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小鼠pdx-1基因真核表达载体的构建及其在胚胎干细胞中的表达
被引量：
2
1
作者
周光纪
徐海伟
+3 位作者
杨丽
唐军
李达兵
屈纪富
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期1204-1207,共4页
目的:克隆小鼠pdx-1基因,构建其真核表达载体,并在小鼠胚胎干细胞中表达,为糖尿病的细胞移植治疗奠定基础。方法:PCR扩增小鼠胰腺pdx-1基因cDNA,酶切后和携带绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1重组,将pdx-1基因cDNA片段连接到...
目的:克隆小鼠pdx-1基因,构建其真核表达载体,并在小鼠胚胎干细胞中表达,为糖尿病的细胞移植治疗奠定基础。方法:PCR扩增小鼠胰腺pdx-1基因cDNA,酶切后和携带绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1重组,将pdx-1基因cDNA片段连接到pEGFP-N1载体的多克隆位点,形成重组载体pEGFP/pdx-1,转化大肠杆菌DH5α菌株,构建成pdx-1基因真核表达载体质粒。扩增DH5α后抽提质粒DNA,HindⅢ和BamHⅠ酶切,电泳,DNA测序鉴定。鉴定正确的质粒DNA用脂质体包裹后转染小鼠胚胎干细胞MESPU13。结果:从小鼠胰腺cDNA扩增出876bp的DNA片段并成功重组到pEGFP-N1载体中。经酶切和DNA测序验证,插入载体的DNA片段为pdx-1基因,插入方向正确。重组质粒经脂质体转染胚胎干细胞MESPU13,24h后观察到绿色荧光蛋白报告基因和目的基因的pdx-1表达。结论:小鼠pdx-1基因的克隆和真核表达载体构建获得成功,为进一步研究其功能奠定了基础。
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关键词
基因
PDX-1
胚胎干细胞
真核表达载体
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题名
小鼠pdx-1基因真核表达载体的构建及其在胚胎干细胞中的表达
被引量：
2
1
作者
周光纪
徐海伟
杨丽
唐军
李达兵
屈纪富
机构
广东医学院基础部生理学教研室
第三军医大学
生理学
教研室
第三军医大学附属西南医院急诊科
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期1204-1207,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30200129)
文摘
目的:克隆小鼠pdx-1基因,构建其真核表达载体,并在小鼠胚胎干细胞中表达,为糖尿病的细胞移植治疗奠定基础。方法:PCR扩增小鼠胰腺pdx-1基因cDNA,酶切后和携带绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1重组,将pdx-1基因cDNA片段连接到pEGFP-N1载体的多克隆位点,形成重组载体pEGFP/pdx-1,转化大肠杆菌DH5α菌株,构建成pdx-1基因真核表达载体质粒。扩增DH5α后抽提质粒DNA,HindⅢ和BamHⅠ酶切,电泳,DNA测序鉴定。鉴定正确的质粒DNA用脂质体包裹后转染小鼠胚胎干细胞MESPU13。结果:从小鼠胰腺cDNA扩增出876bp的DNA片段并成功重组到pEGFP-N1载体中。经酶切和DNA测序验证,插入载体的DNA片段为pdx-1基因,插入方向正确。重组质粒经脂质体转染胚胎干细胞MESPU13,24h后观察到绿色荧光蛋白报告基因和目的基因的pdx-1表达。结论:小鼠pdx-1基因的克隆和真核表达载体构建获得成功,为进一步研究其功能奠定了基础。
关键词
基因
PDX-1
胚胎干细胞
真核表达载体
Keywords
Genes, pdx - 1
Embryonic stem cells
Eukaryotic expression vector
分类号
R318.15 [医药卫生—生物医学工程]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠pdx-1基因真核表达载体的构建及其在胚胎干细胞中的表达
周光纪
徐海伟
杨丽
唐军
李达兵
屈纪富
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
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