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题名人博卡病毒重组蛋白表达及间接酶联免疫法检测的建立
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作者
张允奇
何涛君
陆学东
张银辉
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机构
广东医学院附属深圳市福田区人民医院香蜜湖分院检验科
广东医学院附属深圳市福田区人民医院检验医学部
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出处
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2016年第17期2803-2806,共4页
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基金
深圳市医疗卫生类科技计划项目(编号:201303158)
深圳市福田区卫生公益性科研项目(编号:FTWS201310)
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文摘
目的:原核表达并纯化人博卡病毒结构蛋白VP2,并建立间接酶联免疫法,用于病毒感染的检测。方法:本研究采用PCR法从菌种模板WHL-1扩增出人博卡病毒结构蛋白VP2基因片段,克隆至表达载体p ET28a中,转化到菌BL21(DE3),经过诱导产生融合蛋白,使用Western blot检测,并以该蛋白为包被抗原建立检测血清人博卡病毒的间接酶联免疫法。结果:重组原核表达质粒经双酶切鉴定构建正确,并可与人博卡病毒Ig G阳性血清发生特异性反应,建立的间接酶联免疫法最佳抗原包被浓度为2 mg/m L,血清的最佳稀释倍数为1∶200,封闭以1%BSA封闭效果最佳,酶标二抗的最佳工作稀释度为1∶4 000,工作时间最佳为1 h,该检测方法有较好的特异性和重复性。建立的间接ELISA方法Cut-off值为0.1,灵敏度为92%,特异性为98%,与对照试剂检测结果的符合率为97%。结论:原核表达并纯化了人博卡病毒结构蛋白VP2蛋白建立的间接酶联免疫法,为人博卡病毒的血清抗体检测方法提供了依据。
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关键词
人博卡病毒
原核表达
间接酶联免疫法
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Keywords
Human bocavirus
Prokaryotic express
Indirect ELISA
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分类号
R446.6
[医药卫生—诊断学]
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