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实验小鼠脂肪组织石蜡切片制作方法的改进 被引量：5
1
作者 菅晓婷 付超 +2 位作者 岳丹 杜圣家 郭林芝 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期742-743,共2页
脂肪组织是机体重要的能量仓库,广泛分布于全身的皮下及内脏各处[1],薄层疏松的结缔组织将其分割成许多小叶结构[2],小叶内有大量的脂肪细胞。近年来,人们越来越重视对脂肪组织的研究[3-5],而这些研究都离不开形态学方面(如HE、免疫组... 脂肪组织是机体重要的能量仓库,广泛分布于全身的皮下及内脏各处[1],薄层疏松的结缔组织将其分割成许多小叶结构[2],小叶内有大量的脂肪细胞。近年来,人们越来越重视对脂肪组织的研究[3-5],而这些研究都离不开形态学方面(如HE、免疫组化染色)的观察。因此,制作优质的脂肪组织切片标本至关重要。由于脂肪组织结构特殊,含有大量的油脂成分,如果组织固定、脱水脱脂不完全,切片时往往出现组织碎渣,有空洞、触摸较软、放置后蜡块表面有凹陷、不易保存等各种问题影响后续的观察及研究[6-8]。本实验室参照董学易等[9]的方法制作脂肪组织石蜡切片,虽基本满足形态学研究,但整个流程所用时间较长,效率较低,减慢了科研进程。为制作更好的脂肪组织石蜡切片,同时缩短制作时间,本科室在此基础上进行改进,并应用于免疫组化和免疫荧光染色,获得了较为满意的结果。 展开更多
关键词 实验小鼠 脂肪组织 石蜡切片
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β_1-肾上腺素受体自身抗体通过激活内质网应激诱导心肌细胞凋亡 被引量：4
2
作者 侯晓鸿 宁娜 +5 位作者 李杨 何金玲 燕子 原媛 王丽 王晓晖 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1921-1927,共7页
目的:探讨内质网应激在β_1-肾上腺素受体自身抗体(β_1-AA)引起心肌细胞凋亡中的作用。方法:采用β_1-肾上腺素受体细胞外第二环抗原肽段主动免疫大鼠,应用SA-ELISA法检测大鼠血清中β_1-AA的水平,TUNEL染色检测心肌组织的凋亡水平,Wes... 目的:探讨内质网应激在β_1-肾上腺素受体自身抗体(β_1-AA)引起心肌细胞凋亡中的作用。方法:采用β_1-肾上腺素受体细胞外第二环抗原肽段主动免疫大鼠,应用SA-ELISA法检测大鼠血清中β_1-AA的水平,TUNEL染色检测心肌组织的凋亡水平,Western blot法和免疫组化法检测心肌组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及caspase-12的蛋白表达。利用亲和层析法纯化的β_1-AA处理H9c2心肌细胞,CCK-8法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡;采用内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)预处理H9c2心肌细胞,再给予β_1-AA干预,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡的变化情况。结果:与对照组相比,主动免疫大鼠血清中β_1-AA水平在免疫2周时显著增加,进一步增加至8周,并且主动免疫2周大鼠心肌组织凋亡率明显升高,持续升高至8周。与对照组相比,主动免疫大鼠心肌组织中GRP78、CHOP及caspase-12的蛋白表达在免疫4周和8周时均明显增加。β_1-AA引起H9c2心肌细胞活力持续降低,凋亡明显增加。与β_1-AA单独处理组相比,内质网应激抑制剂4-PBA预处理H9c2心肌细胞可以有效逆转β_1-AA诱导的细胞凋亡增加和活力下降。结论:β_1-AA可以通过激活内质网应激诱导心肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 β1-肾上腺素受体自身抗体 内质网应激 细胞凋亡 葡萄糖调节蛋白78 C/EBP同源蛋白 CASPASE-12
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自噬标志物LC3的节律表达破坏参与β_(1)-AA诱导的H9c2大鼠心肌细胞死亡 被引量：4
3
作者 贾微微 宁娜 +6 位作者 孙聪 李朋佳 陆洁蓓 张晟 原媛 王丽 王晓晖 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期10-17,共8页
目的:探讨β_(1)-肾上腺素受体(β_(1)-AR)自身抗体(β_(1)-AA)对大鼠心肌细胞自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)节律表达的影响及其在心肌细胞死亡中的作用。方法:实验材料为Sprague-Dawley(SD)大鼠和H9c2大鼠心肌细胞。将SD大鼠随机... 目的:探讨β_(1)-肾上腺素受体(β_(1)-AR)自身抗体(β_(1)-AA)对大鼠心肌细胞自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)节律表达的影响及其在心肌细胞死亡中的作用。方法:实验材料为Sprague-Dawley(SD)大鼠和H9c2大鼠心肌细胞。将SD大鼠随机分为免疫组(β_(1)-AR组)和对照(control)组,每组6只;将H9c2细胞随机分为control组、β_(1)-AA组、慢病毒(LV)-NC组和LV-shPer2组(n=6);合成β_(1)-AR细胞外第二环抗原肽段,用于主动免疫大鼠,并使用亲和层析法从大鼠血清中提纯β_(1)-AA;β_(1)-AA处理H9c2细胞24 h后使用CCK-8法检测细胞活力;用地塞米松同步化细胞后,再给予β_(1)-AA处理,采用real-time PCR及Western blot法检测LC3的表达情况,采用Western blot法检测生物钟蛋白Per2的表达情况,使用JTK_CYCLE算法分析昼夜节律参数;用LV-shPer2感染H9c2细胞以破坏LC3的节律表达,进而采用CCK-8法检测细胞活力。结果:β_(1)-AR组大鼠血清中β_(1)-AA的A值与control组相比显著升高(P<0.05)。β_(1)-AA组H9c2细胞的活力显著低于control组(P<0.05)。β_(1)-AA可破坏H9c2细胞LC3和Per2的节律表达(JTK_CYCLE P<0.05)。通过LV-shPer2干扰Per2基因而破坏H9c2细胞LC3节律表达(JTK_CYCLE P<0.05)后,细胞活力显著降低(P<0.05)。结论:β_(1)-AA破坏H9c2大鼠心肌细胞自噬标志物LC3的节律表达,从而促进细胞死亡。 展开更多
关键词 心肌细胞 β_(1)-肾上腺素受体自身抗体 微管相关蛋白1轻链3 昼夜节律 自噬
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雷帕霉素改善Aβ31-35所致小鼠昼夜节律紊乱 被引量：1
4
作者 王昌图 张蕊 +4 位作者 原媛 赵今 任亚楠 王丽 王晓晖 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期653-659,共7页
目的:观察大环内酯类抗生素雷帕霉素(Rapa)对β-淀粉样蛋白31-35(Aβ31-35)引起的C57BL/6小鼠昼夜节律紊乱及小鼠海马神经元细胞系HT22中Per2表达异常的影响。方法:选取6～8周雄性C57BL/6小鼠进行跑轮行为学实验,分析Rapa在改善Aβ31-3... 目的:观察大环内酯类抗生素雷帕霉素(Rapa)对β-淀粉样蛋白31-35(Aβ31-35)引起的C57BL/6小鼠昼夜节律紊乱及小鼠海马神经元细胞系HT22中Per2表达异常的影响。方法:选取6～8周雄性C57BL/6小鼠进行跑轮行为学实验,分析Rapa在改善Aβ31-35所致小鼠昼夜节律紊乱中的作用。将HT22神经细胞随机分为对照组、Aβ31-35组、Rapa预处理组和Rapa单独处理组,CCK-8法检测细胞活力。采用real-time PCR法检测上述各组细胞于circadian time(CT)4、CT8、CT12、CT16、CT20和CT24的Per2 mRNA表达水平,通过Western blot方法检测Per2 mRNA表达差异最大时点CT16的PER2蛋白表达水平。结果:与对照组相比,Aβ31-35引起小鼠昼夜节律紊乱,自由运转周期显著延长;Rapa预处理后,小鼠的昼夜节律紊乱情况有所改善,自由运转周期显著降低。Aβ31-35引起HT22细胞活力显著降低且具有剂量依赖性;Rapa预处理后有效逆转Aβ31-35诱导的HT22细胞存活率下降(P<0.05)。经Aβ31-35处理后,HT22细胞Per2的mRNA水平在CT16处较对照组明显降低;Rapa预处理后Per2的mRNA异常表达得到显著改善。与对照组相比,Aβ31-35组CT16时Per2蛋白水平显著降低;与Aβ31-35组相比,Rapa预处理组Per2蛋白水平在一定程度上升高(P<0.05)。结论:Rapa可以有效缓解Aβ31-35所致C57BL/6小鼠昼夜节律紊乱,并有效改善Aβ31-35所致HT22细胞中Per2的异常表达。 展开更多
关键词 昼夜节律 雷帕霉素 β-淀粉样蛋白31-35 Per2蛋白
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喉鳞状细胞癌中ZNF750的表达及与预后的关系 被引量：2
5
作者 郭林芝 王丽 +5 位作者 曹红艳 刘青华 闫玲艳 菅晓婷 吴月琴 李灵敏 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期169-172,共4页
目的探讨ZNF750的表达与喉鳞状细胞癌临床病理特征及预后的相关性。方法收集115例喉鳞状细胞癌及56例对应癌旁正常喉组织,另收集6对新鲜喉鳞状细胞癌组织及配对癌旁正常喉组织。采用Western blot法和免疫组化法检测喉鳞状细胞癌组织及... 目的探讨ZNF750的表达与喉鳞状细胞癌临床病理特征及预后的相关性。方法收集115例喉鳞状细胞癌及56例对应癌旁正常喉组织,另收集6对新鲜喉鳞状细胞癌组织及配对癌旁正常喉组织。采用Western blot法和免疫组化法检测喉鳞状细胞癌组织及癌旁正常喉组织中ZNF750蛋白的表达;采用Kaplan-Meier生存曲线和Cox比例风险回归模型分析ZNF750蛋白表达与喉鳞状细胞癌患者预后的关系。结果ZNF750在喉鳞状细胞癌组织中的表达明显低于癌旁正常喉组织(P<0.05),ZNF750蛋白表达与喉鳞状细胞癌的淋巴结转移、TNM分期密切相关(P<0.05),同时喉鳞状细胞癌患者中ZNF750蛋白高表达组的总生存率均高于ZNF750低表达组(P<0.05)。结论ZNF750在喉鳞状细胞癌组织中的表达与淋巴结转移、TNM分期有关,其有望成为预测喉鳞状细胞癌患者预后的指标。 展开更多
关键词 喉肿瘤 鳞状细胞癌 ZNF750 预后因子 WESTERN BLOT 免疫组织化学
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Per2蛋白抑制β_(1)-肾上腺素受体自身抗体诱导的心肌细胞死亡
6
作者 李朋佳 贾微微 +8 位作者 陆洁蓓 马明霞 周秀雅 王宁 原媛 郭蕊 牛晓辰 王晓晖 王丽 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期898-905,共8页
目的探讨周期蛋白2(period 2,Per2)在β_(1)-肾上腺素受体(β_(1)-adrenergic receptor,β_(1)-AR)自身抗体(β_(1)-adrenergic receptor autoantibodies,β_(1)-AA)诱导的心肌细胞死亡中的作用。方法选取6~8周龄SD雄性大鼠16只随机分... 目的探讨周期蛋白2(period 2,Per2)在β_(1)-肾上腺素受体(β_(1)-adrenergic receptor,β_(1)-AR)自身抗体(β_(1)-adrenergic receptor autoantibodies,β_(1)-AA)诱导的心肌细胞死亡中的作用。方法选取6~8周龄SD雄性大鼠16只随机分为主动免疫组[模型组,采用β_(1)-肾上腺素受体细胞外第二环抗原肽段(β_(1)-AR-ECⅡ)对大鼠进行主动免疫]和对照组(同期注射Na_(2)CO_(3)等溶液),每组8只。8周时取大鼠血清,提纯β_(1)-AA。购买H9c2心肌细胞,随机分为Control组、β_(1)-AA组和β_(1)-AR+β_(1)-AA组,CCK-8法检测细胞存活率(n=8);Control组和β_(1)-AA(1μmol/L)组细胞经地塞米松同步化4 h后,Western blot检测两组不同时间点心肌细胞Per2的表达,JTK_CYCLE分析昼夜节律参数(n=11);分别采用慢病毒shPer2和Per2敲低或过表达心肌细胞中Per2的表达,RT-PCR和Western blot检测Per2的表达(n=6);在慢病毒敲低Per2(n=8)和过表达Per2(n=10)基础上,结合β_(1)-AA处理,CCK-8法检测心肌细胞存活率。结果CCK-8结果显示,β_(1)-AA诱导H9c2细胞存活率明显降低(P<0.05)。Western blot结果显示β_(1)-AA显著抑制心肌细胞Per2蛋白的节律性表达(JTK_CYCLE P>0.05),其中CT8和CT16降低最为明显(P<0.01)。慢病毒敲低Per2表达可引起心肌细胞存活率降低;在此基础上进行β_(1)-AA处理,细胞存活率进一步降低(P<0.001)。而过表达Per2可明显逆转β_(1)-AA诱导的心肌细胞存活率下降(P<0.001)。结论Per2抑制β_(1)-AA诱导的H9c2心肌细胞死亡。 展开更多
关键词 心肌细胞 β_(1)-肾上腺素受体自身抗体 PER2 昼夜节律 细胞死亡
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脂联素抑制β1-肾上腺素受体自身抗体诱导的大鼠H9c2心肌细胞自噬流下降 被引量：4
7
作者 孙聪 郭帅 +5 位作者 宁娜 侯晓鸿 王昌图 原媛 王晓晖 王丽 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期796-802,共7页
目的:观察脂联素抑制β1-肾上腺素受体(β1-AR)自身抗体(β1-AA)诱导的大鼠心肌细胞自噬流下降的作用及机制。方法:SD大鼠随机分为免疫组和对照(control)组,每组6只;H9c2大鼠心肌细胞分为control组、β1-AA组、β1-AA+脂联素组、脂联素... 目的:观察脂联素抑制β1-肾上腺素受体(β1-AR)自身抗体(β1-AA)诱导的大鼠心肌细胞自噬流下降的作用及机制。方法:SD大鼠随机分为免疫组和对照(control)组,每组6只;H9c2大鼠心肌细胞分为control组、β1-AA组、β1-AA+脂联素组、脂联素组、β1-AA+脂联素+Compound C组和β1-AA+Compound C组。合成β1-AR细胞外第2环(β1-AR-ECII)抗原肽段,主动免疫SD大鼠并采用亲和层析法纯化大鼠血清中β1-AA;CCK-8法检测H9c2心肌细胞活力;real-time PCR检测心肌细胞LC3B和beclin-1的m RNA水平;Western blot检测心肌细胞LC3-II、P62、AMP活化蛋白激酶(AMPK)和磷酸化AMPK(p-AMPK)的蛋白水平。结果:与control组相比,10μg/L脂联素预处理可显著抑制β1-AA诱导的心肌细胞活力下降(P<0.05);脂联素预处理可显著逆转β1-AA诱导的心肌细胞LC3B和beclin-1 m RNA水平下降、LC3-II蛋白表达水平下降及P62蛋白的累积(P<0.05);脂联素可逆转β1-AA诱导的心肌细胞AMPK磷酸化水平下降(P<0.05)。加入AMPK抑制剂Compound C预处理,脂联素则不能逆转β1-AA诱导的心肌细胞LC3B和beclin-1 m RNA及LC3-II蛋白水平降低(P<0.05),但仍可减少P62蛋白累积(P<0.05)。结论:脂联素抑制β1-AA诱导的H9c2大鼠心肌细胞自噬流降低,其机制部分依赖AMPK途径。 展开更多
关键词 脂联素 β1-肾上腺素受体自身抗体 自噬 AMP活化蛋白激酶 心肌细胞
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