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人角膜缘干细胞的体外培养及鉴定 被引量:3
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作者 魏彤心 李冰 史静华 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2010年第5期432-435,共4页
目的探讨人自体角膜缘干细胞(LSCs)体外培养及鉴定的方法。方法将供体新鲜人角膜缘组织在制备的含20%胎牛血清DMEM/F12培养基的羊膜载体上应用组织块培养法进行体外培养,对培养获得的LSCs用苏木精-伊红染色在倒置显微镜下进行形态学观察... 目的探讨人自体角膜缘干细胞(LSCs)体外培养及鉴定的方法。方法将供体新鲜人角膜缘组织在制备的含20%胎牛血清DMEM/F12培养基的羊膜载体上应用组织块培养法进行体外培养,对培养获得的LSCs用苏木精-伊红染色在倒置显微镜下进行形态学观察,用免疫荧光技术鉴定培养的LSCs细胞。结果组织块静置2h后贴壁良好,3~4d细胞从组织块边缘萌出,7~10d细胞出现生长高峰,12~14d形成良好的细胞单层。细胞形态呈多边形、圆形、卵圆形和梭形。第14天时行间接免疫荧光染色,可见大量细胞表达p63,呈细胞质的绿色荧光;少量细胞表达AE5,呈细胞质的绿色荧光和细胞核的红色荧光。结论组织块培养法体外培养的人LSCs具有与正常人LSCs相一致的生物学特性。 展开更多
关键词 角膜缘干细胞 羊膜 体外培养
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人自体角膜缘干细胞体外培养羊膜植片移植治疗严重角膜烧伤三例
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作者 李冰 魏彤心 史静华 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2010年第5期393-394,共2页
关键词 自体角膜缘干细胞 细胞体外培养 角膜烧伤 羊膜植片 移植治疗 离体培养 烧伤患者 课题组
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载药羊膜移植治疗感染性角膜溃疡的实验研究 被引量:5
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作者 李京 李冰 +1 位作者 魏彤心 康玉国 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期434-439,共6页
背景 应用羊膜移植术治疗角膜溃疡的方法在临床上已广泛开展,但目前国内有关将羊膜作为药物载体治疗感染性眼表疾病的研究较少见. 目的 探讨载药羊膜在治疗眼表感染性疾病中的缓释性能并评价其疗效.方法 利用体外抑菌实验比较羊膜浸泡... 背景 应用羊膜移植术治疗角膜溃疡的方法在临床上已广泛开展,但目前国内有关将羊膜作为药物载体治疗感染性眼表疾病的研究较少见. 目的 探讨载药羊膜在治疗眼表感染性疾病中的缓释性能并评价其疗效.方法 利用体外抑菌实验比较羊膜浸泡不同质量浓度(5、20、30 g/L)的左氧氟沙星不同时间(5、15、30、60 min)后平均抑菌环直径的改变.利用角膜基质层接种法将浊度为0.7麦氏单位的金黄色葡萄球菌菌悬液0.1ml自角膜近中央处注入角膜基质层,形成直径4.0~6.0 mm的混浊区,建立20只家兔单眼感染性角膜溃疡模型,采用随机数字表法将动物模型随机分为单纯羊膜移植联合点药组和载药羊膜移植组,每组各10只,两组家兔造模后24 h分别行单纯羊膜移植术或载药羊膜移植术.单纯羊膜移植联合点药组术后用质量分数0.5%左氧氟沙星滴眼液点眼,每日3次,分别于点眼后0.5、1.0、2.0、3.5、5.5h抽取房水0.1ml,载药羊膜移植组于术后1、3、7、10、14、21d抽取房水0.1ml,用高效液相色谱分析法检测各时间点兔眼房水中左氧氟沙星的质量浓度.各组大鼠在裂隙灯显微镜下观察角膜病变情况及角膜溃疡的面积变化,按照改进的McNeill角膜病变程度分级法对角膜病变进行评分,并于术后4周行兔眼角膜组织病理学检查.结果 左氧氟沙星体外抑菌实验表明,平均抑菌环直径随药物质量浓度的增加而增大,相同质量浓度左氧氟沙星浸泡15 min的羊膜与浸泡5 min相比抑菌环直径增大,差异均有统计学意义(P<0.01),但与浸泡30 min、60 min的羊膜相比差异均无统计学意义(P>0.05).单纯羊膜移植联合点药组术后房水中左氧氟沙星质量浓度随时间的延长而逐渐降低,0.5h为(0.873 ±0.264) mg/L,5.5h为(0.106±0.027) mg/L;载药羊膜移植组术后1、3、7d房水中左氧氟沙星质量浓度仍高于单纯羊膜移植联合点药组点药后0.5h,差异均有统计学意义(均P=0.00).载药羊膜移植组家兔用药后1、2、4周角膜病变评分分别为1.7±0.6、1.3±0.5和0.2±0.4,明显低于单纯羊膜移植联合点药组的2.2±0.8、2.0±0.6和1.5±0.8,差异均有统计学意义(F分组=9.49,P=0.01;F时间=22.96,P=0.01).术后1周载药羊膜移植组角膜溃疡面积明显小于单纯羊膜移植联合点药组,差异有统计学意义[(1.6±0.6)mm2 vs.(3.2±0.8)mm2,t=3.98,P=0.00].组织病理学检查显示,单纯羊膜移植联合点药组术后4周角膜各层排列不规则,出现1~2层新生鳞状上皮,基质层结构紊乱,可见较多炎性细胞浸润及残留血管腔;载药羊膜移植组术后4周角膜有4~5层新生鳞状上皮,排列整齐,仅见少量炎性细胞浸润及残留血管腔.结论 左氧氟沙星载药羊膜移植至角膜后具有一定的药物缓释性能,可以提高房水中的有效药物质量浓度,对金黄色葡萄球菌感染性角膜溃疡的疗效优于点眼的用药方式. 展开更多
关键词 缓释 羊膜 载药 角膜溃疡 左氧氟沙星 眼表重建
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IL-8对角膜成纤维细胞胶原合成的影响 被引量:2
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作者 孙宇宁 宋婕 +4 位作者 李晓娜 陈维毅 贺瑞 杨继忠 姚蔚 《太原理工大学学报》 CAS 北大核心 2021年第4期662-668,共7页
促炎因子IL-8在圆锥角膜患者泪液中表达较高,但其作用机制尚不明确。胶原合成和降解异常是圆锥角膜的发病机制之一。通过探讨IL-8对正常角膜成纤维细胞胶原蛋白合成的影响及其分子机制,为进一步揭示圆锥角膜的发病机制提供参考。构建si... 促炎因子IL-8在圆锥角膜患者泪液中表达较高,但其作用机制尚不明确。胶原合成和降解异常是圆锥角膜的发病机制之一。通过探讨IL-8对正常角膜成纤维细胞胶原蛋白合成的影响及其分子机制,为进一步揭示圆锥角膜的发病机制提供参考。构建siRNA干扰体系,通过siRNA技术沉默角膜成纤维细胞中IL-8的表达;采用实时荧光定量PCR分析沉默IL-8后,促炎因子以及胶原合成和降解相关基因的表达变化;采用ELISA法检测总胶原的含量;采用明胶酶谱法检测MMP-2的活性;采用Western blot法检测沉默IL-8后相关信号途径关键蛋白的变化。结果发现:沉默IL-8表达后,角膜成纤维细胞总胶原含量及胶原合成基因(COL1A2,COL3A1,COL5A3,COL6A1)的表达显著升高,而胶原降解酶MMP-2的表达和活性下降;此外,沉默IL-8能够降低IL-6、IL-1β、VEGFA/VEGFR2基因和下游AKT、ERK1/2蛋白的表达。结果表明,IL-8调节角膜成纤维细胞中其他促炎因子及VEGF的表达,并通过PI3K/AKT、ERK信号通路负调控角膜成纤维细胞中胶原的合成,参与MMP-2介导的胶原降解过程。 展开更多
关键词 角膜成纤维细胞 IL-8 胶原 MMP-2 信号途径
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乙酰唑胺对圆锥角膜成纤维细胞胶原代谢的影响 被引量:1
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作者 谢云鹏 雷旭琴 +4 位作者 宋婕 李晓娜 贺瑞 杨继忠 冯鹏飞 《太原理工大学学报》 CAS 北大核心 2023年第1期186-192,共7页
圆锥角膜是以角膜中央变薄、向前突出成圆锥形为特征的一种角膜疾病,胶原代谢异常是其发病原因之一。通过探究乙酰唑胺药物对圆锥角膜成纤维细胞胶原合成的影响及机制,为圆锥角膜疾病的临床治疗提供新思路。采用100μmol/L乙酰唑胺溶液... 圆锥角膜是以角膜中央变薄、向前突出成圆锥形为特征的一种角膜疾病,胶原代谢异常是其发病原因之一。通过探究乙酰唑胺药物对圆锥角膜成纤维细胞胶原合成的影响及机制,为圆锥角膜疾病的临床治疗提供新思路。采用100μmol/L乙酰唑胺溶液处理人圆锥角膜成纤维细胞,采用qPCR方法检测处理后胶原代谢基因的表达,分别采用ELISA、Western Blot检测总胶原及I型胶原的含量,采用荧光探针DCFH-DA检测细胞内ROS水平,采用分光光度法检测MDA含量及细胞总抗氧化能力T-AOC的变化。结果发现,乙酰唑胺处理后,圆锥角膜细胞中胶原合成及交联酶编码基因COLs、LOXs的表达显著升高,MMP2、MMP3、MMP9等胶原降解基因的表达均显著下降,I型胶原和总胶原含量降低。此外,细胞内抗氧化酶基因NQO-1表达升高,总抗氧化能力增强,ROS和MDA含量显著下降。结果表明,乙酰唑胺通过调节圆锥角膜成纤维细胞氧化应激水平,改善胶原的合成及交联,抑制胶原降解。 展开更多
关键词 乙酰唑胺 圆锥角膜 胶原 氧化应激
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MiR-548d-3p调节过氧化氢刺激下人圆锥角膜成纤维细胞IL-1β的表达
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作者 王思佳 宋一菲 +6 位作者 李晓娜 侯心淏 宋婕 杨纪忠 贺瑞 陈维毅 姚蔚 《太原理工大学学报》 CAS 北大核心 2021年第4期669-676,共8页
氧化应激和炎性因子与圆锥角膜发病密切相关。MiRNAs作为重要的基因表达调控因子参与了角膜的生理病理过程。为了探讨MiRNAs是否通过靶向IL-1β调控圆锥角膜成纤维细胞中与基质重塑相关基因的表达,通过生物信息学软件预测可能与IL-1β... 氧化应激和炎性因子与圆锥角膜发病密切相关。MiRNAs作为重要的基因表达调控因子参与了角膜的生理病理过程。为了探讨MiRNAs是否通过靶向IL-1β调控圆锥角膜成纤维细胞中与基质重塑相关基因的表达,通过生物信息学软件预测可能与IL-1β靶定的MiRNAs(miR-21-5p,miR-24-3p,miR-26b-3p,miR-27b-5p,miR-181d-5p,miR-383-3p,MiR-548d-3p,miR-4700-3p),对体外培养的人圆锥角膜成纤维细胞添加过氧化氢处理0,6,12,24 h,采用实时荧光定量PCR检测上述MiRNAs及IL-1β基因的表达,并通过双荧光素酶报告分析实验确定MiR-548d-3p与IL-1β之间存在靶定关系。将MiR-548d-3p的模拟物转染至人圆锥角膜成纤维细胞内,发现在氧化应激条件下,MiR-548d-3p的模拟物可显著下调IL-1β的基因表达,并使MMP-1和MMP-3表达下降、Collagen I-α2表达升高。提示氧化应激条件下,人圆锥角膜成纤维细胞MiR-548d-3p可通过下调IL-1β表达促进角膜基质合成,减少降解,进而减缓圆锥角膜病变进程,为圆锥角膜患者治疗提供潜在靶点。 展开更多
关键词 圆锥角膜 氧化应激 炎症因子 MIRNAS IL-1Β
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氧化应激对hKCFs抗氧化酶、炎性因子和基质重塑相关蛋白基因表达的影响 被引量:3
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作者 宋一菲 李晓娜 +3 位作者 王思佳 贺瑞 杨继忠 吴婷婷 《太原理工大学学报》 CAS 北大核心 2021年第3期502-508,共7页
通过研究过氧化氢对圆锥角膜成纤维细胞抗氧化能力、炎性因子及基质重塑相关基因表达的影响,探讨氧化应激在圆锥角膜发生与发展过程中的作用。对体外培养的圆锥角膜患者角膜成纤维细胞添加浓度为100μmol/L过氧化氢处理4 h.采用实时荧... 通过研究过氧化氢对圆锥角膜成纤维细胞抗氧化能力、炎性因子及基质重塑相关基因表达的影响,探讨氧化应激在圆锥角膜发生与发展过程中的作用。对体外培养的圆锥角膜患者角膜成纤维细胞添加浓度为100μmol/L过氧化氢处理4 h.采用实时荧光定量PCR检测抗氧化酶、炎性因子、基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制剂(TIMPs)和Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、赖氨酰氧化酶样蛋白(LOXLs)基因表达。结果发现:过氧化氢使抗氧化酶基因(SOD-2、HO-1、NQO-1)、炎性因子(ICAM-1、IL-1β/-6/-8)、MMP-1/-3表达显著上调,CollagenⅠ-α2、TIMP-1/-2/-3、LOXL-1/-3/-4显著下调。结果提示氧化应激可促进圆锥角膜成纤维细胞释放更多的炎性因子,MMPs和TIMPs表达失衡,胶原蛋白降解或交联障碍,引起角膜基质变薄,促进圆锥角膜病变的发生与发展。 展开更多
关键词 圆锥角膜 角膜成纤维细胞 氧化应激 炎性因子 角膜基质重塑相关蛋白
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