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紫花苜蓿低温诱导蛋白MsLTI65的分离及其对不同逆境的响应
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作者 周昕越 王丽萍 +3 位作者 蒋庆雪 马晓冉 仪登霞 王学敏 《草业学报》 北大核心 2025年第5期89-104,共16页
LTI是植物中一类低温诱导蛋白,在植物响应非生物胁迫中发挥着重要的作用。为明确紫花苜蓿LTI蛋白的结构特征及在不同非生物胁迫下的响应,通过RT-PCR和3′/5′RACE PCR技术,成功从“中苜1号”紫花苜蓿中克隆得到MsLTI65基因cDNA序列。利... LTI是植物中一类低温诱导蛋白,在植物响应非生物胁迫中发挥着重要的作用。为明确紫花苜蓿LTI蛋白的结构特征及在不同非生物胁迫下的响应,通过RT-PCR和3′/5′RACE PCR技术,成功从“中苜1号”紫花苜蓿中克隆得到MsLTI65基因cDNA序列。利用生物信息学软件对基因序列和结构进行分析,并与其他植物的LTI蛋白进行系统进化树构建,分析它们之间的进化关系。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(western-blot,WB)技术分析MsLTI65在不同非生物胁迫条件下的表达模式。序列分析表明,MsLTI65基因编码区序列长2016bp,编码671个氨基酸,分子量74 kDa,理论等电点为4.55,MsLTI65蛋白与蒺藜苜蓿的MtLTI65蛋白具有较高的同源性。qRT-PCR检测结果表明,MsLTI65基因在冷、盐、干旱、Cu^(2+)、Zn^(2+)和脱落酸(ABA)胁迫下表达量均受到诱导上调表达。抗体制备结果表明,已成功制备MsLTI65多克隆抗体,该多克隆抗体特异性高,能够识别天然LTI65样本。Western-blot验证结果表明,MsLTI65蛋白受冷、干旱、盐、ABA胁迫诱导表达。以上结果表明,MsLTI65基因可能作为一个正向调控因子在冷、干旱、Cu^(2+)、Zn^(2+)、盐等多种非生物胁迫信号和ABA激素信号转导过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 MsLTI65 基因克隆 表达分析 抗体 非生物胁迫
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