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植物和细菌TurboID邻近蛋白标记方法的建立
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作者 王芳 邵会茹 +4 位作者 吕林龙 赵点 胡振 吕建珍 姜亮 《生物技术通报》 北大核心 2025年第9期44-53,共10页
【目的】TurboID邻近蛋白标记技术是一种基于生物素连接酶的新型蛋白互作研究技术,具有标记速度快、时空分辨率高和毒性小等优点。目前该技术仍处于逐步推广阶段,并在少数物种中得到应用。通过构建多种代表性物种的TurboID表达系统,评... 【目的】TurboID邻近蛋白标记技术是一种基于生物素连接酶的新型蛋白互作研究技术,具有标记速度快、时空分辨率高和毒性小等优点。目前该技术仍处于逐步推广阶段,并在少数物种中得到应用。通过构建多种代表性物种的TurboID表达系统,评估其在单子叶植物、双子叶植物及原核生物中的标记效能和应用范围。【方法】分别构建在单子叶植物[水稻(Oryza sativa)]、双子叶植物[拟南芥(Arabidopsis thaliana)、番茄(Solanum lycopersicum)、本氏烟草(Nicotiana benthamiana)]和细菌[大肠杆菌(Escherichia coli)]中表达“标签蛋白+TurboID”融合蛋白的载体,并将其转化至相应物种。通过生物素溶液处理转基因材料后提取总蛋白,利用标签蛋白免疫印迹检测融合蛋白的表达情况,并通过生物素免疫印迹检测内源蛋白的标记情况。【结果】在植物中采用泛素启动子、细菌中采用T7启动子驱动表达,实现了“标签蛋白+TurboID”融合蛋白在拟南芥、番茄、烟草、水稻愈伤组织和大肠杆菌中的高效表达。免疫印迹显示融合蛋白表达良好,且经生物素处理后,各系统中均有多种内源蛋白被有效标记,表明所构建的TurboID系统在单子叶植物、双子叶植物及原核生物中均具有良好适用性和推广潜力。【结论】成功在单子叶植物、双子叶植物和细菌中建立了TurboID邻近蛋白标记方法,为复杂蛋白互作网络分析提供了高效、可靠的技术平台。 展开更多
关键词 TurboID 邻近蛋白标记 生物素 生物素连接酶 蛋白互作 拟南芥 水稻
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超声处理对新酿梨酒风味调控规律的研究
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作者 李定显 贾昕怡 +3 位作者 高雅婷 侯华铭 王诗瑶 陈益胜 《农产品加工》 2025年第6期6-12,18,共8页
通过单因素试验设计,对不同时间(20~60 min)、温度(20~60℃)和功率密度(200~1000 W/L)下的梨酒样品进行超声处理,并评估了其风味指标(总糖、总酸、总酯、总酚、杂醇油)及感官品质。研究发现,超声处理显著改善了梨酒的关键风味成分,提高... 通过单因素试验设计,对不同时间(20~60 min)、温度(20~60℃)和功率密度(200~1000 W/L)下的梨酒样品进行超声处理,并评估了其风味指标(总糖、总酸、总酯、总酚、杂醇油)及感官品质。研究发现,超声处理显著改善了梨酒的关键风味成分,提高了总糖、总酸和总酚的含量,同时降低了总杂醇油含量。其中,总糖含量分别在100 min组、40℃组、1000 W/L组时达到峰值(p<0.05);总酸含量分别在100 min组、40℃组、200 W/L组的条件下达到峰值(p<0.05);总酚含量则分别在60 min组30℃组、800 W/L组的条件下达到峰值(p<0.05);总杂醇油含量分别在20 min、20℃、600 W/L以及20 min、20℃、1000 W/L的条件下最低,分别降低了26.2%和38.7%(p<0.05);总酯含量的变化则均呈下降趋势,规律一般。研究结果进一步确认了超声处理对提升梨酒风味的有效性,提供了一种绿色、高效的梨酒风味调控方法,有助于提升品质并为企业节约成本。 展开更多
关键词 超声波 梨酒 风味调控 陈化
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基于黏虫转录组的几丁质酶基因筛选和表达分析
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作者 张欢欢 戴莉娇 +4 位作者 穆晓娅 王亦学 郝曜山 王晓清 吴慎杰 《环境昆虫学报》 2024年第4期919-929,共11页
昆虫的几丁质酶对昆虫的生长发育致关重要,是生物农药的重要靶标。本研究使用高通量测序技术对迁飞性害虫黏虫Mythimna separata的中肠和表皮组织进行了转录组测序、序列组装、功能注释及差异表达基因分析。对转录组数据库中鉴定出的几... 昆虫的几丁质酶对昆虫的生长发育致关重要,是生物农药的重要靶标。本研究使用高通量测序技术对迁飞性害虫黏虫Mythimna separata的中肠和表皮组织进行了转录组测序、序列组装、功能注释及差异表达基因分析。对转录组数据库中鉴定出的几丁质酶基因进行了理化性质的预测,包括cDNA长度、蛋白质分子量、氨基酸序列、等电点、不稳定系数、跨膜结构和蛋白结构域等。使用MEGA软件构建了黏虫和其他昆虫几丁质酶的系统进化树,并通过q-PCR验证了黏虫基因在不同组织和发育阶段的表达模式。通过中肠与表皮的转录组测序,获得了19.42 Gb的数据,在COG、GO、KEGG、KOG、Pfam、Swissprot、eggNOG、nr数据库注释到了25236个Unigene;基因表达分析结果表明,中肠和表皮的差异表达基因共有3137个,其中中肠高表达基因有1872个,表皮高表达基因有1265个。从转录组数据中鉴定出9个几丁质酶基因,其中7个是新的几丁质酶基因,这些基因的cDNA长度在1362~9816 bp,SMART结构预测表明几丁质酶含有1个或多个催化结构域。构建的系统进化树将昆虫几丁质酶基因分为9个亚家族。q-PCR结果表明MsCht2、MsCht5、MsCht6、MsCht7、MsIDGF1在表皮中表达量较高,MsCht4、MsCht11和MsChi-H在中肠中表达量较高,与转录组数据一致;多数几丁质酶基因在蛹期或预蛹期表达量最高,而MsCht4在5龄期表达量最高,在蛹期表达量很低。黏虫几丁质酶基因表达上存在不同的差异,不同的几丁质酶基因可能具有不同的功能。本研究筛选出了7个新的几丁质酶基因,为黏虫的生物防治提供了新的靶标。研究结果为进一步研究黏虫几丁质酶的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 黏虫 转录组 几丁质酶 基因表达
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