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SETD2基因敲除前后鼻咽癌细胞中定量蛋白组学研究及差异信号富集 被引量:2
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作者 曾玉梅 王思思 +4 位作者 封慕茵 邵钟铭 袁建玲 申志华 揭伟 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1191-1199,共9页
目的分析甲基转移酶SETD2表达改变对人鼻咽癌(NPC)细胞中蛋白表达谱的影响并富集差异信号通路。方法提取SETD2基因敲除细胞株CNE1SETD2-KO和野生型细胞CNE1WT的总蛋白,利用Tandem Mass Tag(TMT)标记蛋白质定量技术和串联质谱分析技术筛... 目的分析甲基转移酶SETD2表达改变对人鼻咽癌(NPC)细胞中蛋白表达谱的影响并富集差异信号通路。方法提取SETD2基因敲除细胞株CNE1SETD2-KO和野生型细胞CNE1WT的总蛋白,利用Tandem Mass Tag(TMT)标记蛋白质定量技术和串联质谱分析技术筛选出差异表达蛋白质,应用GO数据库对差异表达蛋白质进行注释和富集,应用KEGG数据库进行差异蛋白质涉及信号通路富集。结果以表达倍数(FC)≥1.2倍且P<0.05为筛选标准,SETD2基因敲除的CNE1细胞鉴别出2049个差异表达蛋白质,其中904个表达上调,1145个表达下调。GO功能注释结果表明,SETD2敲除后在生物过程(细胞过程及调节,细胞运动、代谢过程及细胞组分的生物合成)、分子功能(催化活性及分子结合、转录因子活性)和细胞组分(胞膜、细胞器、大分子复合物)等具有特征性。KEGG信号富集结果表明SETD2敲除主要影响与肿瘤关系密切的信号有MAPK、PI3K-Akt、Ras、Rap1、mTOR、Hippo、HIF-1、Wnt、AMPK、FoxO、ErbB、p53、JAK-STAT等。结论SETD2敲除后显著改变了NPC细胞中蛋白质表达特征并影响多条与肿瘤关系密切的信号通路,研究结果为NPC的发病机制和治疗标靶筛选提供了参考。 展开更多
关键词 鼻咽癌 SETD2 TMT标记定量蛋白组学 生物信息学
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Rnd3表达改变对糖尿病大鼠内皮祖细胞生物学特性的影响 被引量:6
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作者 张书娅 邵钟铭 +4 位作者 伍彩霞 刘晓晓 邹园 揭伟 郭峻莉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期834-840,共7页
目的:探讨糖尿病状态下Rho家族GTP酶3(Rnd3)表达改变对骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)一般生物学特性的影响。方法:高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素建立野生型及Rnd3基因敲除杂合子(Rnd3^(+/-))SD大鼠糖尿病模型。建模成功后,分离、培养各组... 目的:探讨糖尿病状态下Rho家族GTP酶3(Rnd3)表达改变对骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)一般生物学特性的影响。方法:高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素建立野生型及Rnd3基因敲除杂合子(Rnd3^(+/-))SD大鼠糖尿病模型。建模成功后,分离、培养各组大鼠骨髓源性EPCs并鉴定。CCK-8法测定细胞活力,Western blot检测各组EPCs中凋亡相关蛋白caspase-3和Bcl-2的表达,Transwell实验测定迁移能力,ELISA检测各组细胞分泌的血管内皮生长因子(VEGF)的水平,Matrigel成管实验检测EPCs管样结构形成能力。结果:高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素成功复制SD大鼠糖尿病模型。成功分离大鼠骨髓源性EPCs。糖尿病状态降低了EPCs的活力、迁移和旁分泌VEGF的能力,抑制了EPCs的Matrigel内成管能力,上述情况在Rnd3敲除后更明显。Rnd3敲除后Bcl-2水平下降而caspase-3表达上调。结论:Rnd3表达的维持对骨髓源性EPCs的增殖、迁移和血管生成等一般生物学特性具有正性调节作用。Rnd3表达不足加剧了糖尿病对EPCs一般生物学功能的损伤。 展开更多
关键词 内皮祖细胞 糖尿病 Rho家族GTP酶3 细胞活力 细胞迁移 血管新生
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血清反应因子全长及N端片段过表达慢病毒载体的构建及其对心脏干细胞分化的影响 被引量:4
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作者 雷洪 王可可 +5 位作者 哈艳平 贾亚楠 李汝佳 申志华 郭峻莉 揭伟 《临床与实验病理学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第10期1109-1115,共7页
目的探讨血清反应因子全长(SRF-Full)及N端片段(SRF-N,1-254aa)对TGF-β1诱导c-Kit+心脏干细胞(cardiac stem cell,CSC)分化的影响。方法从c DNA文库扩增大鼠SRF-Full及SRF-N表达序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV358(Ubi-MCS-3FLAG-S... 目的探讨血清反应因子全长(SRF-Full)及N端片段(SRF-N,1-254aa)对TGF-β1诱导c-Kit+心脏干细胞(cardiac stem cell,CSC)分化的影响。方法从c DNA文库扩增大鼠SRF-Full及SRF-N表达序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV358(Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin),转化感受态细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定。将SRF-Full及SRF-N过表达质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装慢病毒。磁激活细胞分选法分离乳SD大鼠c-Kit+CSC,将SRF-Full及SRF-N过表达慢病毒感染CSC并经TGF-β1诱导,定量PCR分析下游分化基因mRNA水平的变化。结果成功扩增出SRF-Full及SRF-N编码序列并正确连接入线性化载体,获得的阳性转化子经测序无误。将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为2×108TU/m L的慢病毒颗粒,Western blot检测到预期Flag融合蛋白。重组慢病毒感染CSC后细胞核中见e GFP信号。TGF-β1诱导CSC出现心肌细胞分化基因(Nkx2.5、Gata4、c Tn I)及平滑肌细胞分化基因(SM22α)的表达,内皮细胞分化(v WF)无影响,SRF-Full促进CSC的心肌细胞分化,而SRF-N则抑制这种分化。结论成功构建SRFFull及SRF-N过表达重组慢病毒质粒。SRF-Full促进而SRF-N减弱TGF-β1诱导CSC的心肌细胞分化。 展开更多
关键词 血清反应因子 血清反应因子N端片段 质粒构建 心脏干细胞 细胞分化
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低氧刺激通过HIF-1α直接调节Myocardin表达促进骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化 被引量:2
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作者 哈艳平 刘晓晓 +5 位作者 邵钟铭 邹园 伍彩霞 郭峻莉 申志华 揭伟 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1038-1043,共6页
目的探讨低氧刺激在骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)向心肌细胞谱系分化过程中对心肌素(Myocardin)表达的影响及机制。方法分离Sprague Dawley大鼠股骨BMSC,磁激活细胞分选法获得c-Kit^(+)细胞亚群。分别用H... 目的探讨低氧刺激在骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)向心肌细胞谱系分化过程中对心肌素(Myocardin)表达的影响及机制。方法分离Sprague Dawley大鼠股骨BMSC,磁激活细胞分选法获得c-Kit^(+)细胞亚群。分别用HIF-1α过表达慢病毒感染或物理性低氧(2%O2)刺激c-Kit^(+)BMSC,定量RT-PCR检测HIF-1α、Myocardin和心肌细胞分化基因(Nkx2.5、cTnT)的mRNA水平,免疫荧光检测Myocardin和cTnT蛋白表达,双荧光素酶报告基因法检测HIF-1α对Myocardin启动子活性的影响。结果HIF-1α过表达慢病毒感染和物理性低氧刺激均诱导c-Kit^(+)BMSC中Myocardin和心肌细胞分化标志基因Nkx2.5、cTnT的表达水平明显增高。shRNA抑制Myocardin后一定程度上减弱低氧诱导的c-Kit^(+)BMSC心肌细胞样分化。HIF-1α可直接上调Myocardin启动子活性。结论低氧刺激可通过HIF-1α直接上调Myocardin表达,进而促进c-Kit^(+)BMSC向心肌样细胞分化。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 心肌样细胞分化 低氧 HIF-1Α MYOCARDIN
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组蛋白甲基化转移酶SETD4对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响 被引量:1
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作者 封慕茵 郑阿秀 +4 位作者 白建荣 曾玉梅 罗泊涛 申志华 揭伟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期259-268,共10页
目的:明确组蛋白甲基化转移酶含SET结构域蛋白4 (SET-domain-containing protein 4, SETD4)在临床鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)组织中的表达,分析SETD4对NPC细胞增殖和迁移的影响。方法:采用免疫组织化学法检测86例临床NPC标... 目的:明确组蛋白甲基化转移酶含SET结构域蛋白4 (SET-domain-containing protein 4, SETD4)在临床鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)组织中的表达,分析SETD4对NPC细胞增殖和迁移的影响。方法:采用免疫组织化学法检测86例临床NPC标本与对照组30例鼻咽黏膜慢性炎症(nasopharyngeal chronic inflammation,NPI)组织中SETD4蛋白的表达;基于CRISPR/Cas9技术敲除CNE2细胞中SETD4基因,DNA测序结合半定量RTPCR进行鉴定;以SETD4敲除前后的CNE2细胞为研究对象,于倒置显微镜下观察细胞形态,采用CCK-8实验分析细胞增殖活性、Transwell实验观察细胞迁移能力变化、Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、细胞周期相关蛋白、上皮-间充质转化标志物和组蛋白赖氨酸甲基化的变化,并通过生物信息学富集SETD4相关联的功能和信号通路。结果:SETD4蛋白主要定位于NPC细胞核中,NPC组织中SETD4阳性表达率显著低于NPI对照组(P<0.01)。基于CRISPR/Cas9技术成功敲除了CNE2细胞的SETD4基因,获得基因敲除的纯合子细胞。与野生型(wild-type, WT)细胞株相比,SETD4敲除(knockout, KO)细胞株呈现更明显的梭形和多角形,增殖活性和迁移能力均显著增加(P<0.01),E-cadherin和p21蛋白表达显著下调(P<0.05),而cyclin D1、cyclin E1、Ncadherin和vimentin蛋白表达则显著上调(P<0.05)。此外,与WT组相比,SETD4KO组细胞中H3K4me2、H3K4me3、H3K9me1、H3K27me3、H3K79me2和H4K20me2水平显著降低(P<0.05)。基因集富集结果显示,SETD4与细胞周期的功能和信号通路相关。结论:临床NPC组织中SETD4蛋白的表达减弱或缺失;SETD4表达减弱通过上调细胞周期相关蛋白促进NPC细胞增殖,通过诱导上皮-间充质转化而促进细胞迁移;SETD4影响NPC细胞中H3K4、H3K9、H3K27、H3K79和H4K20多个位点的甲基化。 展开更多
关键词 鼻咽癌 组蛋白甲基转移酶 含SET结构域蛋白4 细胞增殖 细胞迁移 基因集富集
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SATB1高表达通过促进上皮-间充质转化而介导鼻咽癌细胞侵袭和转移 被引量:9
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作者 贾亚楠 王可可 +6 位作者 王思思 廖晓敏 封慕茵 袁建玲 邵钟铭 揭伟 申志华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1578-1585,共8页
目的:探讨鼻咽癌(NPC)中特殊富含AT序列结合蛋白1(SATB1)的表达及其与肿瘤侵袭和转移的关系。方法:免疫组化检测76例临床NPC及61例对照鼻咽黏膜慢性炎症(NPI)组织样本中SATB1、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达,... 目的:探讨鼻咽癌(NPC)中特殊富含AT序列结合蛋白1(SATB1)的表达及其与肿瘤侵袭和转移的关系。方法:免疫组化检测76例临床NPC及61例对照鼻咽黏膜慢性炎症(NPI)组织样本中SATB1、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达,并分析NPC中SATB1与患者临床参数、E-cadherin和vimentin表达的相关性。体外培养不同分化状态的NPC细胞系CNE1、CNE2Z及C666-1,筛选出SATB1高表达细胞系,采用小干扰RNA(siRNA)沉默SATB1表达后,分析上皮-间充质转化(EMT)相关分子的表达及细胞侵袭能力的改变。结果:临床鼻咽组织中SATB1表达定位于胞质和胞核,NPC组中SATB1阳性表达率显著高于对照NPI组(P<0.01);E-cadherin在NPI黏膜上皮中呈膜阳性表达,NPC中膜表达水平下降,但出现胞质阳性。NPI中E-cadherin膜阳性率为100%,显著高于NPC的32.89%(P<0.01)。Vimentin呈胞质阳性,NPI上皮细胞中均阴性,但NPC中阳性率为51.32%(P<0.01)。NPC中SATB1高表达与患者性别、年龄及N分期无关,但与T分期和M分期均呈正相关(P<0.05);SATB1高表达与vimentin呈正相关(r=0.358,P=0.009)。NPC细胞系中SATB1表达与细胞分化水平呈负相关。采用siRNA敲减C666-1细胞中SATB1表达后,E-cadherin表达上升,vimentin表达下降,且细胞侵袭能力下降。结论:SATB1高表达通过促进EMT而介导NPC临床进展。 展开更多
关键词 鼻咽癌 特殊富含AT序列结合蛋白1 上皮-间充质转化 侵袭 转移
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基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌细胞株并分析其增殖特性 被引量:7
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作者 王思思 廖晓敏 +6 位作者 邵钟铭 袁建玲 封慕茵 哈艳平 李汝佳 申志华 揭伟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2172-2179,共8页
目的:基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌(NPC)细胞株,并对该细胞株的增殖特性进行分析。方法:采用RT-PCR及Western blot检测永生化鼻咽黏膜细胞系NP-69及不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z和C666-1中SETD2的表达情况,筛选出SETD2... 目的:基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌(NPC)细胞株,并对该细胞株的增殖特性进行分析。方法:采用RT-PCR及Western blot检测永生化鼻咽黏膜细胞系NP-69及不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z和C666-1中SETD2的表达情况,筛选出SETD2高表达细胞系CNE1。应用CRISPR/Cas9技术敲除CNE1细胞中的SETD2基因,筛选SETD2稳定敲除细胞株。采用CCK-8和平板集落形成实验分析SETD2基因敲除前后CNE1细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期的分布,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果:与NP-69细胞相比,随着细胞分化程度的降低,SETD2在CNE1、CNE2Z和C666-1细胞中的表达逐渐下降(P <0. 01)。基于CRISPR/Cas9方法成功地从15个转染了小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)的CNE1细胞单克隆中筛选出2个SETD2稳定敲除的细胞株CNE1-SETD2-KO-#5和#9。CCK-8及平板集落形成实验结果证实,相对于CNE1-WT细胞,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞的增殖能力增强(P <0. 05);流式细胞术分析表明,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞G1期减少而G2/M和S期均增加(P <0. 05); Western blot证实,SETD2敲除后增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(cyclin D1)、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)和CDK4表达增加,p21表达减少(P <0. 05)。结论:基于CRISPR/Ca9技术成功构建SETD2基因敲除NPC细胞株。NPC细胞中SETD2表达与细胞分化程度有关; SETD2表达缺失通过上调cyclin D1、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、CDK2和CDK4并下调p21表达而促进细胞增殖。 展开更多
关键词 鼻咽癌 SETD2基因 CRISPR/Cas9技术 基因组编辑 细胞增殖
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甲基转移酶SET结构域家族及其在心血管发育和疾病中的作用 被引量:5
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作者 邢敬慈 揭伟 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期251-260,共10页
表观遗传修饰异常与心血管疾病的发生、发展密切相关。SET结构域(SETD)家族是一类含有SETD的重要表观遗传修饰酶,主要通过修饰组蛋白H3K4、H3K9、H3K36和H4K20的甲基化而影响基因表达;也可以催化非组蛋白的甲基化而影响信号转导及转录... 表观遗传修饰异常与心血管疾病的发生、发展密切相关。SET结构域(SETD)家族是一类含有SETD的重要表观遗传修饰酶,主要通过修饰组蛋白H3K4、H3K9、H3K36和H4K20的甲基化而影响基因表达;也可以催化非组蛋白的甲基化而影响信号转导及转录活化因子1、Wnt/β-catenin、缺氧诱导因子1α和Hippo/YAP等重要信号途径的信号转导。SETD家族对心血管发育和疾病的作用主要体现在以下几个方面:调控冠状动脉的形成和心脏发育;保护缺血再灌注损伤的心脏组织;调控糖尿病心血管并发症中的炎症反应、氧化应激和细胞凋亡;参与肺动脉高压形成;调控血栓形成、心肌肥大和心律失常等。本文综述了SETD家族成员的组成、表达调控机制及其在心血管发育和疾病中的作用研究进展,以期为深入理解心血管疾病发生和发展的分子机制及治疗靶点提供参考。 展开更多
关键词 表观遗传学 甲基转移酶 SET结构域 心血管发育 心血管疾病 综述
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受体酪氨酸激酶Axl高表达促进鼻咽癌临床进展 被引量:5
9
作者 贾亚楠 李汝佳 +6 位作者 王可可 雷洪 哈艳平 王思思 廖晓敏 揭伟 申志华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1386-1392,共7页
目的:探讨受体酪氨酸激酶anexelekto(Axl)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达及意义。方法:采用免疫组化法检测78例NPC和32例鼻咽黏膜慢性炎中Axl的表达,分析Axl蛋白表达与NPC患者临床参数的相关性。常规培养NPC细胞,免疫... 目的:探讨受体酪氨酸激酶anexelekto(Axl)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达及意义。方法:采用免疫组化法检测78例NPC和32例鼻咽黏膜慢性炎中Axl的表达,分析Axl蛋白表达与NPC患者临床参数的相关性。常规培养NPC细胞,免疫荧光法检测不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z及C666-1中Axl的蛋白表达情况。应用Axl特异性抑制剂TP-0903处理CNE1和C666-1细胞,CCK-8实验检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞周期的分布,q PCR检测Axl和增殖细胞核抗原(PCNA)的mRNA表达,Western blot检测Axl及p-Axl蛋白的表达。结果:Axl蛋白定位于胞膜和胞质。NPC中Axl高表达阳性率显著高于鼻咽黏膜慢性炎(P<0.01)。Axl高表达与患者年龄、性别及M分期无关,与临床分期、T分期和N分期呈正相关(P<0.05)。Axl在高分化CNE1细胞中低表达,在低分化CNE2Z细胞和未分化C666-1细胞中表达水平明显增高。TP-0903呈浓度和时间依赖性抑制NPC细胞的活性,2 nmol/L TP-0903即具有显著抑制效应,能阻滞细胞周期于G0期,在降低Axl活性的同时也显著抑制PCNA的表达。结论:Axl高表达可促进NPC的临床进展;TP-0903显著抑制NPC细胞的增殖,提示Axl可能在NPC靶向治疗中具有一定的价值。 展开更多
关键词 鼻咽癌 Anexelekto TP4903 细胞增殖 细胞周期
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基于TMT标记定量蛋白组学分析SATB1过表达前后鼻咽癌细胞中差异蛋白质及信号富集 被引量:1
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作者 李汝佳 袁建玲 +6 位作者 贾亚楠 邵钟铭 封慕茵 伍彩霞 邹园 揭伟 申志华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期346-353,共8页
目的:分析富含AT序列的特异性核基质区结合蛋白1(SATB1)表达改变对人鼻咽癌(NPC)细胞中蛋白表达谱特征的影响,并采用生物信息学富集分析差异信号通路。方法:利用SATB1过表达慢病毒和阴性对照慢病毒感染CNE1细胞,获得稳定表达细胞系。提... 目的:分析富含AT序列的特异性核基质区结合蛋白1(SATB1)表达改变对人鼻咽癌(NPC)细胞中蛋白表达谱特征的影响,并采用生物信息学富集分析差异信号通路。方法:利用SATB1过表达慢病毒和阴性对照慢病毒感染CNE1细胞,获得稳定表达细胞系。提取2组细胞的总蛋白,利用TMT标记蛋白定量技术和串联质谱分析技术筛选出差异表达蛋白,采用RT-qPCR对差异蛋白编码基因在mRNA水平进行定量验证;应用GO数据库对差异表达蛋白进行注释和富集分析,应用KEGG数据库对差异蛋白涉及信号通路进行富集分析。结果:SATB1过表达慢病毒感染CNE1细胞后获得稳定表达细胞系。与对照组相比,过表达SATB1的CNE1细胞鉴别出278个差异表达蛋白,其中115个表达上调,163个表达下调;采用RT-qPCR对10个代表性差异蛋白的编码基因进行mRNA水平的验证,其结果与蛋白组学结果具有一致性。GO数据库分析差异表达蛋白主要参与了细胞过程、单有机体过程、生物调控和代谢过程,发挥生物分子结合和催化等分子功能;细胞组件主要存在于细胞部分、细胞以及细胞器上。KEGG数据库分析显示差异表达蛋白参与和肿瘤关系密切的信号通路,主要有MAPK、PI3K-Akt、AMPK、JAK-STAT、p53、PPAR、Hippo和HIF-1通路等。结论:SATB1过表达后明显改变了NPC细胞中蛋白表达谱并影响多条与肿瘤关系密切的信号通路。蛋白组学筛查也为NPC的发病分子机制、治疗和预后标靶筛查提供了可能的宏观手段。 展开更多
关键词 鼻咽癌 SATB1蛋白 TMT标记定量蛋白组学 生物信息学
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基于4D蛋白组学分析RhoE基因敲除对糖尿病大鼠心脏组织中蛋白质表达的影响及机制
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作者 赵鋆 施凯佳 +6 位作者 伍彩霞 邹园 吴林栩 陈旭 申志华 郭峻莉 揭伟 《海南医学院学报》 CAS 2022年第23期1761-1770,1778,共11页
目的:分析RhoE基因表达改变对糖尿病大鼠心脏组织中蛋白表达谱的影响及可能的调节机制。方法:6周龄雄性RhoE基因敲除(KO)与野生型(WT)SD大鼠以腹腔一次性注射链脲佐菌素(STZ,70 mg/kg)复制急性1型糖尿病模型(T1DM),以注射等量柠檬酸钠... 目的:分析RhoE基因表达改变对糖尿病大鼠心脏组织中蛋白表达谱的影响及可能的调节机制。方法:6周龄雄性RhoE基因敲除(KO)与野生型(WT)SD大鼠以腹腔一次性注射链脲佐菌素(STZ,70 mg/kg)复制急性1型糖尿病模型(T1DM),以注射等量柠檬酸钠盐水为对照,1周后连续3 d测定大鼠空腹血糖,以血糖浓度≥16.7 mmol/L为造模成功。2周后取出各组大鼠心脏,采用四维非标定量蛋白质组学技术(4D-LFQ),检测心脏组织中蛋白质的表达,筛选差异表达蛋白(DEP),生物信息学分析DEP相关功能和涉及的信号通路与蛋白-蛋白互作网络。结果:成功建立T1DM大鼠模型。以表达倍数(FC)>1.5倍且P<0.05为筛选标准,共鉴定到可定量的蛋白总数为2931个。非糖尿病状态下,KO组与WT组相比,上调表达蛋白26个,下调蛋白45个;糖尿病状态下,与WT组相比,KO组显著上调的蛋白数量为19个,显著下调的蛋白数量为28个。GO注释结果显示大多数差异表达蛋白位于细胞外基质区,生物学功能主要集中在免疫反应、能量代谢等过程。KEGG分析提示RhoE敲除后心脏组织中DEP参与的信号通路主要为核糖体、脂肪消化吸收等。蛋白互作网络分析发现KO组心脏组织中上调蛋白中Col1α1和Col1α2相互作用的蛋白较多,下调蛋白中参与核糖体通路的相关蛋白在网络互作较多。结论:RhoE敲除后明显改变了糖尿病心脏组织中蛋白质表达谱,影响多条与糖尿病心肌病关系密切的信号通路,研究结果为糖尿病心肌病的发病机制和治疗标靶筛选提供了参考。 展开更多
关键词 糖尿病 心肌组织 RHOE 蛋白质组学 生物信息学
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