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p21WAF1/CIP1在兔外伤性增生性玻璃体视网膜病变发生和发展中的抑制作用 被引量：5
1
作者 袁志刚 由彩云 +2 位作者 韩金栋 李海燕 颜华 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期420-425,共6页
背景p21是一种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，能阻止细胞从G．期进入s期，抑制细胞增生，研究认为内源性p21表达的动态变化可能与细胞增生性病变有关。外伤性增生性玻璃体视网膜病变（PVR）是眼部增生性反应相关性疾病，了解PVR过程中... 背景p21是一种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，能阻止细胞从G．期进入s期，抑制细胞增生，研究认为内源性p21表达的动态变化可能与细胞增生性病变有关。外伤性增生性玻璃体视网膜病变（PVR）是眼部增生性反应相关性疾病，了解PVR过程中p21表达的动态变化可能为PVR的靶向治疗提供依据。目的检测p21WAF1/CIP1在兔外伤性PVR中的动态变化，探讨其在外伤性PVR发病机制中的作用。方法选取青紫蓝兔54只，采用随机数字表法将实验兔随机分为正常对照组（6只）和造模后7、14、21和28d组（每组12只），每只兔任意选取一眼作为实验眼。各模型组兔眼玻璃体腔注射人富含血小板血浆（PRP）0．4ml，同时于鼻上方角巩膜缘后5mm处行巩膜外冷冻约5s，以建立外伤性PVR模型。各组兔眼行眼部B型超声检查以评估建模情况。分别于造模后7、14、21和28d以过量麻醉法处死实验兔并制备实验眼视网膜组织切片，采用苏木精-伊红染色法检测兔眼视网膜的形态表现，分别采用免疫组织化学染色、Westernbla及逆转录PCR（RT—PCR）法检测兔视网膜中p21WAF1/CIP1蛋白及其mRNA的相对表达。结果正常对照组兔眼眼前后节均正常，模型组兔造模后1～7d兔眼玻璃体中增生条索逐渐变粗，可见视网膜皱褶，造模后14d兔眼出现牵引性视网膜脱离，造模后28d兔眼漏斗状视网膜脱离。视网膜病理组织学检查显示，造模后7d兔眼视网膜表面有增生膜和炎性细胞聚集，造模后28d可见视网膜呈花瓣形固定皱褶，视网膜结构紊乱。免疫组织化学染色显示，p21WAF1/CIP1蛋白在正常对照组兔眼视网膜神经节细胞层及内核层的细胞核内呈强阳性表达，造模后7、14、21和28d表达强度减弱，以造模后14d表达量最低。Westernbla结果显示，正常对照组和造模后7、14、21和28d组兔眼视网膜中p21WAF1/CIP1蛋白相对表达量分别为0．74±0．08、0．60±0．05、0．56±0．03、0．74±0．02和0．65±0．04，组间总体比较差异有统计学意义（F=20．55，P=0．00），造模后7d和14d的表达量均明显低于正常对照组和造模后21d和28d组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。RT—PCR结果显示，正常对照组和造模后7、14、21和28d组兔眼视网膜中p21WAF1/CIP1。mRNA的相对表达量分别为0．65±O．09、0．57±0．05、0．45±0．04、0．46±0．02和0．47±0．04，总体比较差异有统计学意义（F=18．06，P=0．00），造模后14、21和28dp21WAF1/CIP1mRNA的相对表达量均明显低于正常对照组和造模后7d组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论p21WAF1/CIP1在外伤性PVR兔眼视网膜中的动态表达变化与PVR的病程发展过程相吻合，p21可能参与外伤性PVR发生和发展的病理过程，p21WAF1/CIP1表达量的下降与细胞增生的动态变化过程一致，可能促进了PVR的进展。 展开更多
关键词 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21/分析 增生性玻璃体视网膜病变 视网膜脱离/并发症 眼外伤 动物模型 兔
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酪氨酸激酶抑制剂对高氧诱导的视网膜新生血管的抑制作用 被引量：4
2
作者 贺荣华 周国宏 +1 位作者 孔丽 李宸宇 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期29-33,共5页
目的探讨酪氨酸激酶抑制剂Genistein对高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成中的抑制作用及其机制。方法采用随机数字表法将36只7日龄清洁级C57BL/6J小鼠随机分为高氧诱导组、Genistein组、二甲亚砜（DMSO）组和正常对照组，每组9只。高氧... 目的探讨酪氨酸激酶抑制剂Genistein对高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成中的抑制作用及其机制。方法采用随机数字表法将36只7日龄清洁级C57BL/6J小鼠随机分为高氧诱导组、Genistein组、二甲亚砜（DMSO）组和正常对照组，每组9只。高氧诱导组、Genistein组、DMSO组小鼠与母鼠在氧体积分数为（75±2）%的密闭氧箱内喂养5 d，然后返回到正常室内环境中喂养5 d。高氧诱导组小鼠不给予药物处理，Genistein组和DMSO组小鼠于出生后12 d玻璃体腔内分别注射Genistein（溶于DMSO，400 mg/L）和DMSO各1 μl。正常对照组小鼠在正常室内环境中喂养。各组分别取2只17 d鼠龄小鼠，采用视网膜血管荧光造影后制备视网膜铺片，于荧光显微镜下观察小鼠双眼视网膜血管形态。另将各组各7只小鼠全部处死，获取双眼视网膜，采用实时荧光定量PCR法测定小鼠视网膜中血管内皮生长因子（VEGF）mRNA和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）mRNA的相对表达量（2－ΔΔCt）；采用Western blot法测定各组小鼠视网膜中VEGF和bFGF蛋白的相对表达量。结果荧光显微镜下可见正常对照组小鼠视网膜主要血管和毛细血管形态正常，高氧诱导组和DMSO处理组小鼠血管迂曲，较多新生血管簇和视网膜缺血无灌注区，Genistein处理组小鼠视网膜血管清晰，可见无灌注区。正常对照组、高氧诱导组、DMSO组和Genistein组小鼠视网膜中VEGF mRNA相对表达量分别为0.04±0.02、0.64±0.25、0.37±0.23和0.03±0.02，bFGF mRNA相对表达量分别为0.67±0.23、21.40±3.07、17.22±2.63和0.52±0.25，与正常对照组和Genistein组比较，高氧诱导组和DMSO组小鼠视网膜中VEGF mRNA和bFGF mRNA的相对表达量均显著升高，差异均有统计学意义（均P〈0.05），正常对照组与Genistein组间小鼠视网膜中VEGF mRNA和bFGF mRNA的相对表达量比较，差异均无统计学意义（均P〉0.05）。正常对照组、高氧诱导组、DMSO组和Genistein组小鼠视网膜中VEGF蛋白的相对表达量分别为0.52±0.05、1.01±0.05、1.06±0.07和0.73±0.05，bFGF蛋白相对表达量分别为0.56±0.05、0.97±0.06、1.03±0.08和0.76±0.07，4个组小鼠视网膜中VEGF和bFGF蛋白相对表达量的总体比较差异均有统计学意义（F＝120.74、57.98，均P＝0.00）。与正常对照组和Genistein组比较，高氧诱导组和DMSO组小鼠视网膜中VEGF和bFGF蛋白相对表达量显著升高，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论Genistein能抑制高氧诱导的视网膜新生血管的形成，其机制可能是通过抑制组织中VEGF和bFGF的表达。 展开更多
关键词 血管生成抑制剂/药物 视网膜新生血管 高氧 血管内皮生长因子 成纤维细胞生长 因子
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Cathepsin B-RNAi-lentivirus新生血管形成的研究抑制小鼠视网膜 被引量：3
3
作者 周国宏 孔丽 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期452-455,共4页
背景 视网膜新生血管性疾病是一种严重影响视力的眼病.研究表明,cathepsin B参与新生血管的生成,寻找抑制视网膜新生血管形成的药物可为此类疾病的分子机制研究提供依据. 目的 研究cathepsin B-RNAi-lentivirus对小鼠视网膜新生血管的... 背景 视网膜新生血管性疾病是一种严重影响视力的眼病.研究表明,cathepsin B参与新生血管的生成,寻找抑制视网膜新生血管形成的药物可为此类疾病的分子机制研究提供依据. 目的 研究cathepsin B-RNAi-lentivirus对小鼠视网膜新生血管的抑制作用. 方法 将7日龄清洁级C57BL/6J小鼠与其母鼠共同置于氧体积分数为（75±2）％的密闭氧箱内5d,制作视网膜新生血管模型,5d后返回正常环境.应用随机数字表法将60只小鼠随机分为模型对照组、阴性对照组和基因治疗组,每组20只.模型对照组小鼠不给予任何药物干预,阴性对照组小鼠玻璃体腔内注射空载体与辅助载体包装成的无目的基因的空病毒颗粒（NC-GFP-LV）1 μl,基因治疗组以同样的方法注射eathepsin B-RNAi-lentivirus 1μl.注射5d后各组分别应用随机数字表法随机处死7只小鼠,获取14只眼的视网膜,采用real-time PCR法检测小鼠视网膜中cathepsin BmRNA的表达量（2△△Ct）,另外同时间点同法分别处死8只小鼠,获取16只眼球的视网膜,采用Western blot法检测各组小鼠视网膜中cathepsin B蛋白的相对表达量（cathepsin B/β-actin）.注射5d后各组分别取剩余5只小鼠行异硫氰酸葡聚醛荧光素（FITC-dextran）心脏灌注,并处死动物,制备10只眼的视网膜铺片,荧光显微镜下观察和比较各组小鼠视网膜新生血管的形态和数量. 结果 基因治疗组小鼠视网膜中cathepsin B mRNA的表达水平（2-△△Ct）为0.740.12,明显低于模型对照组及阴性对照组的1.66±0.17和1.58±0.29,差异均有统计学意义（q=0.746、1.588,P＜0.01）.基因治疗组小鼠视网膜中cathepsin B蛋白的表达水平（cathepsin B/β-actin）为0.64±0.06,明显低于模型对照组及阴性对照组的0.93±0.09和0.96±0.09,差异均有统计学意义（q=0.637、0.894,P＜0.01）.小鼠视网膜荧光染色结果显示,模型对照组和阴性对照组小鼠视网膜新生血管分层及分支多,血管走形扭曲,部分血管可见荧光素渗漏；基因治疗组小鼠血管走形较直,血管分支少,新生血管数量少. 结论 Cathepsin B-RNAi-lentivirus转染能有效抑制小鼠视网膜新生血管的形成. 展开更多
关键词 慢病毒 组织蛋白酶B 新生血管
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