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大鼠CnA/EGFP基因共表达的真核表达质粒的构建
1
作者
沈小梅
张巨艳
成蓓
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期25-28,共4页
目的:构建大鼠钙调磷酸酶A亚基(CnA)α基因/EGFP共表达的真核表达质粒,为研究钙调磷酸酶基因在缺血缺氧再灌注诱导的心肌细胞凋亡中的作用提供生物表达系统。方法:RT-PCR方法扩增大鼠CnA基因(约1 590 bp),克隆至T载体,经酶切鉴定和DNA...
目的:构建大鼠钙调磷酸酶A亚基(CnA)α基因/EGFP共表达的真核表达质粒,为研究钙调磷酸酶基因在缺血缺氧再灌注诱导的心肌细胞凋亡中的作用提供生物表达系统。方法:RT-PCR方法扩增大鼠CnA基因(约1 590 bp),克隆至T载体,经酶切鉴定和DNA测序证实CnA序列正确后,再用内切酶将CnA从T-CnA质粒中切出,与已插入报告基因IRES-EGFP基因片段的重组pShuttle2载体(pShuttle2-IRES-EGFP)连接,构建CnA/EGFP共表达的真核表达质粒pShuttle2-CnA-IRES-EGFP。结果:DNA测序结果显示扩增的CnA DNA序列与相应的GenBank(NM_017041)所公布的序列完全相同;NheⅠ和NotⅠ双酶切重组质粒pShuttle2-CnA-IRES-EGFP,1%的琼脂糖凝胶电泳分析可见大小分别为1 590和5 240 bp两条片段,与预期值相符。结论:成功构建了以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的大鼠CnA基因的真核表达质粒。
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关键词
钙调磷酸酶
基因表达
载体
增强型绿色荧光蛋白
心肌细胞
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职称材料
题名
大鼠CnA/EGFP基因共表达的真核表达质粒的构建
1
作者
沈小梅
张巨艳
成蓓
机构
华中
科
技
大学
同济医学院协和
医院
心血管内
科
山西医科大学第一附属医院老年病科
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期25-28,共4页
基金
国家自然科学基金资助课题(30170378)
文摘
目的:构建大鼠钙调磷酸酶A亚基(CnA)α基因/EGFP共表达的真核表达质粒,为研究钙调磷酸酶基因在缺血缺氧再灌注诱导的心肌细胞凋亡中的作用提供生物表达系统。方法:RT-PCR方法扩增大鼠CnA基因(约1 590 bp),克隆至T载体,经酶切鉴定和DNA测序证实CnA序列正确后,再用内切酶将CnA从T-CnA质粒中切出,与已插入报告基因IRES-EGFP基因片段的重组pShuttle2载体(pShuttle2-IRES-EGFP)连接,构建CnA/EGFP共表达的真核表达质粒pShuttle2-CnA-IRES-EGFP。结果:DNA测序结果显示扩增的CnA DNA序列与相应的GenBank(NM_017041)所公布的序列完全相同;NheⅠ和NotⅠ双酶切重组质粒pShuttle2-CnA-IRES-EGFP,1%的琼脂糖凝胶电泳分析可见大小分别为1 590和5 240 bp两条片段,与预期值相符。结论:成功构建了以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的大鼠CnA基因的真核表达质粒。
关键词
钙调磷酸酶
基因表达
载体
增强型绿色荧光蛋白
心肌细胞
Keywords
calcineurin
gene expression
vector
enhanced green fluorescent protein
eardiomyocytes
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
Q782 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大鼠CnA/EGFP基因共表达的真核表达质粒的构建
沈小梅
张巨艳
成蓓
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007
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