血液系统恶性肿瘤患者血清可溶性B7-H4的检测及其临床意义 被引量：6

1

作者 王小梅 胡国艳 +4 位作者 刘伟 郑淑华 吕晶 王红梅 徐军发 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期893-894,897,共3页

目的:探讨部分血液系统恶性肿瘤患者血清可溶性B7-H4的水平及临床意义。方法:在建立了检测可溶性B7-H4(sB7-H4)ELISA夹心法的基础上对65例白血病患者、34例淋巴瘤患者、12例多发性骨髓瘤患者血清SB7-H4水平进行了检测,并采用50例健康体... 目的:探讨部分血液系统恶性肿瘤患者血清可溶性B7-H4的水平及临床意义。方法:在建立了检测可溶性B7-H4(sB7-H4)ELISA夹心法的基础上对65例白血病患者、34例淋巴瘤患者、12例多发性骨髓瘤患者血清SB7-H4水平进行了检测,并采用50例健康体检者血清sB7-H4水平作为对照。结果:正常体检者、白血病患者、淋巴瘤患者和多发性骨髓瘤患者血清sB7-H4浓度分别为(31.62±9.85)μg/L、(31.82±9.91)μg/L、(38.81±10.34)μg/L和(29.28±7.04)μg/L,其中健康体检者与白血病患者和多发性骨髓瘤患者血清sB7-H4水平差异无统计学意义,与淋巴瘤患者血清sB7-H4水平差异有统计学意义(P<0.01)。结论:sB7-H4与淋巴瘤的发病有关,而与白血病和多发性骨髓瘤无直接相关,检测sB7-H4对淋巴瘤的辅助诊断具有一定的临床意义。 展开更多

关键词 白血病 淋巴瘤 多发性骨髓瘤 sB7-H4

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鼻腔接种伤寒杆菌Fe-SOD的抗体应答及对鼠伤寒杆菌攻击的免疫保护作用

2

作者 徐军发 唐湘涓 +1 位作者 凌天翼 唐俊杰 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第1期66-69,共4页

目的　探讨鼻腔接种伤寒杆菌Fe SOD后血液和粘膜系统的抗体应答及免疫保护作用。方法　用IL - 1作为佐剂 ,将伤寒杆菌Fe SOD经鼻腔接种小鼠 ,检测小鼠血液及肠液中的抗体应答 ,并用鼠伤寒杆菌攻击小鼠 ,观察小鼠的存活情况 ,以确定免疫... 目的　探讨鼻腔接种伤寒杆菌Fe SOD后血液和粘膜系统的抗体应答及免疫保护作用。方法　用IL - 1作为佐剂 ,将伤寒杆菌Fe SOD经鼻腔接种小鼠 ,检测小鼠血液及肠液中的抗体应答 ,并用鼠伤寒杆菌攻击小鼠 ,观察小鼠的存活情况 ,以确定免疫保护作用。结果　当用IL - 1作为佐剂时 ,经鼻腔接种伤寒杆菌Fe SOD的小鼠血液和肠液中可产生高水平特异性IgG和IgA ;而腹腔注射仅在血液中产生高水平特异性IgG。另外发现经鼻腔接种伤寒杆菌Fe SOD的小鼠在 2LD50 鼠伤寒杆菌攻击后 ,3d和 7d的存活率均明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ,且以 5LD50 鼠伤寒杆菌攻击时 ,小鼠 7d的存活率明显高于对照组 (P <0 0 1)。结论　结果说明伤寒杆菌Fe SOD经鼻腔接种后可引起小鼠粘膜系统和血液中的抗体应答 ;对鼠伤寒杆菌的攻击可产生一定的免疫保护作用 ,也进一步说明了Fe SOD是沙门菌的共同保护性抗原。 展开更多

关键词 伤寒杆菌 鼠伤寒杆菌 FE-SOD 粘膜 抗体应答 免疫保护作用

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检测可溶性B7-H4 ELISA夹心法的建立 被引量：29

3

作者 胡国艳 郑淑华 +4 位作者 刘伟 那志萍 肖欢 张良清 徐军发 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期831-833,共3页

目的:建立定量检测可溶性B7-H4的ELISA夹心法。方法:采用抗人B7-H4单克隆抗体(mAb)包被酶标板,以兔抗鼠B7-H4多克隆抗体为夹心抗体、HRP标记羊抗兔IgG为检测抗体、重组小鼠可溶性B7-H4为标准品,建立检测可溶性B7-H4的间接ELISA法,并对5... 目的:建立定量检测可溶性B7-H4的ELISA夹心法。方法:采用抗人B7-H4单克隆抗体(mAb)包被酶标板,以兔抗鼠B7-H4多克隆抗体为夹心抗体、HRP标记羊抗兔IgG为检测抗体、重组小鼠可溶性B7-H4为标准品,建立检测可溶性B7-H4的间接ELISA法,并对50例正常人和37例术后乳腺癌患者血清样本进行了检测。结果:建立的夹心ELISA法检测B7-H4的线性范围为3.13μg/L^200μg/L,批内、批间变异系数分别为7.92%和11.1%。50例正常人和37例术后乳腺癌患者血清B7-H4的含量分别为(31.62±9.85)μg/L和(42.52±16.63)μg/L,两者比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论:成功建立了一种灵敏度高、稳定性好的检测可溶性B7-H4的夹心ELISA法。 展开更多

关键词 ELISA 夹心法 B7-H4 乳腺癌

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小鼠B7-H4基因克隆及真核表达载体的构建 被引量：9

4

作者 徐军发 袁春雷 +3 位作者 杨衡 赵坤 胡国艳 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期665-667,共3页

目的:克隆小鼠B7-H4(mB7-H4)基因cDNA全长,构建表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-GFP和表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-Fc。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB7-H4cDNA,将其全长cDN... 目的:克隆小鼠B7-H4(mB7-H4)基因cDNA全长,构建表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-GFP和表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-Fc。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB7-H4cDNA,将其全长cDNA去掉中止密码克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,并转染293T细胞使其表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白;将其胞外功能区cDNA克隆入pcDNA3·1-hFc真核表达载体中,并转染COS-7细胞使其表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白。结果:序列测定证实克隆的mB7-H4全长cDNA阅读框正确完整,酶切和序列测定证实mB7-H4分别正确插入pEGFP-N1和pcDNA3·1-hFc载体中,两种表达载体分别转染293T细胞和COS-7细胞后可分别表达跨膜型mB7-H4-GFP和可溶性mB7-H4-Fc。结论:成功地克隆mB7-H4基因并构建了两个真核表达载体,它们可分别表达跨膜型和可溶性融合蛋白。 展开更多

关键词 B7-H4 真核表达 基因克隆 载体构建

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小鼠可溶性CD83对树突状细胞表达共刺激分子和共刺激活性的影响 被引量：5

5

作者 徐军发 黄保军 +5 位作者 熊平 冯玮 徐勇 方敏 郑芳 龚非力 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期792-796,共5页

目的:研究可溶性小鼠CD83(mCD83)对树突状细胞(DC)表达共刺激分子及共刺激活性的影响。方法:克隆mCD83基因,构建mCD83胞外功能区与人IgG1αFc段融合基因的真核表达载体pmCD83-hIg,并在COS-7细胞中表达可溶性mCD83-hIg融合蛋白。采用ELIS... 目的:研究可溶性小鼠CD83(mCD83)对树突状细胞(DC)表达共刺激分子及共刺激活性的影响。方法:克隆mCD83基因,构建mCD83胞外功能区与人IgG1αFc段融合基因的真核表达载体pmCD83-hIg,并在COS-7细胞中表达可溶性mCD83-hIg融合蛋白。采用ELISA、Western blot和RT-PCR技术检测mCD83-hIg融合基因在COS-7细胞中的表达。用mCD83-hIg处理小鼠DC细胞系(DC2.4)采用流式细胞术检测DC细胞周期、细胞凋亡和共刺激分子CD80、CD86的表达影响;采用混合白细胞培养试验,检测mCD83-hIg对DC2.4刺激同种异基因T细胞增殖及产生IL-2和IFN-γ的影响。结果:酶切和序列测定鉴定显示构建的真核表达载体完全正确;mCD83-hIg对DC2.4细胞周期和细胞凋亡无影响,但可下调DC2.4表面共刺激分子CD80和CD86的表达;mCD83-hIg处理过的DC2.4刺激同种异基因T细胞增殖及产生IL-2和IFN-γ的能力显著下降。结论:mCD83-hIg可抑制DC表达共刺激分子并下调DC共刺激活性,从而抑制同种异基因T细胞增殖和产生细胞因子。 展开更多

关键词 mCD83-hIg 树突状细胞 DC2.4 共刺激分子 共刺激作用 混合白细胞培养 T细胞增殖 IL-2 IFN-γ

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兔抗人肥大细胞羧肽酶抗体的制备与鉴定 被引量：10

6

作者 陈章权 何素辉 +2 位作者 陆田田 何天文 何韶衡 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期859-861,共3页

目的:以原核表达的人肥大细胞羧肽酶(hMC-CP)免疫家兔,制备兔抗hMC-CP多克隆抗体并进行鉴定。方法:在大肠杆菌中诱导表达重组hMC-CP,经Ni-NTA-Agarose柱层析纯化后,以其为免疫原制备兔抗hMC-CP多抗,并以间接ELISA测定抗体效价,以Western... 目的:以原核表达的人肥大细胞羧肽酶(hMC-CP)免疫家兔,制备兔抗hMC-CP多克隆抗体并进行鉴定。方法:在大肠杆菌中诱导表达重组hMC-CP,经Ni-NTA-Agarose柱层析纯化后,以其为免疫原制备兔抗hMC-CP多抗,并以间接ELISA测定抗体效价,以Western blot鉴定抗体的特异性。结果:成功地表达并纯化了hMC-CP,以纯化的重hMC-CP组免疫家兔成功制备了兔抗hMC-CP抗体,ELISA结果显示效价达1∶6 400,Western blot分析表明该抗体能特异结合hMC-CP。结论:以纯化的重组hMC-CP为免疫原,成功地制备了效价、特异性较强兔抗hMC-CP抗体,为进一步建立简便的hMC-CP检测方法及进一步研究hMC-CP生物学功能打下了良好的基础。 展开更多

关键词 人肥大细胞羧肽酶 抗体 制备

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铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子相关基因的解析和定位 被引量：11

7

作者 杨维青 贾文祥 +2 位作者 殷长甫 刘贵霞 黄震 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期730-732,740,共4页

目的对4株铜绿假单胞菌临床菌株携带的Ⅰ类整合子相关基因进行解析和定位,探讨Ⅰ类整合子相关基因在细菌耐药性形成和耐药基因播散中的作用。方法采用PCR扩增、DNA测序、DNA序列比对的方法对4株铜绿假单胞菌临床菌株携带的Ⅰ类整合子相... 目的对4株铜绿假单胞菌临床菌株携带的Ⅰ类整合子相关基因进行解析和定位,探讨Ⅰ类整合子相关基因在细菌耐药性形成和耐药基因播散中的作用。方法采用PCR扩增、DNA测序、DNA序列比对的方法对4株铜绿假单胞菌临床菌株携带的Ⅰ类整合子相关基因进行解析,采用接合试验对该类整合子进行定位分析。结果4株铜绿假单胞菌I类整合子都含有耐药基因,该耐药基因在相应菌株中发挥耐药作用;该菌整合子位于质粒上。结论Ⅰ类整合子耐药基因在铜绿假单胞菌耐药性形成和耐药基因的播散中发挥作用。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 I类整合子 耐药基因

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检测人可溶性疱疹病毒侵入介体双抗体夹心ELISA的建立 被引量：5

8

作者 刘伟 郑淑华 +5 位作者 吕晶 鲍晶晶 王红梅 关向前 张慧 徐军发 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1028-1030,共3页

目的:建立快速、灵敏的检测人可溶性疱疹病毒侵入介体(HVEM)双抗体夹心ELISA。方法:在获得HVEM重组蛋白的基础上,制备兔抗人HVEM多克隆抗体,以HVEM单克隆抗体(mAb)和HVEM多克隆抗体(pAb)为双抗体,建立双抗体夹心ELISA。结果:建立的检测... 目的:建立快速、灵敏的检测人可溶性疱疹病毒侵入介体(HVEM)双抗体夹心ELISA。方法:在获得HVEM重组蛋白的基础上,制备兔抗人HVEM多克隆抗体,以HVEM单克隆抗体(mAb)和HVEM多克隆抗体(pAb)为双抗体,建立双抗体夹心ELISA。结果:建立的检测人可溶性HVEM双抗体夹心ELISA最低检出限为3.91μg/L,标准曲线范围7.81～250μg/L,线性方程为y=0.0021x+0.1852,R2=0.9944。回收率在89.7%～92.8%之间,平均回收率为91.4%。批内变异系数<10%,批间变异系数<15%。结论:建立的双抗体夹心ELISA快速、灵敏、简单,可满足实际工作需要。 展开更多

关键词 HVEM 共刺激分子 抗体制备 ELISA

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小鼠BTLA胞外功能区基因克隆表达及其对DC表面B7分子表达的影响 被引量：5

9

作者 徐军发 赵坤 +4 位作者 黄保军 熊平 方敏 沈关心 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期413-416,共4页

目的:研究重组谷胱甘肽S-转移酶(GST)-小鼠B/T细胞弱化因子包外功能区(mBTLAext)融合蛋白(GST-mBT-LAext)对小鼠树突状细胞系DC2.4表面B7分子表达的影响。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB-TLAcDNA。将其胞外功能区基因... 目的:研究重组谷胱甘肽S-转移酶(GST)-小鼠B/T细胞弱化因子包外功能区(mBTLAext)融合蛋白(GST-mBT-LAext)对小鼠树突状细胞系DC2.4表面B7分子表达的影响。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB-TLAcDNA。将其胞外功能区基因克隆入原核表达载体pGEX-4T-2中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2/mBTLAext并转化E.coliBL21(DE3),以1mmol/L的IPTG诱导表达。提取包涵体,经变性、负性后,采用GlutathioneSepharose4B柱纯化可溶性的GST-mBTLAext。将不同浓度的GST-mBTLAext加入到DC2.4的培养体系中,采用流式细胞术检测其对DC上B7-1和B7-2表达的影响。结果:成功地克隆了mBTLA基因,并构建了重组原核表达载体。变性、复性,经GlutathioneSepharose4B柱纯化,获得了可溶性的GST-mBTLAext融合蛋白。经SDS-PAGE鉴定表明,融合蛋白的相对分子质量(Mr)为43000,同预期的结果一致。流式细胞术检测显示,GST-mBTLAext可上调DC2.4上B7-1的表达并呈剂量依赖性,这一作用可被抗GST-mBTLAext血清阻断。未检测到GST-mBT-LAextDC2.4上B7-2的表达有影响。结论:BTLA对DC2.4表面B7分子表达的上调可能是BTLA-HVEM途径反向信号对DC作用的结果,对进一步研究其对DC生物学行为的影响及其分子机制具有重要的理论意义。 展开更多

关键词 树突状细胞 B/T淋巴细胞弱化因子 B7分子 原核表达

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人IL-37在大肠杆菌表达及多克隆抗体的制备与鉴定 被引量：5

10

作者 赵付前 何素辉 +3 位作者 何玲鸽 林妙芬 王森 陈章权 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期513-516,共4页

目的原核表达白细胞介素37(IL-37)及制备其多克隆抗体。方法 PCR扩增IL-37b成熟肽编码区基因,克隆至表达载体pET28a,转化大肠杆菌感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化重组蛋白,以纯化的重组蛋白IL-37为免疫原免疫... 目的原核表达白细胞介素37(IL-37)及制备其多克隆抗体。方法 PCR扩增IL-37b成熟肽编码区基因,克隆至表达载体pET28a,转化大肠杆菌感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化重组蛋白,以纯化的重组蛋白IL-37为免疫原免疫BALB/c小鼠制备其特异性抗体,用ELISA、Western blot法和免疫组织化学染色检测抗体的效价和特异性。结果原核表达了重组蛋白IL-37b成熟肽,并获得高效价的小鼠抗IL-37抗体,能特异性识别天然的IL-37抗原。结论成功制备效价高、特异性好的小鼠抗IL-37抗体。 展开更多

关键词 白细胞介素37 表达 抗体 制备 小鼠

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人肥大细胞类糜蛋白酶基因的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定 被引量：4

11

作者 陈章权 黄震 +3 位作者 何天文 陆田田 梁晓东 何韶衡 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1025-1027,共3页

目的:克隆人肥大细胞类糜蛋白酶cDNA,并进行原核表达,制备重组蛋白免疫家兔,制备兔抗类糜蛋白酶多克隆抗体。方法:用RT-PCR技术克隆类糜蛋白酶cDNA,用Gateway技术构建表达载体,以大肠杆菌为宿主,用L-阿拉伯糖诱导重组肥大细胞类糜蛋白... 目的:克隆人肥大细胞类糜蛋白酶cDNA,并进行原核表达,制备重组蛋白免疫家兔,制备兔抗类糜蛋白酶多克隆抗体。方法:用RT-PCR技术克隆类糜蛋白酶cDNA,用Gateway技术构建表达载体,以大肠杆菌为宿主,用L-阿拉伯糖诱导重组肥大细胞类糜蛋白酶的表达,经Ni-NTA-Agarose柱层析纯化后,以其为免疫原制备兔抗类糜蛋白酶多抗,并以间接ELISA测定抗体效价,以Westernblot鉴定抗体的特异性。结果:成功地克隆了人肥大细胞类糜蛋白酶cDNA,并在大肠杆菌BL21-AI中表达成功,用纯化的重组类糜蛋白酶为免疫原,免疫家兔制备了兔抗类糜蛋白酶抗体,ELISA结果显示效价达1:12800,Western blot分析表明该抗体能特异结合类糜蛋白酶。结论:以纯化的重组类糜蛋白酶为免疫原,成功地制备了效价及特异性较高的兔抗类糜蛋白酶抗体,为进一步建立简便的类糜蛋白酶检测方法及研究类糜蛋白酶生物学功能奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 人肥大细胞类糜蛋白酶 表达 抗体 制备

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结核性胸腔积液中细胞因子的变化 被引量：5

12

作者 邵燕丽 吕小华 +3 位作者 吕世静 黄罗佳 何德 陈文青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期382-383,386,共3页

目的:观察不同情况下结核性胸腔积液中3种致炎细胞因子IL-12、IL-18、TNF-α和2种抑制性细胞因子TGF-β1、IL-10的变化。方法:采用ABC-ELISA及双抗体夹心ELISA进行检测,并进行相关性分析。结果:除IL-18外,IL-12、TNF-α、IL-10胸水中含... 目的:观察不同情况下结核性胸腔积液中3种致炎细胞因子IL-12、IL-18、TNF-α和2种抑制性细胞因子TGF-β1、IL-10的变化。方法:采用ABC-ELISA及双抗体夹心ELISA进行检测,并进行相关性分析。结果:除IL-18外,IL-12、TNF-α、IL-10胸水中含量都远远超过血清中的含量,TGF-β1血清中含量远远超过胸水中含量(P<0.05或P<0.01)。结论:IL-18可能用作加强疫苗保护性的一种辅助成分;证明细胞因子IL-12、TNF-α、TGF-β1、IL-10与结核病免疫发病密切相关。 展开更多

关键词 胸腔积液/结核 细胞因子/致炎性 细胞因子/抑制性

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兔抗重组人钙网蛋白抗体的制备及其特性鉴定 被引量：2

13

作者 唐晓磊 梁晓东 +1 位作者 许瑞环 陈章权 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期641-643,共3页

目的:制备兔抗人钙网蛋白抗体并进行特性鉴定。方法:用PCR法扩增人钙网蛋白(CRT)基因,并克隆至pET32a表达载体中。以重组质粒pET32a/hCRT转化大肠杆菌BL-21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化目的蛋... 目的:制备兔抗人钙网蛋白抗体并进行特性鉴定。方法:用PCR法扩增人钙网蛋白(CRT)基因,并克隆至pET32a表达载体中。以重组质粒pET32a/hCRT转化大肠杆菌BL-21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化目的蛋白。以纯化的hCRT为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗体,用ELISA法、Westernblot和免疫组化染色法检测抗体的效价和特异性。结果:成功地表达并纯化hCRT重组蛋白。以纯化的重组hCRT免疫新西兰大白兔制备的抗体,ELISA检测其效价为1∶51 200,Western blot分析显示,该抗体能与hCRT特异性结合。免疫组化染色法检测结果表明,该抗体能识别天然的hCRT。结论:以重组hCRT为免疫原,成功地制备效价高、特异性好的兔抗hCRT抗体,为进一步进行钙网蛋白的检测及其临床应用研究奠定了基础。 展开更多

关键词 钙网蛋白 表达 抗体 制备 兔

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橡胶延长因子基因的原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量：2

14

作者 陈章权 吴坤鑫 +2 位作者 梁晓东 黄震 陆田田 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第29期12619-12621,共3页

[目的]制备橡胶延长因子重组蛋白及其多克隆抗体。[方法]用RT-PCR法扩增橡胶延长因子(rubber elongation factor,REF)编码区基因,将其克隆到原核表达载体pDEST17中,转化大肠杆菌BL21-AI,用L-阿拉伯糖诱导重组蛋白的表达,并采用亲和层析... [目的]制备橡胶延长因子重组蛋白及其多克隆抗体。[方法]用RT-PCR法扩增橡胶延长因子(rubber elongation factor,REF)编码区基因,将其克隆到原核表达载体pDEST17中,转化大肠杆菌BL21-AI,用L-阿拉伯糖诱导重组蛋白的表达,并采用亲和层析法纯化重组蛋白,以之为免疫原免疫小鼠制备多克隆抗体,并用ELISA和W estern blot对抗体效价和特异性进行鉴定。[结果]高效表达和纯化了橡胶延长因子重组蛋白,用其免疫家小鼠,获得了高效价的特异性多克隆抗体,W estern blot检测显示该抗体可识别胶乳中的天然橡胶延长因子。[结论]成功获得橡胶延长因子重组蛋白,制备了效价高、特异性好的鼠抗橡胶延长因子抗体,为进一步橡胶延长因子及其他橡胶粒子膜蛋白的生物学功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 橡胶延长因子 基因 表达 抗体 制备

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兔抗人CD1d分子α3结构域抗体的制备与鉴定 被引量：1

15

作者 陈章权 黄震 +2 位作者 梁晓东 何天文 陆田田 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期250-252,共3页

目的:制备兔抗人CD1d分子α3结构域(hCD1d-α3)多克隆抗体。方法:PCR法扩增出人hCD1d-α3编码区基因,将其克隆入原核表达载体pET28中,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,用Ni2+-NTA Agarose亲和层析法纯化重组蛋白,以之... 目的:制备兔抗人CD1d分子α3结构域(hCD1d-α3)多克隆抗体。方法:PCR法扩增出人hCD1d-α3编码区基因,将其克隆入原核表达载体pET28中,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,用Ni2+-NTA Agarose亲和层析法纯化重组蛋白,以之为免疫原免疫家兔,制备多克隆抗体,并用ELISA、Western blot及免疫组织化学法检测抗体。结果:成功构建了hCD1d-α3原核表达载体pET28/h CD1d-α3,高效表达并纯化hCD1d-α3蛋白,间接ELISA检测所制备抗体的效价为1∶6400,Western blot显示该抗体能与hCD1d特异结合,免疫组织化学法检测结果表明该抗体识别人小肠组织中的天然hCD1d。结论:通过制备重组hCD1d-α3蛋白为免疫原,免疫家兔,成功地制备了效价高、特异性好的抗hCD1d-α3多克隆抗体。 展开更多

关键词 CD1D α3结构域 表达 抗体 制备

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人CD1d分子胞外区的原核表达及其多克隆抗体的制备

16

作者 陈章权 黄震 +2 位作者 梁晓东 陆田田 何天文 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期348-350,共3页

目的:原核细胞表达人CD1d分子胞外区及制备其多克隆抗体。方法:用RT-PCR法扩增人CD1d分子胞外区基因,将其克隆入原核表达载体pET28中,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,用亲和层析法纯化重组蛋白,以之为免疫原免疫小鼠... 目的:原核细胞表达人CD1d分子胞外区及制备其多克隆抗体。方法:用RT-PCR法扩增人CD1d分子胞外区基因,将其克隆入原核表达载体pET28中,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,用亲和层析法纯化重组蛋白,以之为免疫原免疫小鼠制备多克隆抗体,并以ELISA、Western blot及免疫组织化学法检测抗体。结果:在原核细胞中高效表达和纯化了人CD1d分子胞外区蛋白,用其免疫小鼠,获得了效价高、特异性较好的多克隆抗体,免疫组织化学检测显示该抗体可识别人小肠组织中的天然CD1d分子。结论:成功制备了人CD1d分子胞外区重组蛋白及鼠抗人CD1d分子胞外区抗体,为进一步建立人CD1d分子的免疫学检测方法及其生物学功能的深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 CD1D 基因 表达 抗体 制备

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小鼠BTLA慢病毒表达载体的构建及鉴定

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作者 曾今诚 鲍晶晶 +5 位作者 王红梅 张慧 张俊爱 王万党 关向前 徐军发 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期261-264,共4页

目的构建小鼠BTLA慢病毒表达载体,并对表达产物进行鉴定。方法以pET-28a-mBTLA质粒为模板,通过PCR技术构建pMD18-T-mBTLA质粒,将小鼠BTLA基因全长编码序列克隆到慢病毒转移载体,通过脂质体转染293T细胞包装成小鼠BTLA慢病毒颗粒。PCR技... 目的构建小鼠BTLA慢病毒表达载体,并对表达产物进行鉴定。方法以pET-28a-mBTLA质粒为模板,通过PCR技术构建pMD18-T-mBTLA质粒,将小鼠BTLA基因全长编码序列克隆到慢病毒转移载体,通过脂质体转染293T细胞包装成小鼠BTLA慢病毒颗粒。PCR技术和基因测序对重组质粒进行鉴定。荧光显微镜观察重组慢病毒感染293T细胞形态学变化。RT-PCR和Western blot法鉴定BTLA在重组慢病毒感染293T细胞中的表达。50%组织培养感染剂量法(TCID50法)检测重组慢病毒滴度。结果成功构建的pMD18-T-mBTLA质粒和pSL6-mBTLA质粒,经双酶切电泳后均出现大小约为1 kb的条带与mB-TLA编码序列的大小相符。基因测序并比对分析进一步证实mBTLA编码序列成功整合到质粒载体。病毒上清PCR扩增和293T细胞形态学观察证实Lenti-mBTLA慢病毒包装成功。TCID50法测定Lenti-mBTLA慢病毒滴度为1.3×108pfu/mL。RT-PCR和Western blot法证实Lenti-mBTLA慢病毒能有效表达mBTLA mRNA和蛋白质。结论成功构建了表达小鼠BTLA的慢病毒。 展开更多

关键词 慢病毒 B、T淋巴细胞弱化因子 293T细胞 PCR技术

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人BTLA分子胞外区的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

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作者 郑淑华 刘伟 +3 位作者 吕晶 王红梅 鲍晶晶 徐军发 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期419-421,共3页

目的:表达并纯化重组人BTLA(hBTLA)分子胞外区,制备和鉴定兔抗hBTLA多克隆抗体,为进一步实验研究奠定基础。方法:采用特异性引物扩增hBTLA胞外功能区DNA,经酶切、连接构建原核表达载体pET28a-hBTLA。将构建的重组表达质粒转化入E.coliBL... 目的:表达并纯化重组人BTLA(hBTLA)分子胞外区,制备和鉴定兔抗hBTLA多克隆抗体,为进一步实验研究奠定基础。方法:采用特异性引物扩增hBTLA胞外功能区DNA,经酶切、连接构建原核表达载体pET28a-hBTLA。将构建的重组表达质粒转化入E.coliBL21(DE3)菌株,采用IPTG诱导表达,Ni-NTA柱亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度。将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对抗体进行纯化、效价测定及特异性鉴定。结果:序列测定证实构建的pET28a-hBTLA重组表达载体含有hBTLA编码序列,其序列比对分析与GenBank中公布序列一致,质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mr)为15720的目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析纯化后的目的蛋白达到电泳纯。双向琼脂扩散法检测抗体效价为1∶16,ELISA法检测抗体效价为1∶20 000,Western blot分析显示抗体能特异性结合重组hBTLA蛋白。结论:成功构建了hBTLA蛋白的原核表达载体,获得高纯度的融合蛋白,制备高效价、高特异性的多克隆抗体。 展开更多

关键词 BTLA 原核表达 多克隆抗体

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鼠抗人肥大细胞类糜蛋白酶N端片段抗体的制备与鉴定

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作者 陈章权 黄震 +1 位作者 梁晓东 陆田田 《实用医学杂志》 CAS 2008年第11期1865-1867,共3页

目的:在大肠杆菌中表达人肥大细胞类糜蛋白酶(hMCC)N端片段(hMCC-N),并制备其鼠源性多克隆抗体。方法:通过PCR法扩增hMCC-N端基因片段,将其克隆至pMAL-c2x原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过Amylose树... 目的:在大肠杆菌中表达人肥大细胞类糜蛋白酶(hMCC)N端片段(hMCC-N),并制备其鼠源性多克隆抗体。方法:通过PCR法扩增hMCC-N端基因片段,将其克隆至pMAL-c2x原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过Amylose树脂亲和层析纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠抗hMCC-N端片段多克隆抗体,并以间接ELISA测定抗体效价,以Westernblot鉴定抗体的特异性。结果:PCR扩增得到360bp的hMCC-N端基因片段,克隆入表达载体pMAL-c2x,构建了与标签蛋白麦芽糖结合蛋白基因融合表达载体pMAL-c2x/hMCC-N,融合蛋白在大肠杆菌中得到了稳定表达,并经亲和层析,纯化出可溶性的重组蛋白,用其免疫小鼠,获取了鼠抗hMCC-N端片段的多克隆抗体,ELISA结果显示效价达1∶12800,Westernblot分析表明该抗体能特异结合hMCC。结论:成功地制备了效价高、特异性较强鼠抗hMCC-N端片段抗体,为进一步建立hMCC的ELISA检测方法打下了良好的基础。 展开更多

关键词 肥大细胞 糜蛋白酶 抗体 制备

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