期刊导航
期刊开放获取
上海教育软件发展有限公..
期刊文献
+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
检索
高级检索
期刊导航
共找到
1
篇文章
<
1
>
每页显示
20
50
100
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
文摘
详细
列表
相关度排序
被引量排序
时效性排序
锦鲤疱疹病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及临床应用
1
作者
钟亮宁
何洪桂
+11 位作者
李小军
叶毅飞
王红兵
刘烺
潘杰
谢海燕
莫钻兰
赖颖
黄洁莹
朱燕秋
李敏
张险朋
《广东海洋大学学报》
CSCD
北大核心
2024年第6期19-28,共10页
【目的】构建一种敏感性高、特异性强、重复性好的锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)微滴式数字PCR(ddPCR)检测方法,为锦鲤疱疹病毒的定量检测和低浓度样品检测提供技术支持。【方法】参照靶位基因锦鲤疱疹病毒TK基因(GenBank登录号:KX...
【目的】构建一种敏感性高、特异性强、重复性好的锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)微滴式数字PCR(ddPCR)检测方法,为锦鲤疱疹病毒的定量检测和低浓度样品检测提供技术支持。【方法】参照靶位基因锦鲤疱疹病毒TK基因(GenBank登录号:KX609547.1)设计合成引物和探针,通过比对筛选出最佳引物探针,优化反应体系和退火温度,建立与实时荧光PCR方法的线性关系,并分析该方法的敏感性、特异性、重复性,最后应用于临床样品检测。【结果】当引物、探针浓度分别为900、300 nmol/L且退火温度为57℃时,建立的KHVddPCR扩增反应效率最高,阴阳性微滴分布界限最为明显。KHVddPCR敏感性强,检测限低至0.46拷贝/μL,在0~8.1×10^(4)拷贝/μL范围内,与实时荧光PCR检测结果的线性关系较佳(R2=0.9949)。检测变异系数低,批内变异系数为2.70%,批间变异系数为3.02%。与鲤浮肿病毒、鲫造血器官坏死病毒、真鲷虹彩病毒、草鱼出血病毒、罗非鱼湖病毒、十足目虹彩病毒、虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)和诺卡氏菌(Nocardia seriolae)等其他8种常见的水生动物疫病阳性样品无非特异性反应。在88份的临床样品检测中,阳性2份,阳性检出率为2.27%;在8份能力验证样品检测中,5份阳性,与能力验证满意结果一致,与实时荧光PCR方法和套式PCR方法检测结果一致。【结论】建立的锦鲤疱疹病毒ddPCR检测方法敏感性高、特异性强、重复性好,可定量检测锦鲤疱疹病毒DNA,为锦鲤疱疹病毒的研究提供参考。
展开更多
关键词
锦鲤疱疹病毒
微滴式数字PCR
线性关系
特异性
变异系数
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
锦鲤疱疹病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及临床应用
1
作者
钟亮宁
何洪桂
李小军
叶毅飞
王红兵
刘烺
潘杰
谢海燕
莫钻兰
赖颖
黄洁莹
朱燕秋
李敏
张险朋
机构
东莞市动物疫病预防控制中心
广东俊一锦鲤养殖有限公司
东莞市人兽共患病重点实验室
出处
《广东海洋大学学报》
CSCD
北大核心
2024年第6期19-28,共10页
基金
东莞市2021年省乡村振兴战略专项资金(“大专项+任务清单”)项目(20211800400112)
东莞市社会发展科技项目(20231800939872)。
文摘
【目的】构建一种敏感性高、特异性强、重复性好的锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)微滴式数字PCR(ddPCR)检测方法,为锦鲤疱疹病毒的定量检测和低浓度样品检测提供技术支持。【方法】参照靶位基因锦鲤疱疹病毒TK基因(GenBank登录号:KX609547.1)设计合成引物和探针,通过比对筛选出最佳引物探针,优化反应体系和退火温度,建立与实时荧光PCR方法的线性关系,并分析该方法的敏感性、特异性、重复性,最后应用于临床样品检测。【结果】当引物、探针浓度分别为900、300 nmol/L且退火温度为57℃时,建立的KHVddPCR扩增反应效率最高,阴阳性微滴分布界限最为明显。KHVddPCR敏感性强,检测限低至0.46拷贝/μL,在0~8.1×10^(4)拷贝/μL范围内,与实时荧光PCR检测结果的线性关系较佳(R2=0.9949)。检测变异系数低,批内变异系数为2.70%,批间变异系数为3.02%。与鲤浮肿病毒、鲫造血器官坏死病毒、真鲷虹彩病毒、草鱼出血病毒、罗非鱼湖病毒、十足目虹彩病毒、虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)和诺卡氏菌(Nocardia seriolae)等其他8种常见的水生动物疫病阳性样品无非特异性反应。在88份的临床样品检测中,阳性2份,阳性检出率为2.27%;在8份能力验证样品检测中,5份阳性,与能力验证满意结果一致,与实时荧光PCR方法和套式PCR方法检测结果一致。【结论】建立的锦鲤疱疹病毒ddPCR检测方法敏感性高、特异性强、重复性好,可定量检测锦鲤疱疹病毒DNA,为锦鲤疱疹病毒的研究提供参考。
关键词
锦鲤疱疹病毒
微滴式数字PCR
线性关系
特异性
变异系数
Keywords
Koi herpevirus
droplet digital PCR
linear relationship
specificity
coefficients of variation
分类号
S943 [农业科学—水产养殖]
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
锦鲤疱疹病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及临床应用
钟亮宁
何洪桂
李小军
叶毅飞
王红兵
刘烺
潘杰
谢海燕
莫钻兰
赖颖
黄洁莹
朱燕秋
李敏
张险朋
《广东海洋大学学报》
CSCD
北大核心
2024
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
上一页
1
下一页
到第
页
确定
用户登录
登录
IP登录
使用帮助
返回顶部
