日本血吸虫弹性蛋白酶蛋白质结构与功能生物信息学分析 被引量：1

1

作者 何庆丰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期268-270,共3页

血吸虫分布广泛,能感染人类和许多动物,严重影响人类的身体健康和经济发展,是全球性的公共卫生问题之一。血吸虫之所以能成功感染人体,血吸虫尾蚴的弹性蛋白酶起到了非常重要的作用。弹性蛋白酶是一种胰蛋白酶家族的丝氨酸蛋白酶,

关键词 弹性蛋白酶 日本血吸虫 蛋白质结构 生物信息 学分 感染人类 公共卫生问题 丝氨酸蛋白酶

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线虫抗凝血蛋白AcaNAP7基因克隆、表达及抗凝活性鉴定 被引量：10

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作者 彭礼飞 杨陈 +4 位作者 王会兰 吴亚敏 邓莉 吴铁 胡晶晶 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期337-341,共5页

目的在大肠杆菌中表达犬钩虫线虫抗凝血蛋白NAP7(AcaNAP7)成熟蛋白,并鉴定表达产物的抗凝活性。方法根据AcaNAP7的核苷酸序列设计引物,从克隆质粒pUCm-T/AcaNAP7中扩增编码AcaNAP7成熟蛋白的基因;扩增产物经双酶切定向克隆到原核表达载... 目的在大肠杆菌中表达犬钩虫线虫抗凝血蛋白NAP7(AcaNAP7)成熟蛋白,并鉴定表达产物的抗凝活性。方法根据AcaNAP7的核苷酸序列设计引物,从克隆质粒pUCm-T/AcaNAP7中扩增编码AcaNAP7成熟蛋白的基因;扩增产物经双酶切定向克隆到原核表达载体PET-32a中;构建的重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达;表达产物经镍琼脂糖凝胶FF纯化后,用凝血酶原时间(PT)和活化的部分凝血活酶时间(aPTT)检测体外抗凝血活性。结果克隆了编码AcaNAP7成熟蛋白的基因并构建了重组表达质粒pET-32a/AcaNAP7;在大肠杆菌BL21(DE3)中高效地表达了融合有硫氧还蛋白(Trx)的目的蛋白,产物主要以可溶形式存在;镍琼脂糖凝胶亲和纯化获得了纯度高达92%的目的蛋白;纯化产物能明显延长PT及aPTT,其延长PT比延长aPTT更有效。结论在大肠杆菌中成功表达了AcaNAP7融合蛋白,表达产物具有抗凝活性。该实验为进一步研究AcaNAP7的功能及应用奠定了基础。 展开更多

关键词 线虫抗凝血蛋白 AcaNAP7 克隆 表达 抗凝活性

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十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7的原核表达、纯化及抗凝活性鉴定 被引量：6

3

作者 彭礼飞 邓莉 +4 位作者 杨陈 胡晶晶 甘伟琼 吴亚敏 付汉维 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1021-1025,共5页

目的在大肠杆菌中表达十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7并鉴定抗凝活性。方法运用RT-PCR扩增十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7成熟蛋白及其组成肽段AduNAP7A、AduNAP7B的编码序列;将编码序列克隆、连接到原核表达载体pET32a及pICET32,构建重组... 目的在大肠杆菌中表达十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7并鉴定抗凝活性。方法运用RT-PCR扩增十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7成熟蛋白及其组成肽段AduNAP7A、AduNAP7B的编码序列;将编码序列克隆、连接到原核表达载体pET32a及pICET32,构建重组表达质粒;成功构建的重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达;用镍亲和层析一步纯化融合有硫氧还蛋白(Trx)的目的蛋白;先后用几丁质亲和层析及镍亲和层析两个步骤纯化自切割后带6×his-tag的目的蛋白;用凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(aPTT)检测纯化表达产物的体外抗凝活性。结果获得AduNAP7、AduNAP7A及AduNAP7B的编码序列并成功构建了原核表达重组质粒;AduNAP7、AduNAP7A及Adu-NAP7B均在大肠中得到了高效可溶表达,纯化产物具有一定抗凝活性,它们延长aPTT比延长PT更有效。AduNAP7B的抗凝活性显著强于AduNAP7及AduNAP7A。结论AduNAP7具有较强抗凝活性,但显著弱于AcAP5、AcaNAP7及AcAPc2。AduNAP7的抗凝效应可能利于钩虫在人体内的吸血寄生生活,其抗凝作用机制有待进一步研究。 展开更多

关键词 十二指肠钩虫 抗凝蛋白AduNAP7 原核表达 纯化 抗凝活性

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DNA疫苗在小鼠体内的组织分布及安全性研究 被引量：4

4

作者 魏泉德 叶苓 +1 位作者 徐劲 余新炳: 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第5期9-11,F003,共4页

目的　通过检测绿色荧光蛋白基因在小鼠体内的表达 ,研究质粒 pEGFP -N3在组织分布及应用安全性。 方法　带有增强绿色荧光蛋白 (EnhanceGreenFluorescentProtein ,EGFP)基因的质粒pEGFP -N3的转化、扩增、大量提取及纯化 ,左大腿肌注BA... 目的　通过检测绿色荧光蛋白基因在小鼠体内的表达 ,研究质粒 pEGFP -N3在组织分布及应用安全性。 方法　带有增强绿色荧光蛋白 (EnhanceGreenFluorescentProtein ,EGFP)基因的质粒pEGFP -N3的转化、扩增、大量提取及纯化 ,左大腿肌注BALB/c小鼠 ,注射后不同时间剖杀 ,取注射部位肌肉、心、脑、肝、脾、肾作冰冻切片 ,荧光显微镜下镜检。结果　质粒pEGFP -N3在小鼠注射部位肌肉及心内膜细胞内表达EGFP ,荧光 4 8h内最强 ,1w明显减弱 ,2w消失。其它组织及对照组无黄绿色荧光。结论　外源性EGFP基因能在小鼠细胞内表达 ,它可作为基因表达的检测标签 ,而质粒 pEGFP -N3不与机体染色体重组 ,应用安全 ,可作为DNA疫苗的理想载体。 展开更多

关键词 荧光蛋白 DNA疫苗 安全性 小鼠 GFP EGFP

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斜纹夜蛾两个天蚕素D基因的克隆及序列分析 被引量：3

5

作者 陈维春 宋杰 庞义 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期745-749,共5页

天蚕素是昆虫抵御病菌入侵的一类抗菌肽家族。根据斜纹夜蛾Spodoptera litura天蚕素B基因设计特异引物,通过PCR扩增得到2个新的天蚕素基因部分序列,分别命名为cecD1和cecD2(GenBank登录号分别为EF555567和EF555568)。2个基因编码同一个... 天蚕素是昆虫抵御病菌入侵的一类抗菌肽家族。根据斜纹夜蛾Spodoptera litura天蚕素B基因设计特异引物,通过PCR扩增得到2个新的天蚕素基因部分序列,分别命名为cecD1和cecD2(GenBank登录号分别为EF555567和EF555568)。2个基因编码同一个天蚕素D蛋白,该蛋白的成熟肽与天蚕素B存在2个氨基酸残基差异。序列分析发现cecD1和cecD2中分别包含568bp和377bp的内含子序列,它们有相同的5′和3′拼接位点,A+T含量分别为59.7%和69.8%,符合大多数真核生物内含子高A+T含量的特征。 展开更多

关键词 斜纹夜蛾 抗菌肽 天蚕素 内含子 基因结构

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斜纹夜蛾Cecropin D成熟肽的原核表达及活性检测 被引量：5

6

作者 宋杰 陈维春 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1207-1211,共5页

采用RT-PCR方法从斜纹夜蛾Spodoptera litura脂肪体组织中扩增得到了Cecropin D成熟肽基因序列,分析发现Cecropin D成熟肽与斜纹夜蛾Cecropin B之间存在2个氨基酸残基的差异。将获得的基因序列连接入原核表达载体pGEX-4T-1,并在原核细... 采用RT-PCR方法从斜纹夜蛾Spodoptera litura脂肪体组织中扩增得到了Cecropin D成熟肽基因序列,分析发现Cecropin D成熟肽与斜纹夜蛾Cecropin B之间存在2个氨基酸残基的差异。将获得的基因序列连接入原核表达载体pGEX-4T-1,并在原核细胞中实现了该蛋白的融合表达。SDS-PAGE结果表明,诱导后的宿主菌比未诱导菌中多出了一条融合蛋白表达带,诱导后1h就可以检测到该蛋白,从诱导后1h到5h该蛋白在表达量上没有明显的差异。生长曲线显示在IPTG诱导后宿主菌的生长受到明显的抑制,纯化后的蛋白对细菌具有一定的抑制作用。 展开更多

关键词 斜纹夜蛾 抗菌肽 融合表达

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IFN-γ抑制人成纤维细胞内弓形虫增殖机理的研究 被引量：3

7

作者 芦王英 朱家勇 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第3期51-53,共3页

目的　探讨IFN -γ抑制人成纤维细胞内弓形虫增殖的机制。方法　用反相高效液相色谱法测吲哚胺 2 ,3过氧化酶 (IDO)活性 ;用3 H -尿嘧啶 (3 H -U)掺入法测弓形虫增殖 ;用重氮化反应法测一氧化氮 (NO)浓度。结果　IFN -γ能抑制人成纤维... 目的　探讨IFN -γ抑制人成纤维细胞内弓形虫增殖的机制。方法　用反相高效液相色谱法测吲哚胺 2 ,3过氧化酶 (IDO)活性 ;用3 H -尿嘧啶 (3 H -U)掺入法测弓形虫增殖 ;用重氮化反应法测一氧化氮 (NO)浓度。结果　IFN -γ能抑制人成纤维细胞内弓形虫增殖 ,细胞培养液中色氨酸减少 ,犬尿氨酸增高 ,细胞裂解液中IDO活性增高 ;弓形虫增殖与IDO活性成负相关性。培养上清液中未检出NO。结论IFN 展开更多

关键词 弓形虫 IFN-Γ 一氧化氮 吲哚胺 过氧化酶 成纤维细胞 高效液相色谱法 弓形虫病

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蜂蝇致肠道蝇蛆病1例 被引量：2

8

作者 王唯唯 戴世忠 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第1期96-96,74,共2页

关键词 蝇蛆病 肠道 鼻咽 尿道 伤口 临床 皮肤 幼虫 寄生 发生

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吡喹酮治疗粪类圆线虫合并华支睾吸虫感染1例 被引量：1

9

作者 王唯唯 戴世忠 杨柳萍 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1164-1164,共1页

关键词 华支睾吸虫感染 粪类圆线虫 吡喹酮治疗 HBSAG(+) 白细胞总数 肝弥漫性病变 嗜中性粒细胞 全身浮肿

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恶性疟原虫裂殖子表面蛋白2融合HBS基因重组质粒的免疫原性研究 被引量：1

10

作者 赖秀球 朱家勇 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期63-67,共5页

目的　构建恶性疟原虫海南分离株 (FCC1/HN)裂殖子表面蛋白 2 (MSP2 )融合HBsAg基因片断真核重组表达质粒 pVXORF1-PfMSP2 -HBS ,观察该DNA疫苗的免疫特性。方法　 (1)以恶性疟原虫海南分离株 (FCC1/HN)基因组为模板 ,扩增出pfMSP2 DNA... 目的　构建恶性疟原虫海南分离株 (FCC1/HN)裂殖子表面蛋白 2 (MSP2 )融合HBsAg基因片断真核重组表达质粒 pVXORF1-PfMSP2 -HBS ,观察该DNA疫苗的免疫特性。方法　 (1)以恶性疟原虫海南分离株 (FCC1/HN)基因组为模板 ,扩增出pfMSP2 DNA片断 ,将该片段克隆入质粒pVXORF1-HBS中HBS的上游并与之紧密相连 ,构建质粒 pVXORF1-PfMSP2 -HBS ;构建真核重组表达质粒 pVXORF1-PfMSP2 以作为对照。 (2 )用上述构建的质粒及空质粒 pVXORF1免疫KM小鼠 ,以ELISA检测血清IgG抗体。 结果　 (1)筛选出的重组子为编码FCC1/HNMSP2 基因片断的重组质粒 pVXORF1-PfMSP2 -HBS及 pVXORF1-PfMSP2 。 (2 )裸DNA尾根多点注射KM小鼠 ,显示 pVXORF1-PfMSP2 -HBS组小鼠较pVXORF1-PfMSP2 组小鼠产生抗PfMSP2 蛋白的抗体效价明显增高 ,二者比较 ,差异有非常显著意义 (P <0 0 1)。结论　PfMSP2 融合HBsAg基因片段激发机体产生抗PfMSP2 抗体的能力显著增强 ,提示PfMSP2 展开更多

关键词 恶性疟原虫 裂殖子表面蛋白2 融合HBS基因 重组质粒 免疫原性 研究 DNA疫苗

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阿米巴肝脓肿病人血清NO和TNFα的水平 被引量：1

11

作者 朱家勇 魏泉德 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第2期8-8,46,共2页

关键词 肝脓肿 阿米巴肝脓肿 一氯化氮 TNFΑ

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阿米巴肝脓肿患者血清sIL－2R水平与红细胞免疫功能相关性的研究

12

作者 朱家勇 黄静 +1 位作者 汤斌 王唯唯 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1996年第3期16-18,共3页

本文检测了３２例阿米巴肝脓肿患者的血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ─２Ｒ）水平及红细胞免疫功能，并分析ｓＩＬ─２Ｒ与红细胞免疫功能之间的相关性。结果显示，阿米巴肝脓肿患者的ｓＩＬ─２Ｒ水平显著地高于正常对照组，而红... 本文检测了３２例阿米巴肝脓肿患者的血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ─２Ｒ）水平及红细胞免疫功能，并分析ｓＩＬ─２Ｒ与红细胞免疫功能之间的相关性。结果显示，阿米巴肝脓肿患者的ｓＩＬ─２Ｒ水平显著地高于正常对照组，而红细胞免疫功能则显著地低于正常对照组。经流式细胞仪测定，患者ＣＤ４细胞减少、ＣＤ８细胞增高，ＣＤ４／ＣＤ８比值下降。相关分析表明，血清ｓＩＬ─２Ｒ水平与红细胞Ｃ３ｂ受体花环率（ＲＢＣ─Ｃ３ｂＲＲ）呈显性负相关。阿米巴肝脓肿患者血清ｓＩＬ─２Ｒ水平的升高可能是导致患者红细胞免疫功能低下原因之一。 展开更多

关键词 阿米巴肝脓肿 白细胞介素 T细胞 红细胞免疫功能

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缩小膜壳绦虫人体感染1例

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作者 王唯唯 黄静 戴世忠 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第5期36-36,共1页

关键词 缩小膜壳绦虫 人体感染 涤虫病 病例报告

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