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氧化应激对hKCFs抗氧化酶、炎性因子和基质重塑相关蛋白基因表达的影响 被引量：3
1
作者 宋一菲 李晓娜 +3 位作者 王思佳 贺瑞 杨继忠 吴婷婷 《太原理工大学学报》 CAS 北大核心 2021年第3期502-508,共7页
通过研究过氧化氢对圆锥角膜成纤维细胞抗氧化能力、炎性因子及基质重塑相关基因表达的影响,探讨氧化应激在圆锥角膜发生与发展过程中的作用。对体外培养的圆锥角膜患者角膜成纤维细胞添加浓度为100μmol/L过氧化氢处理4 h.采用实时荧... 通过研究过氧化氢对圆锥角膜成纤维细胞抗氧化能力、炎性因子及基质重塑相关基因表达的影响,探讨氧化应激在圆锥角膜发生与发展过程中的作用。对体外培养的圆锥角膜患者角膜成纤维细胞添加浓度为100μmol/L过氧化氢处理4 h.采用实时荧光定量PCR检测抗氧化酶、炎性因子、基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制剂(TIMPs)和Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、赖氨酰氧化酶样蛋白(LOXLs)基因表达。结果发现:过氧化氢使抗氧化酶基因(SOD-2、HO-1、NQO-1)、炎性因子(ICAM-1、IL-1β/-6/-8)、MMP-1/-3表达显著上调,CollagenⅠ-α2、TIMP-1/-2/-3、LOXL-1/-3/-4显著下调。结果提示氧化应激可促进圆锥角膜成纤维细胞释放更多的炎性因子,MMPs和TIMPs表达失衡,胶原蛋白降解或交联障碍,引起角膜基质变薄,促进圆锥角膜病变的发生与发展。 展开更多
关键词 圆锥角膜 角膜成纤维细胞 氧化应激 炎性因子 角膜基质重塑相关蛋白
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TNF-α和机械牵拉对圆锥角膜成纤维细胞MMP/TIMP及IL-6表达的影响 被引量：4
2
作者 杜根来 李晓娜 +3 位作者 陈维毅 刘成星 王晓君 贺瑞 《太原理工大学学报》 北大核心 2017年第6期1007-1013,共7页
研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)与机械牵拉对圆锥角膜成纤维细胞白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、基质金属蛋白酶-1,-3(matrix metalloproteinase-1,-3,MMP-1,-3)、组织基质金属蛋白酶抑制剂-1,-2(tissue inh... 研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)与机械牵拉对圆锥角膜成纤维细胞白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、基质金属蛋白酶-1,-3(matrix metalloproteinase-1,-3,MMP-1,-3)、组织基质金属蛋白酶抑制剂-1,-2(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,-2,TIMP-1,-2)基因表达与蛋白合成的影响。对体外培养的圆锥角膜成纤维细胞进行牵拉幅度12%、频率0.1Hz的周期性牵拉6h,并给予1ng/mL TNF-α处理,采用Real-Time PCR技术检测细胞中IL-6,MMP-1,MMP-3,TIMP-1,TIMP-2mRNA的表达,ELISA方法检测蛋白的含量。TNF-α单独作用可以诱导圆锥角膜成纤维细胞IL-6、MMP-1以及MMP-3的基因表达与蛋白合成(p<0.05),对TIMP-1、TIMP-2的基因表达与蛋白合成无明显影响,提高MMP-1/TIMP-2以及MMP-3/TIMP-2蛋白浓度的比值(p<0.05);机械牵拉单独作用促进IL-6、MMP-1以及MMP-3的基因表达与蛋白合成(p<0.05),下调TIMP-1、TIMP-2的基因表达与蛋白合成(p<0.05),上调MMP/TIMP蛋白浓度的比值(p<0.05);两者联合作用则表现出协同效应(p<0.05).提示TNF-α和机械牵拉可能通过上调IL-6及MMP/TIMP的比例促进圆锥角膜基质降解,加剧角膜组织破坏,导致角膜膨隆的发生发展。 展开更多
关键词 圆锥角膜 炎性因子 周期性牵拉 基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶抑制剂
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IL-8对角膜成纤维细胞胶原合成的影响 被引量：2
3
作者 孙宇宁 宋婕 +4 位作者 李晓娜 陈维毅 贺瑞 杨继忠 姚蔚 《太原理工大学学报》 CAS 北大核心 2021年第4期662-668,共7页
促炎因子IL-8在圆锥角膜患者泪液中表达较高,但其作用机制尚不明确。胶原合成和降解异常是圆锥角膜的发病机制之一。通过探讨IL-8对正常角膜成纤维细胞胶原蛋白合成的影响及其分子机制,为进一步揭示圆锥角膜的发病机制提供参考。构建si... 促炎因子IL-8在圆锥角膜患者泪液中表达较高,但其作用机制尚不明确。胶原合成和降解异常是圆锥角膜的发病机制之一。通过探讨IL-8对正常角膜成纤维细胞胶原蛋白合成的影响及其分子机制,为进一步揭示圆锥角膜的发病机制提供参考。构建siRNA干扰体系,通过siRNA技术沉默角膜成纤维细胞中IL-8的表达;采用实时荧光定量PCR分析沉默IL-8后,促炎因子以及胶原合成和降解相关基因的表达变化;采用ELISA法检测总胶原的含量;采用明胶酶谱法检测MMP-2的活性;采用Western blot法检测沉默IL-8后相关信号途径关键蛋白的变化。结果发现:沉默IL-8表达后,角膜成纤维细胞总胶原含量及胶原合成基因(COL1A2,COL3A1,COL5A3,COL6A1)的表达显著升高,而胶原降解酶MMP-2的表达和活性下降;此外,沉默IL-8能够降低IL-6、IL-1β、VEGFA/VEGFR2基因和下游AKT、ERK1/2蛋白的表达。结果表明,IL-8调节角膜成纤维细胞中其他促炎因子及VEGF的表达,并通过PI3K/AKT、ERK信号通路负调控角膜成纤维细胞中胶原的合成,参与MMP-2介导的胶原降解过程。 展开更多
关键词 角膜成纤维细胞 IL-8 胶原 MMP-2 信号途径
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周期性牵拉与TNF-α对角膜成纤维细胞增殖的影响 被引量：1
4
作者 姚艳 冯鹏飞 +3 位作者 李晓娜 贺瑞 陈维毅 王晓君 《太原理工大学学报》 CAS 北大核心 2016年第1期108-112,共5页
利用Flexcell4000柔性基底拉伸系统对角膜成纤维细胞实施应变为5%或15%、频率为0.1Hz的周期性牵拉载荷,用质量浓度为1ng/mL或10ng/mL的肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)处理,并采用流式细胞仪检测细胞周期,研究周期性... 利用Flexcell4000柔性基底拉伸系统对角膜成纤维细胞实施应变为5%或15%、频率为0.1Hz的周期性牵拉载荷,用质量浓度为1ng/mL或10ng/mL的肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)处理,并采用流式细胞仪检测细胞周期,研究周期性牵拉与TNF-α对角膜成纤维细胞增殖的影响。结果表明:5%周期性牵拉或TNF-α单独作用对正常及圆锥角膜成纤维细胞S期细胞比例均无显著性影响;15%牵拉使正常及圆锥角膜成纤维细胞S期细胞比例均显著下降;与正常角膜相比,15%牵拉和TNF-α共同作用使圆锥角膜S期细胞比例下降更显著。周期性牵拉及TNF-α可能通过抑制圆锥角膜基质细胞增殖参与圆锥角膜的发生和发展。 展开更多
关键词 周期性牵拉 肿瘤坏死因子 圆锥角膜 成纤维细胞 细胞增殖
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机械牵拉对角膜成纤维细胞氧化应激、炎性因子和MMP-9表达的影响 被引量：7
5
作者 李晓娜 宋一菲 +3 位作者 史佩佩 宋婕 陈维毅 贺瑞 《太原理工大学学报》 CAS 北大核心 2019年第4期529-535,共7页
探讨机械牵拉对人角膜成纤维细胞氧化应激水平、抗氧化能力、炎性因子及基质金属蛋白酶(MMP)表达的影响。对体外培养的正常人(NC)及圆锥角膜患者(KC)角膜成纤维细胞进行周期性机械牵拉(幅度15%,频率0.1 Hz,时间12 h).采用荧光染色法检... 探讨机械牵拉对人角膜成纤维细胞氧化应激水平、抗氧化能力、炎性因子及基质金属蛋白酶(MMP)表达的影响。对体外培养的正常人(NC)及圆锥角膜患者(KC)角膜成纤维细胞进行周期性机械牵拉(幅度15%,频率0.1 Hz,时间12 h).采用荧光染色法检测活性氧自由基(ROS)水平;采用实时荧光定量PCR检测抗氧化酶基因表达;采用酶联免疫吸附试验方法检测炎性因子和MMP-9表达。结果发现:静态培养条件下, KC细胞ROS水平、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、MMP-9均明显高于NC细胞;与静态培养组比较,机械牵拉显著增加了NC和KC细胞ROS、炎性因子和MMP-9蛋白表达水平;并使NC细胞部分抗氧化酶基因表达上调,但不同KC患者细胞牵拉后抗氧化酶表达不同。结果提示力学刺激可能通过处于较高氧化应激状态的圆锥角膜成纤维细胞释放更多的炎性因子,进而上调MMPs的表达,加速角膜细胞外基质降解,促进圆锥角膜的发生与发展。 展开更多
关键词 角膜成纤维细胞 机械牵拉 氧化应激 炎性因子 基质金属蛋白酶
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机械拉伸对人角膜基质细胞水通道蛋白AQP1表达的影响 被引量：3
6
作者 雷旭琴 孙宇宁 +3 位作者 宋婕 李晓娜 陈维毅 杨继忠 《太原理工大学学报》 CAS 北大核心 2020年第1期144-149,共6页
通过探讨机械拉伸对人角膜基质细胞中水通道蛋白1(AQP1)及下游信号通路相关基因表达的影响,为揭示圆锥角膜等术后并发症的发生机制提供参考。采用FLEX-4000对人角膜基质细胞进行周期性机械拉伸处理,采用Fluo-3荧光探针检测细胞内Ca^2+... 通过探讨机械拉伸对人角膜基质细胞中水通道蛋白1(AQP1)及下游信号通路相关基因表达的影响,为揭示圆锥角膜等术后并发症的发生机制提供参考。采用FLEX-4000对人角膜基质细胞进行周期性机械拉伸处理,采用Fluo-3荧光探针检测细胞内Ca^2+的浓度,ELISA法检测拉伸处理后胞内cAMP的含量,Real-time PCR分析拉伸和Ca^2+螯合剂BAPTA处理后AQP1及其下游信号通路相关基因的表达变化。结果发现:机械拉伸可诱导角膜基质细胞中AQP1及其下游FAK、Wnt通路相关基因的表达。机械拉伸处理后胞内Ca^2+、cAMP含量显著上升。BAPTA能够抑制拉伸诱导的AQP1及下游ARHGEF2、Wnt11、MMP2基因的表达。结果提示机械拉伸能够通过调节胞内Ca^2+浓度和cAMP浓度促进AQP1的表达,并进一步通过下游的FAK、Wnt信号通路诱导MMP2的表达,参与角膜细胞外基质代谢的调节。 展开更多
关键词 水通道蛋白1 机械拉伸 信号通路 CAMP Ca2+
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乙酰唑胺对圆锥角膜成纤维细胞胶原代谢的影响 被引量：1
7
作者 谢云鹏 雷旭琴 +4 位作者 宋婕 李晓娜 贺瑞 杨继忠 冯鹏飞 《太原理工大学学报》 CAS 北大核心 2023年第1期186-192,共7页
圆锥角膜是以角膜中央变薄、向前突出成圆锥形为特征的一种角膜疾病,胶原代谢异常是其发病原因之一。通过探究乙酰唑胺药物对圆锥角膜成纤维细胞胶原合成的影响及机制,为圆锥角膜疾病的临床治疗提供新思路。采用100μmol/L乙酰唑胺溶液... 圆锥角膜是以角膜中央变薄、向前突出成圆锥形为特征的一种角膜疾病,胶原代谢异常是其发病原因之一。通过探究乙酰唑胺药物对圆锥角膜成纤维细胞胶原合成的影响及机制,为圆锥角膜疾病的临床治疗提供新思路。采用100μmol/L乙酰唑胺溶液处理人圆锥角膜成纤维细胞,采用qPCR方法检测处理后胶原代谢基因的表达,分别采用ELISA、Western Blot检测总胶原及I型胶原的含量,采用荧光探针DCFH-DA检测细胞内ROS水平,采用分光光度法检测MDA含量及细胞总抗氧化能力T-AOC的变化。结果发现,乙酰唑胺处理后,圆锥角膜细胞中胶原合成及交联酶编码基因COLs、LOXs的表达显著升高,MMP2、MMP3、MMP9等胶原降解基因的表达均显著下降,I型胶原和总胶原含量降低。此外,细胞内抗氧化酶基因NQO-1表达升高,总抗氧化能力增强,ROS和MDA含量显著下降。结果表明,乙酰唑胺通过调节圆锥角膜成纤维细胞氧化应激水平,改善胶原的合成及交联,抑制胶原降解。 展开更多
关键词 乙酰唑胺 圆锥角膜 胶原 氧化应激
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MiR-548d-3p调节过氧化氢刺激下人圆锥角膜成纤维细胞IL-1β的表达
8
作者 王思佳 宋一菲 +6 位作者 李晓娜 侯心淏 宋婕 杨纪忠 贺瑞 陈维毅 姚蔚 《太原理工大学学报》 CAS 北大核心 2021年第4期669-676,共8页
氧化应激和炎性因子与圆锥角膜发病密切相关。MiRNAs作为重要的基因表达调控因子参与了角膜的生理病理过程。为了探讨MiRNAs是否通过靶向IL-1β调控圆锥角膜成纤维细胞中与基质重塑相关基因的表达,通过生物信息学软件预测可能与IL-1β... 氧化应激和炎性因子与圆锥角膜发病密切相关。MiRNAs作为重要的基因表达调控因子参与了角膜的生理病理过程。为了探讨MiRNAs是否通过靶向IL-1β调控圆锥角膜成纤维细胞中与基质重塑相关基因的表达,通过生物信息学软件预测可能与IL-1β靶定的MiRNAs(miR-21-5p,miR-24-3p,miR-26b-3p,miR-27b-5p,miR-181d-5p,miR-383-3p,MiR-548d-3p,miR-4700-3p),对体外培养的人圆锥角膜成纤维细胞添加过氧化氢处理0,6,12,24 h,采用实时荧光定量PCR检测上述MiRNAs及IL-1β基因的表达,并通过双荧光素酶报告分析实验确定MiR-548d-3p与IL-1β之间存在靶定关系。将MiR-548d-3p的模拟物转染至人圆锥角膜成纤维细胞内,发现在氧化应激条件下,MiR-548d-3p的模拟物可显著下调IL-1β的基因表达,并使MMP-1和MMP-3表达下降、Collagen I-α2表达升高。提示氧化应激条件下,人圆锥角膜成纤维细胞MiR-548d-3p可通过下调IL-1β表达促进角膜基质合成,减少降解,进而减缓圆锥角膜病变进程,为圆锥角膜患者治疗提供潜在靶点。 展开更多
关键词 圆锥角膜 氧化应激 炎症因子 MIRNAS IL-1Β
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圆锥角膜炎症介质表达调控机制的研究
9
作者 李晓娜 王思佳 +3 位作者 宋一菲 宋婕 冯鹏飞 贺瑞 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第S01期94-94,共1页
目的圆锥角膜是眼科临床常见的致盲疾病之一。研究表明,炎症介质参与了圆锥角膜的病理过程,但其调控机制目前尚不清楚。方法对体外培养的角膜成纤维细胞给予过氧化氢处理或力学拉伸刺激,结合生物信息学方法分析筛选出与炎症介质相关的m... 目的圆锥角膜是眼科临床常见的致盲疾病之一。研究表明,炎症介质参与了圆锥角膜的病理过程,但其调控机制目前尚不清楚。方法对体外培养的角膜成纤维细胞给予过氧化氢处理或力学拉伸刺激,结合生物信息学方法分析筛选出与炎症介质相关的miRs及其调控的靶分子,通过添加miRs模拟物或抑制剂,对转录因子KLFs进行siRNA干扰后,检测其对下游炎症介质及与基质重塑相关蛋白表达的影响。 展开更多
关键词 圆锥角膜 炎症介质 SIRNA干扰 角膜成纤维细胞 眼科临床 病理过程 体外培养 分析筛选
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