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人乳头瘤病毒16型纳米抗体的筛选及鉴定
被引量：
1
1
作者
王若瑜
白崇智
+3 位作者
仲启明
范瑞文
牛林茹
韩鹏程
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CSCD
北大核心
2024年第12期1211-1217,共7页
目的:构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白纳米抗体初级文库,通过筛选鉴定获得一株HPV16 L1特异性纳米抗体。方法:以HPV 16 L1蛋白为抗原对羊驼进行免疫,采用噬菌体展示技术构建初级抗体文库。经3轮淘选,采用ELISA法鉴定阳性克隆,将阳性...
目的:构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白纳米抗体初级文库,通过筛选鉴定获得一株HPV16 L1特异性纳米抗体。方法:以HPV 16 L1蛋白为抗原对羊驼进行免疫,采用噬菌体展示技术构建初级抗体文库。经3轮淘选,采用ELISA法鉴定阳性克隆,将阳性反应最强克隆的VHH序列进行真核表达。经亲和纯化、凝胶过滤层析纯化、SDS-PAGE和WB法鉴定,获得目的纳米抗体;采用表面等离子共振(SPR)技术检测纳米抗体与HPV 16 L1蛋白之间的亲和力,CCK-8法检测纳米抗体对人永生化角质细胞HaCat的毒性,荧光素酶报告基因实验检测纳米抗体对HPV 16假病毒的中和活性。结果:初级文库库容为1.304×10^(10),丰度为6.5×10^(9)个/mL,ELISA法鉴定获得36个阳性克隆。表达、纯化获得蛋白单体与二聚体,经鉴定为目的纳米抗体(命名为Nb)。Nb与HPV 16 L1蛋白结合的亲和力为35.41 nmol/L。Nb实验组HaCat细胞增殖活力与空白组没有显著差异(P>0.05)。与阴性组比较,0.1和1μmol/L Nb均能抑制假病毒感染293FT细胞(均P<0.01)。结论:成功获得一株纯度较好、亲和力较高,对上皮细胞没有明显毒性作用、有效抑制HPV 16假病毒感染293FT细胞的纳米抗体Nb,为防治HPV 16感染提供了有效的候选抗体类药物。
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关键词
人乳头瘤病毒16型
噬菌体展示技术
纳米抗体
亲和力
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职称材料
苦荞异槲皮苷对人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响
被引量：
15
2
作者
李玉英
赵淑娟
+2 位作者
白崇智
张立伟
王转花
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期193-197,共5页
从苦荞中提取制备异槲皮苷,研究其对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。将异槲皮苷作用于人胃癌SGC-7901细胞和人肾上皮细胞系293T,通过噻唑蓝法检测异槲皮苷对其增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamino-...
从苦荞中提取制备异槲皮苷,研究其对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。将异槲皮苷作用于人胃癌SGC-7901细胞和人肾上皮细胞系293T,通过噻唑蓝法检测异槲皮苷对其增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamino-2-phenyl indole,DAPI)荧光染色法观察细胞核的形态学变化;划痕擦伤迁移实验检测异槲皮苷对SGC-7901细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测异槲皮苷对SGC-7901细胞凋亡及细胞周期的影响。结果表明:苦荞异槲皮苷可以抑制SGC-7901细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性,当用100μmol/L异槲皮苷作用细胞48 h后,对SGC-7901细胞的增殖抑制率达到35.92%,而对人肾上皮细胞系293T的增殖抑制率仅为3.15%;DAPI荧光染色法观察异槲皮苷处理细胞后,染色体凝聚,有凋亡小体产生;划痕擦伤实验显示,异槲皮苷能抑制SGC-7901细胞的迁移;流式细胞术检测结果表明,异槲皮苷可使G1和S期细胞减少,G2/M期细胞增多,且细胞凋亡率明显增加。综上所述,苦荞麦异槲皮苷能够诱导SGC-7901细胞发生凋亡,阻断细胞周期并抑制细胞增殖和迁移。
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关键词
异槲皮苷
人胃癌细胞SGC-7901
细胞周期
凋亡
细胞迁移
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题名
人乳头瘤病毒16型纳米抗体的筛选及鉴定
被引量：
1
1
作者
王若瑜
白崇智
仲启明
范瑞文
牛林茹
韩鹏程
机构
山西省中医药研究院中心实验室
山西
农业大学羊驼生物工程
实验室
君研生物科技(
山西
)有限公司
东南大学附属中大医院医学院
出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CSCD
北大核心
2024年第12期1211-1217,共7页
基金
山西省科学技术厅重点研发计划项目(No.202202130501015)
山西省科学技术厅基础研究计划项目(No.202303021212353)
+1 种基金
山西省中医药管理局科研课题(No.2023ZYYA2002)
山西省卫生健康委员会科研课题(No.2022107)。
文摘
目的:构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白纳米抗体初级文库,通过筛选鉴定获得一株HPV16 L1特异性纳米抗体。方法:以HPV 16 L1蛋白为抗原对羊驼进行免疫,采用噬菌体展示技术构建初级抗体文库。经3轮淘选,采用ELISA法鉴定阳性克隆,将阳性反应最强克隆的VHH序列进行真核表达。经亲和纯化、凝胶过滤层析纯化、SDS-PAGE和WB法鉴定,获得目的纳米抗体;采用表面等离子共振(SPR)技术检测纳米抗体与HPV 16 L1蛋白之间的亲和力,CCK-8法检测纳米抗体对人永生化角质细胞HaCat的毒性,荧光素酶报告基因实验检测纳米抗体对HPV 16假病毒的中和活性。结果:初级文库库容为1.304×10^(10),丰度为6.5×10^(9)个/mL,ELISA法鉴定获得36个阳性克隆。表达、纯化获得蛋白单体与二聚体,经鉴定为目的纳米抗体(命名为Nb)。Nb与HPV 16 L1蛋白结合的亲和力为35.41 nmol/L。Nb实验组HaCat细胞增殖活力与空白组没有显著差异(P>0.05)。与阴性组比较,0.1和1μmol/L Nb均能抑制假病毒感染293FT细胞(均P<0.01)。结论:成功获得一株纯度较好、亲和力较高,对上皮细胞没有明显毒性作用、有效抑制HPV 16假病毒感染293FT细胞的纳米抗体Nb,为防治HPV 16感染提供了有效的候选抗体类药物。
关键词
人乳头瘤病毒16型
噬菌体展示技术
纳米抗体
亲和力
Keywords
human papillomavirus 16(HPV16)
phage display technology
nanobody
affinity
分类号
S852 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
苦荞异槲皮苷对人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响
被引量：
15
2
作者
李玉英
赵淑娟
白崇智
张立伟
王转花
机构
山西
大学化学生物学与分子工程教育部重点
实验室
山西省中医药研究院中心实验室
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期193-197,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31171659)
山西省自然科学基金项目(2011011035-4)
山西省高校科技开发项目(2012004)
文摘
从苦荞中提取制备异槲皮苷,研究其对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。将异槲皮苷作用于人胃癌SGC-7901细胞和人肾上皮细胞系293T,通过噻唑蓝法检测异槲皮苷对其增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamino-2-phenyl indole,DAPI)荧光染色法观察细胞核的形态学变化;划痕擦伤迁移实验检测异槲皮苷对SGC-7901细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测异槲皮苷对SGC-7901细胞凋亡及细胞周期的影响。结果表明:苦荞异槲皮苷可以抑制SGC-7901细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性,当用100μmol/L异槲皮苷作用细胞48 h后,对SGC-7901细胞的增殖抑制率达到35.92%,而对人肾上皮细胞系293T的增殖抑制率仅为3.15%;DAPI荧光染色法观察异槲皮苷处理细胞后,染色体凝聚,有凋亡小体产生;划痕擦伤实验显示,异槲皮苷能抑制SGC-7901细胞的迁移;流式细胞术检测结果表明,异槲皮苷可使G1和S期细胞减少,G2/M期细胞增多,且细胞凋亡率明显增加。综上所述,苦荞麦异槲皮苷能够诱导SGC-7901细胞发生凋亡,阻断细胞周期并抑制细胞增殖和迁移。
关键词
异槲皮苷
人胃癌细胞SGC-7901
细胞周期
凋亡
细胞迁移
Keywords
isoquercetin
human gastric carcinoma cell line SGC-7901
cell cycle
apoptosis
cell migration
分类号
R965 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人乳头瘤病毒16型纳米抗体的筛选及鉴定
王若瑜
白崇智
仲启明
范瑞文
牛林茹
韩鹏程
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CSCD
北大核心
2024
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
苦荞异槲皮苷对人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响
李玉英
赵淑娟
白崇智
张立伟
王转花
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014
15
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