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流式细胞术三种染色方法检测体外纯化扩增的NK细胞的细胞毒作用比较
被引量：
5
1
作者
郭继强
韩亚萍
+4 位作者
李芳
赵晴
贾原
靳保利
张俊萍
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期1691-1697,共7页
目的:比较流式细胞术3种不同染色方法检测体外诱导扩增后NK细胞的细胞毒活性效果。方法:收集健康志愿者外周血,体外诱导扩增NK细胞,在培养第17天后分为3组,每组按10∶1、20∶1、40∶1 3个效靶比混合,共同培养4 h,并分组用3种不同方法染...
目的:比较流式细胞术3种不同染色方法检测体外诱导扩增后NK细胞的细胞毒活性效果。方法:收集健康志愿者外周血,体外诱导扩增NK细胞,在培养第17天后分为3组,每组按10∶1、20∶1、40∶1 3个效靶比混合,共同培养4 h,并分组用3种不同方法染色后经流式细胞术检测。A组:CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法;B组:Annectin-V/PI双色荧光染色法;C组:CFSE/PI双色荧光染色法。结果:培养17 d后,NK细胞(CD3-CD56+)由培养第0天(16.34±10.51)%增加到(83.63±10.63)%(P<0.05)。3种染色方法检测结果均显示,扩增后NK细胞对K562细胞具有显著细胞毒活性:A组NK细胞对K562细胞的细胞毒活性均明显高于B和C组(P<0.05),当效靶比为10∶1时,A、B和C 3个组细胞毒活性分别为(36.56±3.69)%、(22.35±2.71)%和(10.85±2.09)%;当效靶比为20∶1时细胞毒活性分别为(47.83±5.52)%、(39.07±5.55)%和(29.61±4.81)%;当效靶比为40∶1时细胞毒活性则分别为(67.7±4.77)%、(51.51±4.43)%和(44.12±5.62)%,差异均有显著统计学意义(P<0.05)。结论:健康者外周血经体外分离培养,可得到高纯度NK细胞;流式细胞检测技术CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法能特异性地和灵敏地检测NK细胞的细胞毒活性。
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关键词
流式细胞技术
细胞毒作用
NK细胞
CFSE
Annexin-V/7-AAD
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职称材料
穿膜肽介导的NY-ESO-1_(155-163)诱导CTL对黑素瘤A-375细胞的杀伤活性
2
作者
李文丽
贾原
+3 位作者
赵晴
李芳
靳保利
张俊萍
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期710-715,共6页
目的:探讨穿膜肽(cell penetrating peptide,CPP)Tat_(49-57)携带NY-ESO-1_(155-163)抗原肽致敏DC后诱导获得抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL),并体外检测其对黑素瘤细胞株A-375的杀伤效果。方法:采集健康志愿者...
目的:探讨穿膜肽(cell penetrating peptide,CPP)Tat_(49-57)携带NY-ESO-1_(155-163)抗原肽致敏DC后诱导获得抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL),并体外检测其对黑素瘤细胞株A-375的杀伤效果。方法:采集健康志愿者外周血50 ml,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,经细胞因子诱导,获得DC和T淋巴细胞。实验组用Tat_(49-57)-NYESO-1155-163致敏DC,待DC成熟后与T淋巴细胞混合诱导产生CTL,并设PBS组和NY-ESO-1_(155-163)组作为对照。流式细胞术检测致敏前后DC的表型,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测抗原肽疫苗致敏DC后诱导的CTL对黑素瘤细胞株A-375的体外杀伤活性,同时与对人肺癌A549细胞株、人白血病K562细胞的杀伤作用进行比较。结果:Tat显著提升NY-ESO-1_(155-163)进入DC的穿膜能力。与NY-ESO-1_(155-163)致敏的DC相比,Tat_(49-57)-NY-ESO-1_(155-163)致敏后DC的CD80/CD86[(54.9±3.3)%vs(43.8±5.7)%,P<0.05]和CD40[(42.1±1.9)%vs(23.7±2.8)%,P<0.05]的表达率显著升高。Tat_(49-57)-NY-ESO-1_(155-163)刺激DC后诱导培养的T细胞亚群主要以MHC-Ⅰ类分子介导的CD3+CD8+细胞为主。Tat_(49-57)-NY-ESO-1_(155-163)组CTL对A-375细胞的杀伤能力显著高于NY-ESO-1_(155-163)组,且随着效靶比的增加,杀伤活性逐渐增强(P<0.05)。A-375细胞高表达NY-ESO-1,Tat_(49-57)-NY-ESO-1_(155-163)组CTL对A-375细胞具有特异性杀伤作用,杀伤作用显著强于A549和K562细胞(均P<0.05)。结论:Tat_(49-57)可以增强NY-ESO-1_(155-163)抗原多肽的免疫原性,Tat_(49-57)-NY-ESO-1_(155-163)多肽致敏DC能有效诱导CTL抗黑素瘤细胞A-375的特异性免疫应答。
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关键词
黑素瘤
树突状细胞
细胞穿膜肽
肿瘤免疫治疗
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职称材料
题名
流式细胞术三种染色方法检测体外纯化扩增的NK细胞的细胞毒作用比较
被引量：
5
1
作者
郭继强
韩亚萍
李芳
赵晴
贾原
靳保利
张俊萍
机构
山西医学科学院山西大医院生物治疗科
山西
医
科
大学研究生院
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期1691-1697,共7页
基金
山西省生物治疗基础建设示范平台基金项目(2014091105-0101)
文摘
目的:比较流式细胞术3种不同染色方法检测体外诱导扩增后NK细胞的细胞毒活性效果。方法:收集健康志愿者外周血,体外诱导扩增NK细胞,在培养第17天后分为3组,每组按10∶1、20∶1、40∶1 3个效靶比混合,共同培养4 h,并分组用3种不同方法染色后经流式细胞术检测。A组:CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法;B组:Annectin-V/PI双色荧光染色法;C组:CFSE/PI双色荧光染色法。结果:培养17 d后,NK细胞(CD3-CD56+)由培养第0天(16.34±10.51)%增加到(83.63±10.63)%(P<0.05)。3种染色方法检测结果均显示,扩增后NK细胞对K562细胞具有显著细胞毒活性:A组NK细胞对K562细胞的细胞毒活性均明显高于B和C组(P<0.05),当效靶比为10∶1时,A、B和C 3个组细胞毒活性分别为(36.56±3.69)%、(22.35±2.71)%和(10.85±2.09)%;当效靶比为20∶1时细胞毒活性分别为(47.83±5.52)%、(39.07±5.55)%和(29.61±4.81)%;当效靶比为40∶1时细胞毒活性则分别为(67.7±4.77)%、(51.51±4.43)%和(44.12±5.62)%,差异均有显著统计学意义(P<0.05)。结论:健康者外周血经体外分离培养,可得到高纯度NK细胞;流式细胞检测技术CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法能特异性地和灵敏地检测NK细胞的细胞毒活性。
关键词
流式细胞技术
细胞毒作用
NK细胞
CFSE
Annexin-V/7-AAD
Keywords
flow cytometry
cell-mediated cytotoxicity
NK cell
carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester（CFSE）
Annexin-V/7-AAD
分类号
R446.6 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
穿膜肽介导的NY-ESO-1_(155-163)诱导CTL对黑素瘤A-375细胞的杀伤活性
2
作者
李文丽
贾原
赵晴
李芳
靳保利
张俊萍
机构
山西
医学
科学院
山西大医院
肿瘤
生物
治疗
科
出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期710-715,共6页
基金
山西省生物治疗示范平台项目资助(No.2014091105-0101)~~
文摘
目的:探讨穿膜肽(cell penetrating peptide,CPP)Tat_(49-57)携带NY-ESO-1_(155-163)抗原肽致敏DC后诱导获得抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL),并体外检测其对黑素瘤细胞株A-375的杀伤效果。方法:采集健康志愿者外周血50 ml,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,经细胞因子诱导,获得DC和T淋巴细胞。实验组用Tat_(49-57)-NYESO-1155-163致敏DC,待DC成熟后与T淋巴细胞混合诱导产生CTL,并设PBS组和NY-ESO-1_(155-163)组作为对照。流式细胞术检测致敏前后DC的表型,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测抗原肽疫苗致敏DC后诱导的CTL对黑素瘤细胞株A-375的体外杀伤活性,同时与对人肺癌A549细胞株、人白血病K562细胞的杀伤作用进行比较。结果:Tat显著提升NY-ESO-1_(155-163)进入DC的穿膜能力。与NY-ESO-1_(155-163)致敏的DC相比,Tat_(49-57)-NY-ESO-1_(155-163)致敏后DC的CD80/CD86[(54.9±3.3)%vs(43.8±5.7)%,P<0.05]和CD40[(42.1±1.9)%vs(23.7±2.8)%,P<0.05]的表达率显著升高。Tat_(49-57)-NY-ESO-1_(155-163)刺激DC后诱导培养的T细胞亚群主要以MHC-Ⅰ类分子介导的CD3+CD8+细胞为主。Tat_(49-57)-NY-ESO-1_(155-163)组CTL对A-375细胞的杀伤能力显著高于NY-ESO-1_(155-163)组,且随着效靶比的增加,杀伤活性逐渐增强(P<0.05)。A-375细胞高表达NY-ESO-1,Tat_(49-57)-NY-ESO-1_(155-163)组CTL对A-375细胞具有特异性杀伤作用,杀伤作用显著强于A549和K562细胞(均P<0.05)。结论:Tat_(49-57)可以增强NY-ESO-1_(155-163)抗原多肽的免疫原性,Tat_(49-57)-NY-ESO-1_(155-163)多肽致敏DC能有效诱导CTL抗黑素瘤细胞A-375的特异性免疫应答。
关键词
黑素瘤
树突状细胞
细胞穿膜肽
肿瘤免疫治疗
Keywords
melanoma
dendritic cells(DCs)
cell penetrating peptides(CPPs)
tumor immunotherapy
分类号
R739.5 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
流式细胞术三种染色方法检测体外纯化扩增的NK细胞的细胞毒作用比较
郭继强
韩亚萍
李芳
赵晴
贾原
靳保利
张俊萍
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
穿膜肽介导的NY-ESO-1_(155-163)诱导CTL对黑素瘤A-375细胞的杀伤活性
李文丽
贾原
赵晴
李芳
靳保利
张俊萍
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
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