目的建立了双水相萃取结合气相色谱质谱法(gas chromatography-mass spectrometry,GC/MS)测定不同香型白酒中氨基甲酸乙酯的测定方法。方法对比研究了3种不同的样品液液萃取方法,在此基础上,优化获得了最优双水相萃取(LLE-GC/MS)方案:...目的建立了双水相萃取结合气相色谱质谱法(gas chromatography-mass spectrometry,GC/MS)测定不同香型白酒中氨基甲酸乙酯的测定方法。方法对比研究了3种不同的样品液液萃取方法,在此基础上,优化获得了最优双水相萃取(LLE-GC/MS)方案:准确移取5 m L试样于10 m L比色管中,再加入内标PC使用液,逐渐增加管中K2HPO4固体,直到饱和为止,静置至分层完全。取上清液1.5 m L于离心管中,加无水Mg SO4 150mg摇匀离心。取上清直接进样,用GC/MS检测样品中氨基甲酸乙酯的含量。通过分别检测白酒三大香型:清香、浓香、酱香型,对LLE-GC/MS方法进行了评价。结果在最优条件下检测的相对标准偏差为2.84%~3.95%,回收率为:86.45%~111.58%,检测限为1.34μg/L。结论此方法准确性好、简便、低成本,适用于上述3种香型白酒中氨基甲酸乙酯的检测。展开更多
蛋白酶 A 由 PEP4 基因编码，对酿酒酵母的生理生化功能起到重要的作用，蛋白酶 A 缺失或低表达对于理论研究和实际应用都具有重要价值。本文利用重叠延伸法构建了蛋白酶 A 第 294 位活性中心突变的 PEP4 基因表达载体。同时构建了野生...蛋白酶 A 由 PEP4 基因编码，对酿酒酵母的生理生化功能起到重要的作用，蛋白酶 A 缺失或低表达对于理论研究和实际应用都具有重要价值。本文利用重叠延伸法构建了蛋白酶 A 第 294 位活性中心突变的 PEP4 基因表达载体。同时构建了野生型 PEP4 基因表达载体，并分别将两种表达载体转化到基因背景为 PEP4 缺失的菌株中。研究发现蛋白酶 A活性中心点突变的重组菌株与蛋白酶 A 缺失的重组菌株在细胞内外均不能检测到蛋白酶 A活力，而转化野生型表达载体的菌株蛋白酶 A 活力与出发菌株基本一致。结果表明，活性中心点突变与基因完全缺失对菌株的影响一致。通过生长曲线的观察发现蛋白酶 A 活性中心点突变会导致生长速率的减慢。本研究对于工业菌株无痕敲除，提高应用安全性方面具有理论指导意义。展开更多
文摘目的建立了双水相萃取结合气相色谱质谱法(gas chromatography-mass spectrometry,GC/MS)测定不同香型白酒中氨基甲酸乙酯的测定方法。方法对比研究了3种不同的样品液液萃取方法,在此基础上,优化获得了最优双水相萃取(LLE-GC/MS)方案:准确移取5 m L试样于10 m L比色管中,再加入内标PC使用液,逐渐增加管中K2HPO4固体,直到饱和为止,静置至分层完全。取上清液1.5 m L于离心管中,加无水Mg SO4 150mg摇匀离心。取上清直接进样,用GC/MS检测样品中氨基甲酸乙酯的含量。通过分别检测白酒三大香型:清香、浓香、酱香型,对LLE-GC/MS方法进行了评价。结果在最优条件下检测的相对标准偏差为2.84%~3.95%,回收率为:86.45%~111.58%,检测限为1.34μg/L。结论此方法准确性好、简便、低成本,适用于上述3种香型白酒中氨基甲酸乙酯的检测。
文摘蛋白酶 A 由 PEP4 基因编码，对酿酒酵母的生理生化功能起到重要的作用，蛋白酶 A 缺失或低表达对于理论研究和实际应用都具有重要价值。本文利用重叠延伸法构建了蛋白酶 A 第 294 位活性中心突变的 PEP4 基因表达载体。同时构建了野生型 PEP4 基因表达载体，并分别将两种表达载体转化到基因背景为 PEP4 缺失的菌株中。研究发现蛋白酶 A活性中心点突变的重组菌株与蛋白酶 A 缺失的重组菌株在细胞内外均不能检测到蛋白酶 A活力，而转化野生型表达载体的菌株蛋白酶 A 活力与出发菌株基本一致。结果表明，活性中心点突变与基因完全缺失对菌株的影响一致。通过生长曲线的观察发现蛋白酶 A 活性中心点突变会导致生长速率的减慢。本研究对于工业菌株无痕敲除，提高应用安全性方面具有理论指导意义。
