目的:探讨FoxO4是否通过调控自噬影响小鼠神经干细胞(NSCs)的分化能力,寻找调控NSCs分化潜能的有效途径.方法:利用新生BALB/c小鼠提取海马齿状回(DG)NSCs,通过real time RT-PCR和Western Blot实验检测NSCs在分化前后自噬相关基因以及转...目的:探讨FoxO4是否通过调控自噬影响小鼠神经干细胞(NSCs)的分化能力,寻找调控NSCs分化潜能的有效途径.方法:利用新生BALB/c小鼠提取海马齿状回(DG)NSCs,通过real time RT-PCR和Western Blot实验检测NSCs在分化前后自噬相关基因以及转录因子Forkhead Box O家族(FoxO3、FoxO4和FoxO6)的表达水平;运用基因沉默技术,将电转染后的NSCs分为NC-siRNA组和FoxO4-siRNA组,检测两组NSCs FoxO4 mRNA及蛋白的表达水平,从而验证已转入siRNA序列的目的基因沉默效率;通过real time RT-PCR和Western Blot实验检测NC-siRNA组和FoxO4-siRNA组NSCs自噬相关基因的表达;进一步将两组NSCs分化培养后通过real time RT-PCR实验以及免疫荧光染色检测Tuj1的表达.结果:体外分离培养P0小鼠海马DG区NSCs分化后自噬相关基因ATG3、ATG5、ATG7和Beclin-1 mRNA以及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平被观察到均升高(P<0.01),同时还观察到NSCs分化后FoxO3、FoxO4、FoxO6 mRNA的表达水平均增高(P<0.01),其中转录因子FoxO4的mRNA和蛋白表达增高最为显著(P<0.01).通过运用靶向FoxO4的siRNA转染NSCs后,发现NSCs自噬相关基因ATG3、ATG5、ATG7和Beclin-1 mRNA以及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平均降低(P<0.05),且NSCs中Tuj1表达受到显著抑制(P<0.05).结论:FoxO4基因沉默降低了小鼠海马NSCs中自噬水平,并抑制其向神经元分化.展开更多
目的:探究内质网膜蛋白编码基因seipin杂合性缺失对APP/PS1小鼠认知功能的影响。方法:记录5月龄野生型(WT)、APP/PS1、seipin^(+/-)/APP/PS1小鼠体重和随机血糖,并进行腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)和腹腔胰岛素耐量试验(IPITT)观察糖代谢...目的:探究内质网膜蛋白编码基因seipin杂合性缺失对APP/PS1小鼠认知功能的影响。方法:记录5月龄野生型(WT)、APP/PS1、seipin^(+/-)/APP/PS1小鼠体重和随机血糖,并进行腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)和腹腔胰岛素耐量试验(IPITT)观察糖代谢的变化;运用Morris水迷宫(MWM)评估小鼠的认知能力;应用免疫组织化学法检测小鼠脑内β-淀粉样蛋白(Aβ)斑块沉积水平;通过Western Blot检测小鼠前额叶皮层胰岛素信号通路相关蛋白的变化;运用免疫荧光法检测小鼠前额叶皮层中Iba-1的表达并采用real time RT-PCR检测炎症相关因子的mRNA水平。结果:各组小鼠的体重和随机血糖无明显差异。seipin^(+/-)/APP/PS1组糖耐量曲线下面积(AUC)和胰岛素耐量AUC显著大于APP/PS1组(P<0.05)。MWM反向阶段seipin^(+/-)/APP/PS1组逃避潜伏期较APP/PS1和WT组显著增加,且在SE象限新平台的游程比、穿梭新平台所在位置次数均较APP/PS1和WT组显著降低(P<0.05)。同时我们还发现相较APP/PS1组,seipin^(+/-)/APP/PS1组前额叶皮层Aβ斑块数量显著增加(P<0.05),p-IRS1水平升高(P<0.05),p-Akt水平降低(P<0.05),且激活态小胶质细胞显著增多,iNOS、IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达显著增高(P<0.05)。结论:内质网膜蛋白seipin杂合性缺失可诱导APP/PS1小鼠早期外周糖代谢异常,从而影响前额叶皮层胰岛素代谢促使Aβ沉积,促进炎症因子表达,导致小鼠认知灵活性障碍。展开更多
文摘目的:探究内质网膜蛋白编码基因seipin杂合性缺失对APP/PS1小鼠认知功能的影响。方法:记录5月龄野生型(WT)、APP/PS1、seipin^(+/-)/APP/PS1小鼠体重和随机血糖,并进行腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)和腹腔胰岛素耐量试验(IPITT)观察糖代谢的变化;运用Morris水迷宫(MWM)评估小鼠的认知能力;应用免疫组织化学法检测小鼠脑内β-淀粉样蛋白(Aβ)斑块沉积水平;通过Western Blot检测小鼠前额叶皮层胰岛素信号通路相关蛋白的变化;运用免疫荧光法检测小鼠前额叶皮层中Iba-1的表达并采用real time RT-PCR检测炎症相关因子的mRNA水平。结果:各组小鼠的体重和随机血糖无明显差异。seipin^(+/-)/APP/PS1组糖耐量曲线下面积(AUC)和胰岛素耐量AUC显著大于APP/PS1组(P<0.05)。MWM反向阶段seipin^(+/-)/APP/PS1组逃避潜伏期较APP/PS1和WT组显著增加,且在SE象限新平台的游程比、穿梭新平台所在位置次数均较APP/PS1和WT组显著降低(P<0.05)。同时我们还发现相较APP/PS1组,seipin^(+/-)/APP/PS1组前额叶皮层Aβ斑块数量显著增加(P<0.05),p-IRS1水平升高(P<0.05),p-Akt水平降低(P<0.05),且激活态小胶质细胞显著增多,iNOS、IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达显著增高(P<0.05)。结论:内质网膜蛋白seipin杂合性缺失可诱导APP/PS1小鼠早期外周糖代谢异常,从而影响前额叶皮层胰岛素代谢促使Aβ沉积,促进炎症因子表达,导致小鼠认知灵活性障碍。
