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PRDM5过表达慢病毒载体的构建及稳定转染Neuro-2a细胞的建立: 1; 作者吴钊淳李友 +2 位作者何嘉文廖科棋李胜男《吉林大学学报(医学版)》北大核心 2025年第1期1-8,共8页; 目的:构建PR锌指区域蛋白(PRDM)5基因的过表达慢病毒载体,建立稳定转染的小鼠神经瘤母细胞Neuro-2a,为探讨PRDM5在缺血性脑卒中(IS)发病机制中的作用奠定基础。方方法法:在NCBI上搜索PRDM5的序列并设计引物,PCR法扩增获取PRDM5基因序列... 展开更多; 关键词 PR锌指区域蛋白过表达慢病毒载体稳定表达 Neuro-2a细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

胞质分裂作用因子4过表达慢病毒载体的构建和稳定转染Neuro-2a细胞的建立: 2; 作者李胜男何嘉文 +1 位作者廖科棋李友《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1322-1329,共8页; 目的:构建胞质分裂作用因子4(DOCK4)过表达慢病毒载体,建立DOCK4稳定过表达的Neuro-2a细胞。方法:在美国国家生物信息中心(NCBI)查找DOCK4的序列并设计合成引物,采用聚合酶链式反应(PCR)法扩增获取DOCK4基因序列,通过Bam HⅠ和AgeⅠ限... 展开更多; 关键词胞质分裂作用因子4 过表达慢病毒载体 Neuro-2a细胞稳定转染过表达慢病毒; 在线阅读下载PDF 职称材料

EIF4A3 shRNA慢病毒载体的构建及其稳定转染细胞系的建立: 3; 作者何嘉文李友 +1 位作者廖科棋李胜男《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期831-839,共9页; 目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和... 展开更多; 关键词真核细胞翻译起始因子4A3 短发夹RNA 慢病毒稳定转染细胞系 Neuro-2a细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

SOX17过表达慢病毒载体和稳定转染细胞系的构建: 4; 作者黄少婷李友 +3 位作者吴钊淳何嘉文廖科棋李胜男《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1424-1430,共7页; 目的:构建性别决定区Y盒17 (SOX17)过表达慢病毒载体,使用SOX17过表达慢病毒感染PC12细胞并建立稳定过表达SOX17的细胞系。方法:在NCBI数据库中查找、设计并合成SOX17过表达序列,将其与经Bam HⅠ和AgeⅠ双酶切的慢病毒GV492载体连接,构... 展开更多; 关键词性别决定区Y盒17 慢病毒载体 PC12细胞实时荧光定量PCR 感染复数; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名PRDM5过表达慢病毒载体的构建及稳定转染Neuro-2a细胞的建立: 1; 作者吴钊淳李友何嘉文廖科棋李胜男; 机构广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室广东医科大学附属医院神经病学研究所; 出处《吉林大学学报(医学版)》北大核心 2025年第1期1-8,共8页; 基金国家自然科学基金项目(81571157) 广东省基础与应用基础研究基金委员会自然科学基金面上项目(2023A1515012750) +1 种基金广东医科大学百项青年研究项目资助计划项目(GDMUD2022010)。; 文摘目的:构建PR锌指区域蛋白(PRDM)5基因的过表达慢病毒载体,建立稳定转染的小鼠神经瘤母细胞Neuro-2a,为探讨PRDM5在缺血性脑卒中(IS)发病机制中的作用奠定基础。方方法法:在NCBI上搜索PRDM5的序列并设计引物,PCR法扩增获取PRDM5基因序列,将其与Bam HⅠ和AgeⅠ限制性内切酶双酶切后的慢病毒载体GV492进行连接,构建GV492-PRDM5过表达重组质粒,采用PCR法筛选并鉴定出的与目的基因片段长度相近的阳性克隆送生工生物工程(上海)股份有限公司测序。将测序正确的GV492-control质粒和GV492-PRDM5过表达重组质粒分别转染至人胚胎肾细胞HEK293T中,转染48 h后离心收集慢病毒,分别为GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒,采用慢病毒滴度测定法检测上述2种慢病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为GV492-control组和GV492-PRDM5组,分别使用GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,感染72 h后使用嘌呤霉素(10 mg·L^(-1))对成功感染GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒的Neuro-2a细胞进行筛选,通过荧光显微镜观察GV492-control组和GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞的生长状态及绿色荧光蛋白的表达情况。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组Neuro-2a细胞中PRDM5 mRNA表达水平;Western blotting法检测2组Neuro-2a细胞中PRDM5蛋白表达水平。结果:PCR法,GV492-PRDM5重组质粒阳性转化子的长度约为684 bp,GV492-PRDM5过表达重组质粒基因序列与设计合成的PRDM5过表达序列一致;GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒的滴度均为2.5×108 TU·mL^(-1)。荧光显微镜,GV492-control组和GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞的生长状态均良好,且能观察到绿色荧光蛋白的表达。RT-qPCR法,与GV492-control组比较,GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞中PRDM5 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。Western blotting法,GV492-control组和GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞在相对分子质量为75000附近出现特异性条带;与GV492-control组比较,GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞中PRDM5蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:成功构建PRDM5过表达慢病毒载体,建立了稳定转染的GV492-PRDM5-Neuro-2a细胞。; 关键词 PR锌指区域蛋白过表达慢病毒载体稳定表达 Neuro-2a细胞; Keywords PRDI-BF1 and RIZ domain proteins Over-expression lentivirus vector Stable expression Neuro-2a cells; 分类号 R543.5 [医药卫生—心血管疾病]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名胞质分裂作用因子4过表达慢病毒载体的构建和稳定转染Neuro-2a细胞的建立: 2; 作者李胜男何嘉文廖科棋李友; 机构广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室广东医科大学附属医院神经病学研究所; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1322-1329,共8页; 基金国家自然科学基金资助项目(81571157) 广东省基础与应用基础研究基金委员会科研项目(2023A1515012750) +1 种基金广东医科大学科技处广东医科大学百项青年研究项目(GDMUD2022010)。; 文摘目的:构建胞质分裂作用因子4(DOCK4)过表达慢病毒载体,建立DOCK4稳定过表达的Neuro-2a细胞。方法:在美国国家生物信息中心(NCBI)查找DOCK4的序列并设计合成引物,采用聚合酶链式反应(PCR)法扩增获取DOCK4基因序列,通过Bam HⅠ和AgeⅠ限制性内切酶酶切后,将其与酶切后的慢病毒载体GV492进行连接,构建GV492-DOCK4过表达重组质粒,PCR法鉴定筛选出与目的基因片段长度大小相近的阳性克隆。将GV492-对照质粒和GV492-DOCK4过表达重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为GV492-对照组和GV492-DOCK4组,分别采用GV492-对照组慢病毒和GV492-DOCK4过表达慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,感染72 h后采用嘌呤霉素(10 mg·L^(-1))筛选出成功感染GV492-对照组慢病毒和GV492-DOCK4过表达慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞生长状态及绿色荧光蛋白表达情况;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中DOCK4 mRNA和DOCK4蛋白表达水平。结果:PCR检测,GV492-DOCK4过表达重组质粒的基因片段长度约为691 bp,测序结果显示GV492-DOCK4过表达重组质粒基因序列与设计合成的DOCK4过表达序列一致;GV492-对照组和GV492-DOCK4过表达组慢病毒的滴度分别为2.5×10^(8) TU·mL^(-1)和2.5×10^(8) TU·mL^(-1);荧光显微镜观察,各组Neuro-2a细胞生长状态良好且存在绿色荧光蛋白表达;RT-qPCR法检测,与GV492-对照组比较,GV492-DOCK4组Neuro-2a细胞中DOCK4 mRNA表达水平明显升高(P<0.01);Western blotting法检测,各组细胞在相对分子质量225000附近出现特异性条带,与GV492-对照组比较,GV492-DOCK4组Neuro-2a细胞中DOCK4蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:本研究成功构建DOCK4过表达慢病毒载体,建立了稳定过表达DOCK4的Neuro-2a细胞。; 关键词胞质分裂作用因子4 过表达慢病毒载体 Neuro-2a细胞稳定转染过表达慢病毒; Keywords Dedicator of cytokinesis 4 Over-expression lentivirus vector Neuro-2a cell Stable transfection Over-expression lentivirus; 分类号 R743.3 [医药卫生—神经病学与精神病学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名EIF4A3 shRNA慢病毒载体的构建及其稳定转染细胞系的建立: 3; 作者何嘉文李友廖科棋李胜男; 机构广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室广东医科大学附属医院神经病学研究所; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期831-839,共9页; 基金国家自然科学基金项目(81571157) 广东省卫生厅医学科研基金项目(A2022139,A2023193) 湛江市科学技术局科技攻关计划项目(2021B01370)。; 文摘目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和AgeⅠ酶切的慢病毒GV493载体,构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒质粒,PCR筛选阳性克隆并测序鉴定。将GV493空载质粒和GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为GV493对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为空白组、GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组,空白组不作处理,GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组分别采用相应慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,使用10 mg·L-1嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞的生长状态和绿色荧光表达情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中EIF4A3 mRNA及蛋白表达水平。结果:PCR测序结果显示GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒基因序列与设计合成的EIF4A3-shRNA序列一致,成功构建GV493-EIF4A3慢病毒载体。荧光显微镜观察可见HEK293T细胞荧光表达强烈,生长状态良好,慢病毒包装成功。GV493-对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒的滴度均为2×10~8 TU·mL^(-1),GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞生长状态良好且表达绿色荧光,表明慢病毒感染稳定细胞系构建成功。RT-qPCR法,与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3shRNA组Neuro-2a细胞EIF4A3mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。Western blotting法,各组在相对分子质量49000处出现特异性条带,提示Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达成功;与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:成功构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒载体,建立了Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系,为EIF4A3在颅内动脉粥样硬化的作用机制研究提供了参考。; 关键词真核细胞翻译起始因子4A3 短发夹RNA 慢病毒稳定转染细胞系 Neuro-2a细胞; Keywords Eukaryotic translation initiation factor 4A3 Short hairpin RNA Lentivirus Stable transfection cell line Neuro-2a cell; 分类号 R392 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名SOX17过表达慢病毒载体和稳定转染细胞系的构建: 4; 作者黄少婷李友吴钊淳何嘉文廖科棋李胜男; 机构广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室广东医科大学附属医院神经病学研究所; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1424-1430,共7页; 基金国家自然科学基金项目(81571157) 广东省卫生厅医学科研基金项目(A2022139) +1 种基金广东医科大学青年培育基金项目(GDMUQ2021006)。; 文摘目的:构建性别决定区Y盒17 (SOX17)过表达慢病毒载体,使用SOX17过表达慢病毒感染PC12细胞并建立稳定过表达SOX17的细胞系。方法:在NCBI数据库中查找、设计并合成SOX17过表达序列,将其与经Bam HⅠ和AgeⅠ双酶切的慢病毒GV492载体连接,构建GV492-SOX17过表达重组质粒。琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物,筛选携带GV492-SOX17过表达重组质粒的阳性菌,克隆后测序。将GV492空载质粒和GV492-SOX17过表达重组质粒分别转染至人胚肾HEK 293T细胞中,转染48 h后收集GV492对照慢病毒和GV492-SOX17过表达慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将PC12细胞分为空白组、GV492对照组和GV492-SOX17组,空白组不作处理,GV492对照组和GV492-SOX17组分别采用相应慢病毒感染细胞(感染复数=100),10 mg·L^(-1)嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的PC12细胞,荧光显微镜观察各组PC12细胞生长状态及绿色荧光表达情况。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组PC12细胞中SOX17 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组PC12细胞中SOX17蛋白表达水平。结果:GV492-SOX17过表达重组质粒的基因片段长度约为744 bp,GV492-SOX17过表达重组质粒基因序列与设计合成的SOX17过表达序列一致。GV492对照慢病毒和GV492-SOX17过表达慢病毒滴度均为2.5×108TU·mL^(-1)。各组PC12细胞生长状态良好且有绿色荧光表达。RT-qPCR法检测,与空白组和GV492对照组比较,GV492-SOX17组PC12细胞中SOX17 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。Western blotting法检测,各组细胞在相对分子质量44 000处出现特异性条带,提示PC12细胞中SOX17蛋白表达成功;与空白组和GV492对照组比较,GV492-SOX17组PC12细胞中SOX17蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:成功构建了GV492-SOX17慢病毒表达载体,建立了稳定过表达GV492-SOX17的PC12细胞系。; 关键词性别决定区Y盒17 慢病毒载体 PC12细胞实时荧光定量PCR 感染复数; Keywords Sex-determined region Y box 17 Lentiviral vector PC12 cells Real-time fluorescence quantitative PCR Multiplicity of infection; 分类号 Q254 [生物学—细胞生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	操作
1	PRDM5过表达慢病毒载体的构建及稳定转染Neuro-2a细胞的建立	吴钊淳李友何嘉文廖科棋李胜男	《吉林大学学报(医学版)》北大核心	2025	在线阅读下载PDF 职称材料
2	胞质分裂作用因子4过表达慢病毒载体的构建和稳定转染Neuro-2a细胞的建立	李胜男何嘉文廖科棋李友	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2024	在线阅读下载PDF 职称材料
3	EIF4A3 shRNA慢病毒载体的构建及其稳定转染细胞系的建立	何嘉文李友廖科棋李胜男	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2024	在线阅读下载PDF 职称材料
4	SOX17过表达慢病毒载体和稳定转染细胞系的构建	黄少婷李友吴钊淳何嘉文廖科棋李胜男	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2023	在线阅读下载PDF 职称材料