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抗人CD20纳米抗体的筛选、表达及特性分析
1
作者
李艳宁
李光琪
+4 位作者
王红霞
蒋丹
楚元奎
张爱君
徐广贤
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期67-72,共6页
目的筛选出抗人CD20纳米抗体序列,并获得具有高亲和力与特异性的抗CD20-人IgG Fc纳米抗体。方法利用天然噬菌体纳米抗体库,以生物素化的CD20抗原为靶标进行4轮液相亲和筛选,采用ELISA鉴定阳性克隆;将筛选到的阳性克隆基因序列与人IgG F...
目的筛选出抗人CD20纳米抗体序列,并获得具有高亲和力与特异性的抗CD20-人IgG Fc纳米抗体。方法利用天然噬菌体纳米抗体库,以生物素化的CD20抗原为靶标进行4轮液相亲和筛选,采用ELISA鉴定阳性克隆;将筛选到的阳性克隆基因序列与人IgG Fc片段偶联,构建到原核表达载体pCZN1中,并转化至大肠杆菌Arctic Express,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)低温诱导重组蛋白的表达,利用Ni柱进行亲和纯化;ELISA和Western blot法鉴定纯化产物。结果筛选得到了一条重复性高且亲水性好的CD20纳米抗体序列,纯化获得了纯度高达85%以上的抗CD20-人IgG Fc纳米抗体。ELISA结果显示其与CD20抗原具有较高亲和力, Western blot结果表明该抗体能特异性识别CD20抗原。结论利用天然噬菌体纳米抗体库成功获得了抗CD20纳米抗体序列,经纯化的抗CD20-人IgG Fc纳米抗体具有高亲和力与特异性。
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关键词
纳米抗体
CD20
噬菌体表面展示技术
原核表达
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职称材料
结核分枝杆菌PE_PGRS29蛋白结构与功能的生物信息学分析
2
作者
吴珊
周海金
徐广贤
《家畜生态学报》
北大核心
2022年第12期23-31,68,共10页
为了运用生物信息学方法对结核分枝杆菌Rv1468c基因编码蛋白PE_PGRS29的结构和功能进行预测分析,Rv1468c基因相关信息从Genbank数据库中提取;运用ProtParam、Protscale、NetPhos、TMHMM、SOPMA、SWISS-MODEL等在线软件预测分析PE_PGRS2...
为了运用生物信息学方法对结核分枝杆菌Rv1468c基因编码蛋白PE_PGRS29的结构和功能进行预测分析,Rv1468c基因相关信息从Genbank数据库中提取;运用ProtParam、Protscale、NetPhos、TMHMM、SOPMA、SWISS-MODEL等在线软件预测分析PE_PGRS29蛋白的理化性质、亲疏水性、磷酸化位点、跨膜螺旋结构和二级结构并对其进行三级结构建模,PE_PGRS29蛋白的B细胞以及T细胞抗原表位使用BLAST、ABCpred和SYFPEITHI软件进行预测,PE_PGRS29蛋白的相互作用蛋白用STRING数据库进行分析,使用MEGA-X软件对PE_PGRS29蛋白构建进化树。结果表明:PE_PGRS29蛋白含有370个氨基酸,分子式为C1375H2111N431O465S3,原子总数4385,消光系数为9970,280 nm处的吸光度为0.309;平均疏水性为0.199,为亲水性蛋白,第331位氨基酸亲水性得分最高为-1.533,第51位氨基酸疏水性得分最高为2.378。该蛋白性质稳定,α-螺旋(Hh)、β-转角(Tt)、β-折叠(Ee)和无规则卷曲(Cc)在该蛋白质二级结构中分别占21.89%、10.54%、21.89%和45.68%。综上所述,生物信息学分析PE_PGRS29蛋白为结核分枝杆菌表面稳定亲水性蛋白,与结核分枝杆菌的泛素化介导异种自噬清除密切相关。该蛋白含有多个T、B细胞抗原表位,可作为结核治疗的潜在分子靶点。
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关键词
结核分枝杆菌
自噬
PE_PGRS29蛋白
生物信息学分析
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职称材料
题名
抗人CD20纳米抗体的筛选、表达及特性分析
1
作者
李艳宁
李光琪
王红霞
蒋丹
楚元奎
张爱君
徐广贤
机构
宁夏
医科
大学
临床
医学
院
医学
检验
系
广东医科大学医学技术学院医学检验系
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期67-72,共6页
基金
宁夏重点研发计划(社发领域)重点项目(2018BEG02002)。
文摘
目的筛选出抗人CD20纳米抗体序列,并获得具有高亲和力与特异性的抗CD20-人IgG Fc纳米抗体。方法利用天然噬菌体纳米抗体库,以生物素化的CD20抗原为靶标进行4轮液相亲和筛选,采用ELISA鉴定阳性克隆;将筛选到的阳性克隆基因序列与人IgG Fc片段偶联,构建到原核表达载体pCZN1中,并转化至大肠杆菌Arctic Express,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)低温诱导重组蛋白的表达,利用Ni柱进行亲和纯化;ELISA和Western blot法鉴定纯化产物。结果筛选得到了一条重复性高且亲水性好的CD20纳米抗体序列,纯化获得了纯度高达85%以上的抗CD20-人IgG Fc纳米抗体。ELISA结果显示其与CD20抗原具有较高亲和力, Western blot结果表明该抗体能特异性识别CD20抗原。结论利用天然噬菌体纳米抗体库成功获得了抗CD20纳米抗体序列,经纯化的抗CD20-人IgG Fc纳米抗体具有高亲和力与特异性。
关键词
纳米抗体
CD20
噬菌体表面展示技术
原核表达
Keywords
nanobody
CD20
phage surface display
prokaryotic expression
分类号
Q939.48 [生物学—微生物学]
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
结核分枝杆菌PE_PGRS29蛋白结构与功能的生物信息学分析
2
作者
吴珊
周海金
徐广贤
机构
西安市人民医院(西安市第四医院)
检验
科
广东医科大学医学技术学院医学检验系
出处
《家畜生态学报》
北大核心
2022年第12期23-31,68,共10页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.81860355)。
文摘
为了运用生物信息学方法对结核分枝杆菌Rv1468c基因编码蛋白PE_PGRS29的结构和功能进行预测分析,Rv1468c基因相关信息从Genbank数据库中提取;运用ProtParam、Protscale、NetPhos、TMHMM、SOPMA、SWISS-MODEL等在线软件预测分析PE_PGRS29蛋白的理化性质、亲疏水性、磷酸化位点、跨膜螺旋结构和二级结构并对其进行三级结构建模,PE_PGRS29蛋白的B细胞以及T细胞抗原表位使用BLAST、ABCpred和SYFPEITHI软件进行预测,PE_PGRS29蛋白的相互作用蛋白用STRING数据库进行分析,使用MEGA-X软件对PE_PGRS29蛋白构建进化树。结果表明:PE_PGRS29蛋白含有370个氨基酸,分子式为C1375H2111N431O465S3,原子总数4385,消光系数为9970,280 nm处的吸光度为0.309;平均疏水性为0.199,为亲水性蛋白,第331位氨基酸亲水性得分最高为-1.533,第51位氨基酸疏水性得分最高为2.378。该蛋白性质稳定,α-螺旋(Hh)、β-转角(Tt)、β-折叠(Ee)和无规则卷曲(Cc)在该蛋白质二级结构中分别占21.89%、10.54%、21.89%和45.68%。综上所述,生物信息学分析PE_PGRS29蛋白为结核分枝杆菌表面稳定亲水性蛋白,与结核分枝杆菌的泛素化介导异种自噬清除密切相关。该蛋白含有多个T、B细胞抗原表位,可作为结核治疗的潜在分子靶点。
关键词
结核分枝杆菌
自噬
PE_PGRS29蛋白
生物信息学分析
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
autophagy
PE_PGRS29 protein
bioinformatics
分类号
R378.91 [医药卫生—病原生物学]
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗人CD20纳米抗体的筛选、表达及特性分析
李艳宁
李光琪
王红霞
蒋丹
楚元奎
张爱君
徐广贤
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
结核分枝杆菌PE_PGRS29蛋白结构与功能的生物信息学分析
吴珊
周海金
徐广贤
《家畜生态学报》
北大核心
2022
0
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职称材料
已选择
0
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