分子生物学教学实验中质粒提取原理与电泳图谱的探讨 被引量：3

1

作者 张海涛 刘慧明 +1 位作者 丁航 陈伟珠 《生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期74-75,共2页

碱裂解法制备质粒是分子生物学常用技术,该实验的一些原理和结果的解释在一些教材中叙述不同。根据多年的实践,我们对实验原理和结果作了些总结,使实验教材中的原理和结果的解释更加科学。

关键词 质粒 碱裂解法 电泳 原理

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南美白对虾肠道微生物宏基因组提取方法的比较 被引量：3

2

作者 徐德峰 李彩虹 +2 位作者 孙力军 王雅玲 叶日英 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期119-122,共4页

为获得高质量南美白对虾肠道微生物宏基因组模板,采用传统CTAB法、试剂盒和仪器法提取南美白对虾(Penaeus Vanmamei,P.vannamei)肠道微生物宏基因组,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和V3区16S rDNA扩增检测所得基因组的完整性、得... 为获得高质量南美白对虾肠道微生物宏基因组模板,采用传统CTAB法、试剂盒和仪器法提取南美白对虾(Penaeus Vanmamei,P.vannamei)肠道微生物宏基因组,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和V3区16S rDNA扩增检测所得基因组的完整性、得率、纯度和目的片段质量。结果表明3种方法提取得到的DNA结构均较完整,但得率和纯度差别较大,传统CTAB法提取的DNA得率和纯度均试剂盒和仪器法高,试剂盒和仪器法受糖和盐类污染较高,3种方法提取的宏基因组均可特异扩增出V3区保守片段。综合比较得知传统CTAB法提取P.Vanmamei肠道微生物基因组在完整性、得率和纯度方面优于其他两种方法,可为后续分子生物学分析提供良好基因组模板。 展开更多

关键词 南美白对虾 肠道微生物 宏基因组提取

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TNF-α信号传导通路的分子机理 被引量：81

3

作者 丘创华 侯敢 黄迪南 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期430-435,共6页

肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)是一种具有多效生物学效应的细胞因子.TNF的生物学效应都是通过细胞表面的2种TNF受体(TNFR)引发,其信号传导通路主要包括caspase家族介导的细胞凋亡、衔接蛋白TRAF介导的转录因子NF-... 肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)是一种具有多效生物学效应的细胞因子.TNF的生物学效应都是通过细胞表面的2种TNF受体(TNFR)引发,其信号传导通路主要包括caspase家族介导的细胞凋亡、衔接蛋白TRAF介导的转录因子NF-κB和JNK蛋白激酶的活化.TNFR1和TNFR2的生物学功能不是独立的,许多生物学活性由二者共同完成.3条信号传导通路之间及各通路内部含有各种调节机制,使TNF的各种生物学功能协调发挥出来.本文评述了3条信号传导通路最新进展、关键激酶的研究状况及其在整个信号网络中的作用机理,如IKK的激活以及重要的信号转导分子RIP、TRAF2、TRUSS的结构、相互作用的方式等. 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子α(TNF—α) TNF受体(TNFR) NF-κB JNK 细胞凋亡

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根皮素诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡 被引量：18

4

作者 罗辉 汪亚君 +2 位作者 陈杰 刘江琴 张海涛 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1249-1251,共3页

目的研究根皮素诱导肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡。方法MTT法测定BEL-7402细胞毒性,荧光显微镜观察细胞形态学的变化,流式细胞仪分析细胞周期和线粒体膜电位的变化。发色底物法检测Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9活性变化。结果根皮素... 目的研究根皮素诱导肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡。方法MTT法测定BEL-7402细胞毒性,荧光显微镜观察细胞形态学的变化,流式细胞仪分析细胞周期和线粒体膜电位的变化。发色底物法检测Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9活性变化。结果根皮素对BEL-7402细胞IC50在89.23μg/mL。BEL-7402细胞生长曲线表明,根皮素浓度增高,生长率明显下降。细胞凋亡可在40-160μg/mL根皮素处理后24h出现。凋亡细胞主要表现为核染色质固缩,荧光染色增强。根皮素阻断细胞于G1期,线粒体膜电位降低。Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9被激活,呈时间依赖性改变。根皮素处理BEL-7402细胞12hCaspase-9活性最高,而Caspase-6活性在18h达峰值,Caspase-3活性峰值时间在24h后。结论根皮素可以诱导BEL-7402细胞发生凋亡,途径可能是通过线粒体旁路。 展开更多

关键词 根皮素 BEL-7402 细胞凋亡 线粒体膜电位

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5F对人高转移巨细胞肺癌PGCL_3细胞PTEN、MMP-9表达的影响 被引量：8

5

作者 陈杰 庞江琳 +1 位作者 覃燕梅 梁念慈 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期147-151,共5页

目的研究Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(以下简称5F)对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞毒性、侵袭能力及PTEN、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法 MTT法检测5F对PGCL3细胞增殖抑制的影响;用Transwell小室法检测5F... 目的研究Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(以下简称5F)对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞毒性、侵袭能力及PTEN、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法 MTT法检测5F对PGCL3细胞增殖抑制的影响;用Transwell小室法检测5F对PGCL3细胞侵袭能力和趋化性运动能力的影响;RT-PCR和Western blot方法检测5F对PGCL3细胞侵袭转移相关基因PTEN、MMP-9表达水平的影响。结果 5F对PGCL3细胞的增殖、侵袭及运动能力均有明显的抑制作用(均P<0.05)。5F作用于人PGCL3细胞24h,能明显上调PTEN mRNA和蛋白的表达,下调MMP-9mRNA和蛋白的表达。结论 5F能抑制PGCL3细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其机制可能是通过上调PTEN和下调MMP-9表达水平而实现的。 展开更多

关键词 11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19-酸 肺癌 肿瘤侵袭 PTEN 基质金属蛋白酶-9

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丁酸钠诱导Raji细胞表达DAPK的研究 被引量：7

6

作者 张海涛 冯哲玲 +2 位作者 梁念慈 朱振宇 马涧泉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1438-1441,共4页

目的探讨丁酸钠(SB)对人淋巴瘤Raji细胞生长和DAPK表达变化的影响。方法用丁酸钠作用于Raji细胞株,观察形态、增殖情况、细胞周期分布变化、死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化的变化及该酶表达的变化。结果成团悬浮生长的Raji细... 目的探讨丁酸钠(SB)对人淋巴瘤Raji细胞生长和DAPK表达变化的影响。方法用丁酸钠作用于Raji细胞株,观察形态、增殖情况、细胞周期分布变化、死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化的变化及该酶表达的变化。结果成团悬浮生长的Raji细胞呈现贴壁生长,细胞增殖速度明显被抑制,细胞阻滞在G0/G1期;DAPK启动子去甲基化,DAPK表达量增加,细胞凋亡增加。结论丁酸钠具有诱导Raji细胞DAPK基因启动子去甲基化,使DAPK重新表达,诱导细胞凋亡的作用。 展开更多

关键词 RAJI细胞 死亡相关蛋白激酶 凋亡 丁酸钠

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鼻咽癌肿瘤干细胞高表达ABCA3在顺铂耐药机制中的作用 被引量：7

7

作者 林碧华 陈婧 +3 位作者 卢家淇 余海波 张鑫 周克元 《医药导报》 CAS 2015年第11期1422-1428,共7页

目的探讨ABC转运体家族在鼻咽癌肿瘤干细胞表达及对顺铂耐药机制的作用。方法通过罗丹明123外排实验及钠钾ATP酶活性检测,观察鼻咽癌细胞CNE-2与鼻咽癌肿瘤干细胞CNE-2S之间药物外排能力的差异。运用实时定量RT-PCR技术,测定两种细胞在... 目的探讨ABC转运体家族在鼻咽癌肿瘤干细胞表达及对顺铂耐药机制的作用。方法通过罗丹明123外排实验及钠钾ATP酶活性检测,观察鼻咽癌细胞CNE-2与鼻咽癌肿瘤干细胞CNE-2S之间药物外排能力的差异。运用实时定量RT-PCR技术,测定两种细胞在顺铂作用下6个ABC转运体家族成员mRNA的表达情况,并采用Western blot检测ABCA3、ABCC1、ABCC2及ABCG2的蛋白表达水平。利用小分子RNA干扰技术沉默ABCA3基因后,观察两种细胞药物外排及顺铂诱导的凋亡情况。结果顺铂对CNE-2S的半数抑制浓度(IC50)为CNE-2的4.1倍(P<0.05),同时CNE-2S的相对药物外排活性为CNE-2的4.8倍(P<0.05)。CNE-2S较CNE-2高表达ABCA3、ABCB1、ABCC1及ABCG2(P<0.05)。1μmol·L-1顺铂作用48 h后,ABCA3在CNE-2S中特异性高表达,沉默ABCA3后能显著抑制CNE-2S的药物外排能力(P<0.05),并增强顺铂对CNE-2S及CNE-2的诱导凋亡能力(P<0.05)。结论鼻咽癌肿瘤干细胞对顺铂耐药与高表达ABCA3、ABCC1及ABCG2有关,抑制ABCA3的表达能逆转肿瘤干细胞对顺铂的杀伤作用。 展开更多

关键词 顺铂 癌 鼻咽 干细胞 肿瘤 ABC转运体家族 ABCA3 耐药

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DNA修复基因ERCC1 C19007T多态与宫颈癌发生的相关性研究 被引量：8

8

作者 熊兴东 古李中 +4 位作者 曾俐琴 杨志宏 张志珍 罗喜平 刘新光 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期286-288,289,共4页

目的:探讨广东地区汉族妇女核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)基因单核苷酸多态位点C19007T(Asn118Asn,rs11615)与宫颈癌发生的关系,为宫颈癌的预防和治疗提供新的思路。方法:利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析... 目的:探讨广东地区汉族妇女核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)基因单核苷酸多态位点C19007T(Asn118Asn,rs11615)与宫颈癌发生的关系,为宫颈癌的预防和治疗提供新的思路。方法:利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术,对91例宫颈癌患者(宫颈癌组)和103例健康对照个体(对照组)的ERCC1C19007T多态位点进行分型。采用非条件逻辑回归分析统计该多态位点与宫颈癌易感的相关性,并用年龄进行校正,计算相对危险度的比值比(OR)及95%置信区间(CI)。结果:T等位基因在宫颈癌组中的分布频率(31.3%)高于对照组(20.4%),差异有统计学意义(P=0.024),携带TT基因型的个体显著增加患宫颈癌的风险(调整后的OR=3.68,95%CI=1.22～11.14,P=0.021)。而且T等位基因增加个体患宫颈癌风险的趋势在Ⅰ期的宫颈癌患者(TTvsCC:调整后的OR=4.69,95%CI=1.36～16.21)以及在<45岁的人群中(TTvsCC:调整后的OR=5.05,95%CI=1.01～25.20)更加明显。结论:ERCC1C19007T多态与广东地区汉族妇女宫颈癌的发生有密切关系,T等位基因可能是影响宫颈癌易感的一个风险因素。 展开更多

关键词 核苷酸切除修复交叉互补基因1 单核苷酸多态性 宫颈癌 遗传易感性

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miR-124 rs531564基因多态性与宫颈癌遗传易感有密切关系 被引量：10

9

作者 熊兴东 成捷 +2 位作者 刘新光 唐韶景 罗喜平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期210-213,共4页

目的探讨广东地区汉族妇女miR-124 rs531564基因多态性与宫颈癌遗传易感的关系,为宫颈癌的预防和治疗提供新的思路。方法利用聚合酶链式反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)技术,对107例宫颈癌患者和208名健康对照个体的miR-124基因rs531564... 目的探讨广东地区汉族妇女miR-124 rs531564基因多态性与宫颈癌遗传易感的关系,为宫颈癌的预防和治疗提供新的思路。方法利用聚合酶链式反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)技术,对107例宫颈癌患者和208名健康对照个体的miR-124基因rs531564多态位点进行分型。采用非条件逻辑回归分析统计该多态位点与宫颈癌易感的相关性,计算相对危险度的比值比(OR)及95%置信区间(CI)。结果 HPV感染在病例组中的分布频率显著高于正常对照组(93.1%vs 16.8%,P<0.001),提示HPV感染是广东地区宫颈癌发病的重要危险因素。等位基因的结果显示,miR-124 rs531564 G等位基因在病例组中的分布频率显著低于正常对照组(8.0%vs 15.1%,P=0.014)。与CC基因型相比,携带G等位基因的个体(CG+GG)显著降低患宫颈癌的风险(OR=0.47,95%CI=0.26-0.88,P=0.017)。而且G等位基因降低个体患宫颈癌风险的趋势在年龄≥45岁的人群中更加明显(OR=0.28,95%CI=0.10-0.76,P=0.012)。结论 miR-124基因rs531564基因多态性与广东地区汉族妇女宫颈癌的遗传易感有密切关系,G等位基因可能是降低宫颈癌发病风险的重要因素。 展开更多

关键词 miR-124 单核苷酸多态性 宫颈癌 遗传易感性 miR-124

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肌肉萎缩与氧化应激 被引量：6

10

作者 李梅 侯敢 +1 位作者 黄迪南 司秀文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期415-420,共6页

肌肉是机体具有收缩性的组织,它的主要功能是通过力量产生引起机体各部位的运动.肌肉萎缩是肌肉质量和力量丧失,肌肉活动功能减退的一种反应,在许多生理和病理情况下都可以出现.肌肉萎缩时不仅表现为肌肉结构形态的变化,如肌肉的重量和... 肌肉是机体具有收缩性的组织,它的主要功能是通过力量产生引起机体各部位的运动.肌肉萎缩是肌肉质量和力量丧失,肌肉活动功能减退的一种反应,在许多生理和病理情况下都可以出现.肌肉萎缩时不仅表现为肌肉结构形态的变化,如肌肉的重量和体积减少,肌纤维类型改变,最主要是肌肉蛋白质水解作用增强、合成减少.氧化应激是机体氧化产物超过机体抗氧化防御能力一种应激状态,可以导致细胞、组织和器官的损伤.大量证据表明,氧化应激参与肌肉萎缩的致病过程.探讨氧化应激在肌肉萎缩中的作用,对了解肌肉萎缩的致病机制有重要作用.本文对氧化应激和肌肉萎缩的关系,氧化应激参与肌肉萎缩时的蛋白质水解途径,以及连接氧化应激和肌肉萎缩的两个重要细胞信号转导通路做一简要综述. 展开更多

关键词 肌肉萎缩 氧化应激 活性氧簇 NFΚ-B 丝裂原活化蛋白激酶

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湛江对虾产业现状、困境与发展建议 被引量：5

11

作者 徐德峰 李彩虹 +3 位作者 王冼民 孙力军 王雅玲 叶日英 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期136-139,共4页

对虾产业是湛江的支柱和特色产业,已形成较为明显的规模效应,但在新的国内外市场竞争环境下,其产业优势面临着诸多挑战。以系统的视角在分析对虾产业发展现状的基础上,从企业内部结构和外部运营环境全面剖析制约产业发展的若干关键问题... 对虾产业是湛江的支柱和特色产业,已形成较为明显的规模效应,但在新的国内外市场竞争环境下,其产业优势面临着诸多挑战。以系统的视角在分析对虾产业发展现状的基础上,从企业内部结构和外部运营环境全面剖析制约产业发展的若干关键问题,进而提出以协同创新的理念推进企业科技、管理和服务的集成创新,以在质量、成本、品牌等方面提升产品核心竞争力,同时通过创新和完善政府、银行、行业协会等企业外部机构的服务职能,营造公平竞争的市场环境和宽松便捷的金融环境,将产品核心竞争力进一步提升为产业核心竞争力,全面振兴湛江民营经济。 展开更多

关键词 对虾产业 湛江 协同创新 民营经济

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不同取油方式对水飞蓟种仁油脂质量和蛋白结构的影响 被引量：5

12

作者 李彩虹 徐德峰 +2 位作者 孙力军 王雅玲 刘唤明 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期945-948,共4页

为高效利用水飞蓟种仁油脂和蛋白组分,比较了不同取油方式对水飞蓟种仁油脂提取率和油品质量,以及种仁蛋白热力学性质的影响。结果表明,索氏萃取和超临界CO2萃取方法的提油率显著高于水代法(P<0.05),也高于压榨法,但未达到显著性水平... 为高效利用水飞蓟种仁油脂和蛋白组分,比较了不同取油方式对水飞蓟种仁油脂提取率和油品质量,以及种仁蛋白热力学性质的影响。结果表明,索氏萃取和超临界CO2萃取方法的提油率显著高于水代法(P<0.05),也高于压榨法,但未达到显著性水平(P>0.05);在油品质量方面,压榨法油品酸价最高,且蛋白热变性扫描曲线与原料相比存在第一个吸收峰丢失和第二个吸收峰左移的特征,表明提取过程对种仁蛋白结构破坏最强,水代法提油过程温和不仅对油品中VE保存较好,而且对蛋白空间结构影响较小,有利于油脂和蛋白组分的高效综合利用。 展开更多

关键词 水飞蓟 取油方式 油脂质量 蛋白结构

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高等植物的酰基-ACP硫酯酶研究进展 被引量：9

13

作者 元冬娟 吴湃 江黎明 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期103-108,F0003,共7页

在高等植物质体游离脂肪酸的生物合成过程中,酰基-ACP硫酯酶能催化脂酰-ACP脱去ACP,产生游离的脂肪酸。因此,酰基-ACP硫酯酶对植物种子中贮存态的脂肪酸种类和含量,植株中从质体输出脂肪酸的链长和饱和性都起着关键的作用。本文就酰基-... 在高等植物质体游离脂肪酸的生物合成过程中,酰基-ACP硫酯酶能催化脂酰-ACP脱去ACP,产生游离的脂肪酸。因此,酰基-ACP硫酯酶对植物种子中贮存态的脂肪酸种类和含量,植株中从质体输出脂肪酸的链长和饱和性都起着关键的作用。本文就酰基-ACP硫酯酶结构、功能特征与分类的研究进展进行了简单的介绍,为油料作物的基因工程改造和研究提供指导,有利于植物油的工业化生产应用。 展开更多

关键词 酰基-ACP硫酯酶 结构 基因工程 系统进化

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半边旗有效成分5F对人小细胞肺癌NCIH446细胞毒性、侵袭能力、运动能力及MMP-9、uPA表达的影响 被引量：3

14

作者 陈杰 庞江琳 +1 位作者 覃燕梅 梁念慈 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期361-363,共3页

目的探讨半边旗有效成分5F对人小细胞肺癌NCIH446细胞毒性、侵袭能力、运动能力及MMP-9、uPA表达的影响。方法 MTT法检测5F对NCIH446细胞的增殖作用;Transwell chamber法检测5F对NCIH446细胞侵袭能力和趋化性运动能力的影响。Western b... 目的探讨半边旗有效成分5F对人小细胞肺癌NCIH446细胞毒性、侵袭能力、运动能力及MMP-9、uPA表达的影响。方法 MTT法检测5F对NCIH446细胞的增殖作用;Transwell chamber法检测5F对NCIH446细胞侵袭能力和趋化性运动能力的影响。Western blot方法检测5F对NCIH446细胞侵袭转移相关基因MMP-9、uPA表达水平的影响。结果 5F对NCIH446细胞的增殖有显著抑制作用(P<0.05)。在无明显细胞毒性情况下,5F能够明显抑制NCIH446细胞的侵袭能力、运动能力(P<0.05)。5F作用于NCIH446细胞24 h,能明显下调MMP-9、uPA蛋白表达。结论 5F能抑制NCIH446细胞的增殖、侵袭、转移能力,下调MMP-9、uPA表达水平,5F具有潜在抗肺癌转移的作用。 展开更多

关键词 半边旗 5F 细胞增殖 肿瘤侵润 细胞系 肿瘤 基质金属蛋白酶-9 尿激酶型纤维蛋白酶酶原激活剂

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肌萎缩性侧索硬化症相关的Cu,Zn-SOD 被引量：3

15

作者 丘创华 周勇军 +1 位作者 侯敢 黄迪南 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期107-112,共6页

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)被称为生物体内自由基的清洁剂,其主要形式Cu,Zn-SOD称SOD1.SOD1突变体可引起致死性运动神经元疾病肌萎缩性侧索硬化症(ALS).但是,SOD1的毒性机理尚未完全清楚.本文概述了SOD1、Cu分子伴侣(cop... 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)被称为生物体内自由基的清洁剂,其主要形式Cu,Zn-SOD称SOD1.SOD1突变体可引起致死性运动神经元疾病肌萎缩性侧索硬化症(ALS).但是,SOD1的毒性机理尚未完全清楚.本文概述了SOD1、Cu分子伴侣(copper chaperonefor SOD1,CCS)的分子结构和CCS活化SOD1的机理,重点分析了突变体SOD1构象变化的原因及其在ALS中的可能致病机制的最新研究进展. 展开更多

关键词 超氧化物歧化酶1(SOD1) 突变 聚集 肌萎缩性侧索硬化症

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鲎素诱导HL-60细胞凋亡的机制探讨 被引量：3

16

作者 张海涛 伍俊 +1 位作者 汪亚君 郭黠 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期158-160,共3页

目的研究鲎素诱导HL-60细胞凋亡时，半胱氨酸蛋白酶（Caspases）活性的变化，探讨鲎素诱导HL-60细胞凋亡的可能机制。方法以鲎素20μg／ml处理HL-60细胞0～24h。流式细胞仪检测线粒体膜电位。Western blot法和发色底物法检测Caspase-3、... 目的研究鲎素诱导HL-60细胞凋亡时，半胱氨酸蛋白酶（Caspases）活性的变化，探讨鲎素诱导HL-60细胞凋亡的可能机制。方法以鲎素20μg／ml处理HL-60细胞0～24h。流式细胞仪检测线粒体膜电位。Western blot法和发色底物法检测Caspase-3、Caspase-6、Caspase-8和Caspase-9活性变化。Western blot法检测胞质中细胞色素C的变化。结果鲎素处理HL-60细胞后，线粒体膜电位下降。Caspase-3、Caspase-6、Caspase-8和Caspase-9被激活，呈时间依赖性改变。鲎素处理HL-60细胞6h Caspase-8活性最高，而Caspase-9在12h活性最高，Caspase-6活性在18h达峰值，Caspase-3活性峰值时间在24h后。胞质中细胞色素C含量呈时间依赖性增加。结论鲎素诱导HL-60细胞凋亡可能是多途径的，至少与线粒体途径和死亡受体途径相关。 展开更多

关键词 鲎素 半胱氨酸蛋白酶 细胞色素C 细胞凋亡

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hGLP-1类似物基因转染对糖尿病大鼠血糖、血清胰岛素水平及胰岛细胞的影响 被引量：2

17

作者 李晓丽 刘振 +1 位作者 马卫列 张志珍 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期260-263,共4页

目的研究尾静脉注射人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因(2×Val2-hGLP-1)重组表达质粒对糖尿病模型大鼠血糖、血清胰岛素水平及胰岛细胞的影响。方法建立链脲佐菌素(STZ)诱导SD糖尿病大鼠模型,随机分为含有hGLP-1类似物基因的重... 目的研究尾静脉注射人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因(2×Val2-hGLP-1)重组表达质粒对糖尿病模型大鼠血糖、血清胰岛素水平及胰岛细胞的影响。方法建立链脲佐菌素(STZ)诱导SD糖尿病大鼠模型,随机分为含有hGLP-1类似物基因的重组质粒(pIRES2-EGFP/Val2-hGLP-1)转染组、空质粒(pIRES2-EGFP)转染组、糖尿病模型对照组,每组8只。另取8只未经处理的SD大鼠作为正常对照组。重组质粒转染组和空质粒转染组分别通过尾静脉注射含相应质粒(110μg/只)的溶液,糖尿病模型对照组和正常对照组给予等量的生理盐水。实验动物共干预30d,实验结束后,观察各组大鼠血糖及血清胰岛素水平的变化,采用糖耐量及胰岛素耐量实验检测大鼠胰岛素敏感性然后处死动物,HE染色观察胰岛细胞病变情况,免疫组化法分析胰岛素分泌情况。结果与正常对照组、糖尿病模型对照组和空质粒转染组比较,重组质粒转染组血糖水平明显降低(P<0.01),血清胰岛素水平显著升高(P<0.01)。基因治疗改善了糖尿病大鼠的糖耐量,降低了胰岛素抵抗,提高了机体对胰岛素的敏感性(P<0.01)。空质粒转染组与糖尿病模型对照组比较,以上指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。同时,重组质粒转染组的胰岛素分泌水平提高,与糖尿病模型对照组比较,胰岛细胞病变程度明显改善。结论hGLP-1类似物基因转染可促进胰岛细胞增殖,提高胰岛素敏感性,从而显著降低糖尿病大鼠的血糖水平,并改善胰岛组织病变程度。 展开更多

关键词 糖尿病 基因 hGLP-1类似物 转染 葡萄糖耐量试验 胰岛

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甲型流感病毒RNA聚合酶——抗病毒药物靶点 被引量：4

18

作者 罗芬 马卫列 张志珍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期434-440,共7页

甲型流感病毒的RNA聚合酶由PB1、PB2和PA三个亚基组成,在病毒的生命周期中负责行使病毒基因组的转录与复制等多方面功能.甲型流感病毒由于频繁变异,导致其对传统抗病毒药物的敏感性降低,因此开发疗效好、针对性强、毒性低的新型抗病毒... 甲型流感病毒的RNA聚合酶由PB1、PB2和PA三个亚基组成,在病毒的生命周期中负责行使病毒基因组的转录与复制等多方面功能.甲型流感病毒由于频繁变异,导致其对传统抗病毒药物的敏感性降低,因此开发疗效好、针对性强、毒性低的新型抗病毒药物已成为当前亟待解决的问题.由于RNA聚合酶是甲型流感病毒生命周期重要的调控蛋白,并且编码聚合酶各亚基的基因序列具有高度保守性,故成为当前抗病毒药物的重要靶点. 展开更多

关键词 甲型流感病毒 RNA聚合酶 药物靶点

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H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定 被引量：2

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作者 贺贞 林东子 +3 位作者 李观强 马卫列 丁航 张志珍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第16期1691-1694,共4页

目的获取H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白的多克隆抗血清,制备NS1蛋白的多克隆抗体。方法利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白GST-NS1,采用Glutathione-sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白。纯化的GST-NS1蛋白以不同剂量皮下... 目的获取H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白的多克隆抗血清,制备NS1蛋白的多克隆抗体。方法利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白GST-NS1,采用Glutathione-sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白。纯化的GST-NS1蛋白以不同剂量皮下注射免疫BALB/c小鼠,收集抗血清,采用Protein A-sepharose和CNBr-sepharose 4B亲和层析从抗血清中纯化抗NS1蛋白的多克隆抗体。Western blot和免疫荧光法鉴定多克隆抗体的特异性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗体的效价。结果 SDS-PAGE结果表明,融合蛋白GST-NS1以可溶形式表达,诱导4 h的表达量占细菌可溶性蛋白的32.6%,融合蛋白的纯度达到90%以上。Western blot分析显示,亲和层析制备的多克隆抗体对NS1蛋白具有高度特异性。ELISA结果表明,皮下注射25、50、100μg GST-NS1融合蛋白的BALB/c小鼠血清光密度D(450)值均明显增高(P<0.01),其滴度达到1∶3 200。免疫荧光观察到病毒感染的A549细胞中,有内源性NS1蛋白的表达。结论成功地从抗血清中制备出NS1蛋白的多克隆抗体,制备的抗体具有高度特异性。 展开更多

关键词 禽流感病毒 NS1 融合蛋白 多克隆抗体

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盐酸小檗碱纳米脂质体的优化制备方法及其体外细胞毒性研究 被引量：4

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作者 李彩虹 王俊玲 周克元 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1314-1318,共5页

目的优化盐酸小檗碱脂质体制备条件,以更好解决盐酸小檗碱药物毒性和生物利用度问题。方法优化主动载药法制备盐酸小檗碱纳米脂质体,并对该脂质体进行包封率、粒径、形貌等考察,利用MTT法评价脂质体的生物安全性。结果盐酸小檗碱脂质体... 目的优化盐酸小檗碱脂质体制备条件,以更好解决盐酸小檗碱药物毒性和生物利用度问题。方法优化主动载药法制备盐酸小檗碱纳米脂质体,并对该脂质体进行包封率、粒径、形貌等考察,利用MTT法评价脂质体的生物安全性。结果盐酸小檗碱脂质体优化制备工艺为卵磷脂与胆固醇质量比为3∶1,药物浓度为0.8 g.L-1,孵化温度为60℃。较低浓度(≤20 mg.L-1)的该脂质体,作用于HeLa细胞48 h后,存活率在80%以上。结论利用优化工艺制备的脂质体包封率达到83%,粒径在90 nm左右,明显提高了生物利用度。48 h内该脂质体比小糪碱纯品对HeLa细胞的毒性作用小,预示这种改进的方法可能有助于改善药物的安全性。 展开更多

关键词 主动载药法 盐酸小檗碱 纳米脂质体 生物安全性 生物利用度 细胞毒

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