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禽流感病毒广东株HA基因BLSOM神经网络分型方法的建立
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作者 田纯见 罗琼 +5 位作者 高佳卉 林志雄 鱼海琼 刘志玲 陈茹 吴晓薇 《广东农业科学》 CAS 2016年第2期156-160,共5页
利用25个禽流感病毒及相关流感病毒广东株HA基因序列,建立三、四核苷酸特征基因片段BLSOM神经网络分型方法,对各片段数量进行统计和归一化处理。设计程序由MATLAB函数模拟人脑思维自组织学习,当训练步数为100及以上各毒株能成功聚类。H1... 利用25个禽流感病毒及相关流感病毒广东株HA基因序列,建立三、四核苷酸特征基因片段BLSOM神经网络分型方法,对各片段数量进行统计和归一化处理。设计程序由MATLAB函数模拟人脑思维自组织学习,当训练步数为100及以上各毒株能成功聚类。H1、H3、H5、H7和H9亚型主要毒株分别归为一类,其中H3N2和H7N9毒株HA基因聚类图谱高度相似,表明这些毒株起源相同;不同年代H5N1毒株差异较大;H1N1和H9N2各1个毒株聚为一类,表明这两种病毒自然重组变异,为高危毒株筛查和溯源提供参考。 展开更多
关键词 禽流感病毒 BLSOM HA基因 神经网络 分型
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中国高致病性禽流感疫情流行特征及其防控措施 被引量:8
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作者 田纯见 罗琼 +1 位作者 高佳卉 林志雄 《湖北农业科学》 2017年第5期912-914,918,共4页
高致病性禽流感在中国持续流行,H7N9病毒感染人类出现新的疫情特征,需要进一步强化防控措施。针对疫情点多面广、H9亚型泛滥重组和交叉感染带毒等特点,应做到依法处置疫情,加强家禽企业生物安全隔离区建设,谨慎使用疫苗,完善监测系统和... 高致病性禽流感在中国持续流行,H7N9病毒感染人类出现新的疫情特征,需要进一步强化防控措施。针对疫情点多面广、H9亚型泛滥重组和交叉感染带毒等特点,应做到依法处置疫情,加强家禽企业生物安全隔离区建设,谨慎使用疫苗,完善监测系统和兽医管理体制。结合禽流感最新疫情流行特征,对中国禽流感防控体系建设进行了探讨。 展开更多
关键词 高致病性禽流感 生物安全隔离区 疫苗 监测系统 公共卫生
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病毒性出血性败血症病毒RNA标准物质的研制 被引量:4
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作者 刘志玲 陈茹 +5 位作者 朱道中 吴晓薇 林志雄 田纯见 罗琼 段燕喻 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第3期15-19,共5页
利用基因克隆和体外转录技术制备病毒性出血性败血症病毒(VHSV)核酸检测标准物质。设计VHSV N基因的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品。初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准物质候选... 利用基因克隆和体外转录技术制备病毒性出血性败血症病毒(VHSV)核酸检测标准物质。设计VHSV N基因的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品。初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准物质候选物。采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法对转录的RNA片段进行定值。通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量(拷贝数),并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算。均一性结果显示瓶间差异小于5%,稳定性试验表明室温20℃~25℃(相对湿度20%~25%)7 d,2℃~8℃保存1个月及-20℃保存6个月的含量均无明显变化。核酸标准物质定值为(6.625±0.149)×10~8copies/μL,可用作VHSV核酸检测的标准质控品。 展开更多
关键词 病毒性出血性败血症 实时定量RT-PCR 标准物质
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病毒性神经坏死病病毒核酸检测用标准物质的制备 被引量:5
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作者 段燕喻 陈茹 +4 位作者 吴晓薇 朱道中 林志雄 田纯见 刘志玲 《中国动物检疫》 CAS 2018年第2期102-107,共6页
利用基因克隆和体外转录技术,制备病毒性神经坏死病病毒(Nervous necrosis virus,NNV)核酸检测标准物质。设计NNV RNA2基因的特异性引物,通过RT-PCR获得目的片段并连接至p GEM-T载体;采用体外转录方法,获得大量纯品RNA。初步定量稀释至... 利用基因克隆和体外转录技术,制备病毒性神经坏死病病毒(Nervous necrosis virus,NNV)核酸检测标准物质。设计NNV RNA2基因的特异性引物,通过RT-PCR获得目的片段并连接至p GEM-T载体;采用体外转录方法,获得大量纯品RNA。初步定量稀释至约10~8 copies/μL,均匀性检验结果显示样品间差异<5%;稳定性检验表明,室温(20~25℃)保存7 d、冷藏(2~8℃)保存1个月和冷冻(-20℃)保存6个月的含量均无明显变化。采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法,对转录的RNA片段进行定值,并根据委托单位的定值结果进行不确定度估算。核酸标准物质定值为(8.452±0.068)×10~8 copies/μL,可用作NNV核酸检测的标准质控品。 展开更多
关键词 病毒性神经坏死病 实时定量RT-PCR 标准物质
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供港澳家禽高致病性禽流感及H7N9病毒监测与分析
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作者 田纯见 高佳卉 +2 位作者 王宏 罗琼 林志雄 《广东畜牧兽医科技》 2016年第4期29-32,43,共5页
采集供港澳家禽喉头、泄殖腔拭子进行禽流感病毒监测,建立一步法荧光RT-PCR检测A型和H5、H7、H9亚型及H7N9病毒,所用高通量核酸提取和基因扩增体系可适应活禽出口快速检测通关的要求。2006—2015年共检测约150万份拭子,结果 H5和H7亚型... 采集供港澳家禽喉头、泄殖腔拭子进行禽流感病毒监测,建立一步法荧光RT-PCR检测A型和H5、H7、H9亚型及H7N9病毒,所用高通量核酸提取和基因扩增体系可适应活禽出口快速检测通关的要求。2006—2015年共检测约150万份拭子,结果 H5和H7亚型高致病性禽流感全部为阴性,H9亚型等A型流感病毒阳性率约0.035%,冬、春季节检出率较高,H9亚型病毒HA基因与H7N9病毒广东流行毒株具有亲缘关系。供港澳禽流感病毒监测体系快速高效、生物安全性好,结合抗体监测和临床检查,可保证出口家禽处于无禽流感状态。 展开更多
关键词 高致病性禽流感 荧光RT-PCR 监测 家禽 供港澳
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