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植物源SARS-CoV-2 S1-RBD表达水平的优化
1
作者
李晗
纪惠莹
+3 位作者
张天昊
王春玉
何金鑫
张莉莉
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第12期1761-1770,共10页
SARS-CoV-2受体结合域(RBD)是重组蛋白质疫苗的关键靶点。高效和高质量地表达RBD蛋白是开发有效重组蛋白疫苗的重要基础。相较于CHO细胞生产的RBD疫苗,植物表达系统具有更高安全性和更低成本的优势。目前,RBD抗原在植物中的表达水平较低...
SARS-CoV-2受体结合域(RBD)是重组蛋白质疫苗的关键靶点。高效和高质量地表达RBD蛋白是开发有效重组蛋白疫苗的重要基础。相较于CHO细胞生产的RBD疫苗,植物表达系统具有更高安全性和更低成本的优势。目前,RBD抗原在植物中的表达水平较低,且其提取和质量优化方法尚未完全建立。本研究以SARS-CoV-2原型株RBD的R 319~K 537位氨基酸为模板,通过植物表达载体pCAMBIA1300在本氏烟草中进行瞬时表达。初始表达水平较低,仅为23.3μg/g鲜重,占植物总可溶蛋白质的0.23%。通过共表达高效基因沉默抑制子pGD-VSRs,RBD表达量提高了2.61倍。通过C-末端融合绿色荧光蛋白,确定了RBD在植物中定位于质外体区域。进一步引入αAmy3信号肽,使RBD的积累水平较PR1a信号肽提高2.1倍。最终,RBD在本氏烟草中的表达量提升至128.6μg/g鲜重,占植物总可溶蛋白质的1.29%。随后,采用质外提取纯化方法,获得纯度超过90%的RBD蛋白。小鼠免疫实验表明,该植物来源的RBD与CHO来源的RBD具有相当的免疫原性。本研究为植物源RBD疫苗的开发提供了重要的理论基础和技术支持。
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关键词
SARS-CoV-2
受体结合域
植物表达系统
基因沉默抑制子
信号肽
免疫原性
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职称材料
题名
植物源SARS-CoV-2 S1-RBD表达水平的优化
1
作者
李晗
纪惠莹
张天昊
王春玉
何金鑫
张莉莉
机构
山西农业大学动物医学学院动物医学系
中国科
学院
微生物研究所植物基因组学国家重点实验室
山东第一医科
大学
(山东省
医学
科
学院
)临床与基础
医学
院基础
医学
系
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第12期1761-1770,共10页
基金
中国科学院微生物研究所“三年行动计划”重点部署项目支持基金(No.E2SJ060603)资助。
文摘
SARS-CoV-2受体结合域(RBD)是重组蛋白质疫苗的关键靶点。高效和高质量地表达RBD蛋白是开发有效重组蛋白疫苗的重要基础。相较于CHO细胞生产的RBD疫苗,植物表达系统具有更高安全性和更低成本的优势。目前,RBD抗原在植物中的表达水平较低,且其提取和质量优化方法尚未完全建立。本研究以SARS-CoV-2原型株RBD的R 319~K 537位氨基酸为模板,通过植物表达载体pCAMBIA1300在本氏烟草中进行瞬时表达。初始表达水平较低,仅为23.3μg/g鲜重,占植物总可溶蛋白质的0.23%。通过共表达高效基因沉默抑制子pGD-VSRs,RBD表达量提高了2.61倍。通过C-末端融合绿色荧光蛋白,确定了RBD在植物中定位于质外体区域。进一步引入αAmy3信号肽,使RBD的积累水平较PR1a信号肽提高2.1倍。最终,RBD在本氏烟草中的表达量提升至128.6μg/g鲜重,占植物总可溶蛋白质的1.29%。随后,采用质外提取纯化方法,获得纯度超过90%的RBD蛋白。小鼠免疫实验表明,该植物来源的RBD与CHO来源的RBD具有相当的免疫原性。本研究为植物源RBD疫苗的开发提供了重要的理论基础和技术支持。
关键词
SARS-CoV-2
受体结合域
植物表达系统
基因沉默抑制子
信号肽
免疫原性
Keywords
SARS-CoV-2
receptor-binding domain
plant expression system
gene silencing suppressors
signal peptide
immunogenicity
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
植物源SARS-CoV-2 S1-RBD表达水平的优化
李晗
纪惠莹
张天昊
王春玉
何金鑫
张莉莉
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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