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截短人胱硫醚β-合成酶的可溶性表达、纯化及活性鉴定
被引量:
3
1
作者
王利群
顾雅平
+5 位作者
曹利民
汪庆
于海燕
奚学志
孙培培
沈关心
《华中科技大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期697-703,共7页
目的构建截短人胱硫醚β-合成酶(T-hCBS)基因原核表达载体,得到可溶性的T-hCBS蛋白,为同型半胱氨酸检测试剂盒的开发打下基础。方法通过优化T-hCBS基因,克隆并构建重组表达质粒pET15b/T-hCBS,转化大肠埃希菌BL21。使用Ni 2+亲和层析柱...
目的构建截短人胱硫醚β-合成酶(T-hCBS)基因原核表达载体,得到可溶性的T-hCBS蛋白,为同型半胱氨酸检测试剂盒的开发打下基础。方法通过优化T-hCBS基因,克隆并构建重组表达质粒pET15b/T-hCBS,转化大肠埃希菌BL21。使用Ni 2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,再通过HiTrap脱盐柱脱盐,采用比色法检测目的蛋白活性。结果重组蛋白在大肠埃希菌中可以高效表达,产量为44mg/L,比活约1 100U/mg。15%SDS-PAGE显示其相对分子质量为45kD,与预计大小一致。表达菌体超声破碎后上清及纯化的蛋白溶液均呈现红色。结论成功克隆和表达了T-hCBS蛋白,并得到高产高酶活性的可溶性蛋白,对同型半胱氨酸检测试剂盒的开发有一定的潜在应用价值。
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关键词
胱硫醚Β-合成酶
重组
可溶性蛋白
表达
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职称材料
题名
截短人胱硫醚β-合成酶的可溶性表达、纯化及活性鉴定
被引量:
3
1
作者
王利群
顾雅平
曹利民
汪庆
于海燕
奚学志
孙培培
沈关心
机构
常州
大学制药与生命科学学院
常州二十一世纪生物技术研究所有限公司
华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系
出处
《华中科技大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期697-703,共7页
基金
科技部国际合作资助项目(No.2011DFR30700)
文摘
目的构建截短人胱硫醚β-合成酶(T-hCBS)基因原核表达载体,得到可溶性的T-hCBS蛋白,为同型半胱氨酸检测试剂盒的开发打下基础。方法通过优化T-hCBS基因,克隆并构建重组表达质粒pET15b/T-hCBS,转化大肠埃希菌BL21。使用Ni 2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,再通过HiTrap脱盐柱脱盐,采用比色法检测目的蛋白活性。结果重组蛋白在大肠埃希菌中可以高效表达,产量为44mg/L,比活约1 100U/mg。15%SDS-PAGE显示其相对分子质量为45kD,与预计大小一致。表达菌体超声破碎后上清及纯化的蛋白溶液均呈现红色。结论成功克隆和表达了T-hCBS蛋白,并得到高产高酶活性的可溶性蛋白,对同型半胱氨酸检测试剂盒的开发有一定的潜在应用价值。
关键词
胱硫醚Β-合成酶
重组
可溶性蛋白
表达
Keywords
cystathionine β-synthase
recombinant
soluble protein
expression
分类号
R345.5 [医药卫生—基础医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
截短人胱硫醚β-合成酶的可溶性表达、纯化及活性鉴定
王利群
顾雅平
曹利民
汪庆
于海燕
奚学志
孙培培
沈关心
《华中科技大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2012
3
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