Wnt/β-catenin信号通路关键靶点蛋白Dickkopf-1、Gsk3β、β-catenin以及基因Gsk3β、β-catenin mRNA表达,以观察Wnt信号通路对orexin-1受体抑制剂诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。结果 10^(-5)mol/L、10^(-6)mol/L的orexin-1受体抑制剂处理BMSCs5天后,Dickkopf-1、β-catenin和GSK3β蛋白表达升高,β-catenin和GSK3βmRNA表达升高。结论 orexin-1受体抑制剂促进大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞方向分化的作用可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 WNT/Β-CATENIN信号通路 成骨分化
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脑源性神经营养因子过表达慢病毒载体及稳定表达脂肪干细胞株的建立 被引量:2
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作者 陆睿 彭誉 +10 位作者 刘亦恒 马志健 付媛 陈明会 李剑星 杨浩池 许革新 李博 符玲玲 冯素文 张海英 《海南医学院学报》 CAS 2018年第24期2107-2111,共5页
目的:构建携带脑源性神经营养因子(BDNF)的重组慢病毒载体,并转染构建高表达BDNF的小鼠脂肪干细胞株。方法:构建pHBLV-CMVIE-BDNF-ZsGreen-Puro慢病毒载体,测序鉴定载体构建情况,转染包装293T细胞,荧光显微镜下观察转染情况。收集到的... 目的:构建携带脑源性神经营养因子(BDNF)的重组慢病毒载体,并转染构建高表达BDNF的小鼠脂肪干细胞株。方法:构建pHBLV-CMVIE-BDNF-ZsGreen-Puro慢病毒载体,测序鉴定载体构建情况,转染包装293T细胞,荧光显微镜下观察转染情况。收集到的病毒上清转染小鼠脂肪干细胞,Real-time PCR检测各组细胞BDNF mRNA水平,Western blotting法检测细胞中BDNF表达。结果:经测序鉴定成功构建了pHBLV-CMVIE-BDNF-ZsGreen-Puro慢病毒载体。小鼠脂肪干细胞内BDNF mRNA水平及蛋白表达升高。结论:本研究成功构建了BDNF慢病毒载体,建立了BDNF稳定表达的小鼠脂肪干细胞株,为BDNF基因修饰的脂肪干细胞在AD治疗的潜在应用打下基础。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 脂肪干细胞 慢病毒载体 脑源性神经营养因子
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Orexin-1受体抑制剂对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响 被引量:3
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作者 张丽媛 纳青青 吴天秀 《医药导报》 CAS 2017年第10期1103-1107,共5页
目的探讨orexin-1受体抑制剂对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨分化的影响。方法提取SD大鼠BMSCs并鉴定,配制10^(-2),10^(-3),10^(-4),10^(-5),10^(-6)mol·L^(-1)不同浓度的orexin-1受体抑制剂溶液,分别与第3代BMSCs共培养后,... 目的探讨orexin-1受体抑制剂对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨分化的影响。方法提取SD大鼠BMSCs并鉴定,配制10^(-2),10^(-3),10^(-4),10^(-5),10^(-6)mol·L^(-1)不同浓度的orexin-1受体抑制剂溶液,分别与第3代BMSCs共培养后,应用噻唑蓝(MTT)法检测orexin-1受体抑制剂对BMSCs增殖的影响。对硝基苯磷酸盐法和双抗体两步夹心酶联免疫吸附法检测碱性磷酸酶和骨钙素,实时荧光定量PCR法检测成骨分化相关基因Runx2、Col1a1 mRNA。结果orexin-1受体抑制剂最佳促BMSCs增殖浓度为1×10^(-4)mol·L^(-1)。10^(-4),10^(-5),10^(-6)mol·L^(-1)orexin-1受体抑制剂作用3,5,7 d能升高BMSCs胞浆内碱性磷酸酶表达,差异有统计学意义(P<0.05),而且这种作用在第5天达到高峰。10^(-4),10^(-5),10^(-6)mol·L^(-1)orexin-1受体抑制剂作用7 d可使骨钙素含量升高(P<0.05)。10^(-4),10^(-5),10^(-6)mol·L^(-1)orexin-1受体抑制剂上调Runx2、COL1A1 mRNA表达。结论 orexin-1受体抑制剂可促进BMSCs增殖,同时促进其向成骨细胞方向分化,促进BMSCs表达碱性磷酸酶刺激骨钙素的分泌。 展开更多
关键词 orexin-1受体抑制剂 骨髓间充质干细胞 碱性磷酸酶 骨钙素
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干细胞治疗阿尔兹海默病的研究现状 被引量:5
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作者 杨浩池 张海英 +1 位作者 张云霞 付媛 《海南医学院学报》 CAS 2020年第11期876-880,共5页
阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,AD)是一种以进行性的记忆丧失和认知功能障碍为特征的神经退行性疾病,目前仍无有效治疗手段。鉴于当前干细胞研究的深入,研究人员尝试使用干细胞技术代偿阿尔茨海默病患者脑内的神经元丢失。本文将... 阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,AD)是一种以进行性的记忆丧失和认知功能障碍为特征的神经退行性疾病,目前仍无有效治疗手段。鉴于当前干细胞研究的深入,研究人员尝试使用干细胞技术代偿阿尔茨海默病患者脑内的神经元丢失。本文将对AD的发病机制、干细胞治疗的最新进展及其发展的挑战和前景进行综述。 展开更多
关键词 干细胞 阿尔兹海默病 组织工程 神经退行性疾病
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甲硝唑诱导斑马鱼骨丢失模型的建立 被引量:2
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作者 张丽媛 纳青青 周丽敏 《医药导报》 CAS 北大核心 2022年第1期30-34,共5页
目的通过构建甲硝唑诱导胰岛β细胞破坏的转基因斑马鱼骨丢失的动物模型,为寻找可保护胰岛β细胞的促骨形成药物提供经济便捷的平台。方法用酶切鉴定正确的重组质粒p-IsceI-INS:nfsB进行显微注射,建立胰岛β细胞转基因斑马鱼系。选用受... 目的通过构建甲硝唑诱导胰岛β细胞破坏的转基因斑马鱼骨丢失的动物模型,为寻找可保护胰岛β细胞的促骨形成药物提供经济便捷的平台。方法用酶切鉴定正确的重组质粒p-IsceI-INS:nfsB进行显微注射,建立胰岛β细胞转基因斑马鱼系。选用受精后30 h的转基因斑马鱼胚胎分别暴露于5,10,15μmol·L^(-1)甲硝唑溶液中,作为甲硝唑组;同时设1%二甲亚砜溶媒作为阴性对照组,nfsB蛋白将无毒性的前体药物转变为细胞毒素,在活体直接破坏胰岛β细胞。48 h后及时更换胚胎养殖水终止甲硝唑的破坏作用,常规28.5℃下在24孔板中培养至斑马鱼颅骨形成。测定斑马鱼血糖水平,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒定量测定糖基化终产物;采用茜素红对斑马鱼骨骼进行染色,以显微检测、数码成像方法定量分析骨骼染色区域。结果与阴性对照组比较,5,10,15μmol·L^(-1)甲硝唑组斑马鱼骨骼染色面积和累计吸光度显著减小,提示利用甲硝唑破坏胰岛β细胞构建转基因斑马鱼的骨骼矿化量和骨密度都显著降低,成功诱导斑马鱼骨丢失模型。并用该模型成功验证依替膦酸二钠防治骨质疏松的作用。结论成功构建破坏胰岛β细胞诱导转基因斑马鱼骨丢失模型,为在整体动物水平筛选可保护胰岛β细胞的促骨形成的小分子化合物和中草药提供一个新型的动物模型。 展开更多
关键词 甲硝唑 胰岛Β细胞 骨质疏松 斑马鱼
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