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猪圆环病毒2型感染树突状细胞外泌体中差异miRNA分析
被引量：
1
1
作者
上官琳晖
丁文文
+5 位作者
刘佳宇
范阔海
尹伟
孙娜
孙盼盼
李宏全
《山西农业大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2023年第4期54-64,共11页
[目的]本研究旨在探究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染中,树突状细胞(Dendritic cell,DC)外泌体miRNA在调节免疫反应中的作用。[方法]以正常的单核细胞来源树突状细胞(MoDC)来源外泌体(DEX)为空白对照组,病毒感染的M...
[目的]本研究旨在探究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染中,树突状细胞(Dendritic cell,DC)外泌体miRNA在调节免疫反应中的作用。[方法]以正常的单核细胞来源树突状细胞(MoDC)来源外泌体(DEX)为空白对照组,病毒感染的MoDC来源外泌体(VDEX)为试验组,使用间接免疫荧光评估感染模型鉴定外泌体后,通过高通量测序技术分析两者中的差异miRNA。[结果]间接免疫荧光结果显示,与PCV2共孵育的MoDC中有特异性绿色荧光,表明PCV2感染MoDC模型建立成功。纳米颗粒追踪技术结果显示,超速离心法提取的外泌体直径分别为130 nm和120 nm。Western blot结果显示,两组外泌体均存在特异性标记蛋白CD63和TSG101。高通量测序结果显示,与DEX组相比,VDEX组共504种miRNA发生显著变化(P<0.05),其中161种表达上调,343种表达下调。qPCR结果表明,与DEX相比,VDEX中sscmiR10b、sscmiR199a3pR1、sscmiR5325p、sscmiR4255p、sscmiR210、sscmiR144R+1、ssclet7c、sscmiR107R2、sscmiR225pR1和sscmiR2963pR+1表达量显著下降(P<0.05),与测序结果一致。GO分析显示,差异靶基因参与的生物学功能主要有转录调控(DNA模板)、RNA聚合酶Ⅱ对转录的正/负调控、信号转导和氧化还原等过程。KEGG通路分析发现,差异靶基因主要参与T细胞受体信号通路、Th17细胞分化通路、癌症通路、细胞内吞作用和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路等。通过差异miRNA显著性P值、Foldchange和KEGG富集分析,最终确定出个10目标miRNA。[结论]VDEX中差异性表达的miRNA及其靶基因通过调控T细胞的增殖分化来调节免疫反应。
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关键词
猪圆环病毒2型
外泌体
微小核糖核酸
高通量测序
树突状细胞
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职称材料
ZnSO_(4)通过干扰PRRSV的生命周期阶段抑制PRRSV的增殖
2
作者
杨惠珍
李晓姣
+6 位作者
孙家振
吴子璇
范阔海
尹伟
孙娜
张振彪
李宏全
《山西农业大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2024年第4期51-59,共9页
[目的]本文旨在探究硫酸锌(Zinc sulfate,ZnSO_(4))抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine respiratory and re⁃productive syndrome virus,PRRSV)复制的作用,明确Zn^(2+)载体槲皮素(Quercetin,QR)增强Zn抗PRRSV感染的作用,为进一步将ZnSO...
[目的]本文旨在探究硫酸锌(Zinc sulfate,ZnSO_(4))抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine respiratory and re⁃productive syndrome virus,PRRSV)复制的作用,明确Zn^(2+)载体槲皮素(Quercetin,QR)增强Zn抗PRRSV感染的作用,为进一步将ZnSO_(4)联合QR作为潜在预防和治疗PRRSV感染的有效策略提供理论支持。[方法]利用细胞培养半数感染量(Cell culture infective dose 50%,CCID_(50))的方法检测ZnSO_(4)和ZnCl_(2)对PRRSV滴度的影响。利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白印迹(Western blot,WB)检测ZnSO_(4)处理Marc-145和PAMs细胞后,PRRSV N基因和N蛋白表达量的变化。利用qRT-PCR检测ZnSO_(4)预处理24 h后,在4℃和37℃处理下PRRSV N基因表达量的变化。同时,利用qRT-PCR检测ZnSO_(4)处理不同时间,培养基上清中PRRSV N基因表达量的变化。利用qRT-PCR和WB检测ZnSO_(4)、QR以及两者联合处理,PRRSV N基因和N蛋白表达量的变化。[结果]CCID_(50)结果表明:ZnSO_(4)和ZnCl2均可显著降低PRRSV滴度。在Marc-145和PAMs上,不同浓度ZnSO_(4)处理,均可显著抑制PRRSV N基因和N蛋白表达,且抑制作用呈明显的剂量-效应关系。不同浓度ZnSO_(4)预处理24 h,在4℃和37℃处理2 h后,均可显著降低PRRSV N基因表达,且呈明显的剂量-效应关系。100μmol·L^(–1)ZnSO_(4)处理,在不同时间段,可显著抑制上清中PRRSV N基因的表达。ZnSO_(4)联合QR处理结果表明,ZnSO_(4)联合QR可显著抑制PRRSV N基因和N蛋白的表达。[结论]ZnSO_(4)能显著抑制PRRSV的复制,它不仅可以阻止PRRSV的黏附和进入,而且可以抑制PRRSV的复制和干扰PRRSV的释放。此外,QR可以增强ZnSO_(4)抗PRRSV感染的作用。本研究为进一步明确ZnSO_(4)抗PRRSV感染的分子机制奠定了理论基础。
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关键词
硫酸锌
猪繁殖与呼吸综合征病毒
抗病毒
槲皮素
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职称材料
题名
猪圆环病毒2型感染树突状细胞外泌体中差异miRNA分析
被引量：
1
1
作者
上官琳晖
丁文文
刘佳宇
范阔海
尹伟
孙娜
孙盼盼
李宏全
机构
山西农业大学动物医学学院/中兽医药现代化山西省重点实验室
山西
农业
大学
实验
动物
管理
中
心
出处
《山西农业大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2023年第4期54-64,共11页
基金
山西省重点研发计划项目(202102140601019)。
文摘
[目的]本研究旨在探究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染中,树突状细胞(Dendritic cell,DC)外泌体miRNA在调节免疫反应中的作用。[方法]以正常的单核细胞来源树突状细胞(MoDC)来源外泌体(DEX)为空白对照组,病毒感染的MoDC来源外泌体(VDEX)为试验组,使用间接免疫荧光评估感染模型鉴定外泌体后,通过高通量测序技术分析两者中的差异miRNA。[结果]间接免疫荧光结果显示,与PCV2共孵育的MoDC中有特异性绿色荧光,表明PCV2感染MoDC模型建立成功。纳米颗粒追踪技术结果显示,超速离心法提取的外泌体直径分别为130 nm和120 nm。Western blot结果显示,两组外泌体均存在特异性标记蛋白CD63和TSG101。高通量测序结果显示,与DEX组相比,VDEX组共504种miRNA发生显著变化(P<0.05),其中161种表达上调,343种表达下调。qPCR结果表明,与DEX相比,VDEX中sscmiR10b、sscmiR199a3pR1、sscmiR5325p、sscmiR4255p、sscmiR210、sscmiR144R+1、ssclet7c、sscmiR107R2、sscmiR225pR1和sscmiR2963pR+1表达量显著下降(P<0.05),与测序结果一致。GO分析显示,差异靶基因参与的生物学功能主要有转录调控(DNA模板)、RNA聚合酶Ⅱ对转录的正/负调控、信号转导和氧化还原等过程。KEGG通路分析发现,差异靶基因主要参与T细胞受体信号通路、Th17细胞分化通路、癌症通路、细胞内吞作用和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路等。通过差异miRNA显著性P值、Foldchange和KEGG富集分析,最终确定出个10目标miRNA。[结论]VDEX中差异性表达的miRNA及其靶基因通过调控T细胞的增殖分化来调节免疫反应。
关键词
猪圆环病毒2型
外泌体
微小核糖核酸
高通量测序
树突状细胞
Keywords
PCV2
Exosomes
MicroRNA
High-Throughput sequencing
Dendritic cells
分类号
S852.3 [农业科学—基础兽医学]
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
ZnSO_(4)通过干扰PRRSV的生命周期阶段抑制PRRSV的增殖
2
作者
杨惠珍
李晓姣
孙家振
吴子璇
范阔海
尹伟
孙娜
张振彪
李宏全
机构
山西农业大学动物医学学院/中兽医药现代化山西省重点实验室
出处
《山西农业大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2024年第4期51-59,共9页
基金
山西省基础研究计划项目(20210302124138)
山西省科技创新人才团队专项(202204051001021)
+1 种基金
山西农业大学科技创新基金博士科研启动项目(2020BQ66)
山西农业大学大学生创新创业训练计划项目(S202410113049)。
文摘
[目的]本文旨在探究硫酸锌(Zinc sulfate,ZnSO_(4))抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine respiratory and re⁃productive syndrome virus,PRRSV)复制的作用,明确Zn^(2+)载体槲皮素(Quercetin,QR)增强Zn抗PRRSV感染的作用,为进一步将ZnSO_(4)联合QR作为潜在预防和治疗PRRSV感染的有效策略提供理论支持。[方法]利用细胞培养半数感染量(Cell culture infective dose 50%,CCID_(50))的方法检测ZnSO_(4)和ZnCl_(2)对PRRSV滴度的影响。利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白印迹(Western blot,WB)检测ZnSO_(4)处理Marc-145和PAMs细胞后,PRRSV N基因和N蛋白表达量的变化。利用qRT-PCR检测ZnSO_(4)预处理24 h后,在4℃和37℃处理下PRRSV N基因表达量的变化。同时,利用qRT-PCR检测ZnSO_(4)处理不同时间,培养基上清中PRRSV N基因表达量的变化。利用qRT-PCR和WB检测ZnSO_(4)、QR以及两者联合处理,PRRSV N基因和N蛋白表达量的变化。[结果]CCID_(50)结果表明:ZnSO_(4)和ZnCl2均可显著降低PRRSV滴度。在Marc-145和PAMs上,不同浓度ZnSO_(4)处理,均可显著抑制PRRSV N基因和N蛋白表达,且抑制作用呈明显的剂量-效应关系。不同浓度ZnSO_(4)预处理24 h,在4℃和37℃处理2 h后,均可显著降低PRRSV N基因表达,且呈明显的剂量-效应关系。100μmol·L^(–1)ZnSO_(4)处理,在不同时间段,可显著抑制上清中PRRSV N基因的表达。ZnSO_(4)联合QR处理结果表明,ZnSO_(4)联合QR可显著抑制PRRSV N基因和N蛋白的表达。[结论]ZnSO_(4)能显著抑制PRRSV的复制,它不仅可以阻止PRRSV的黏附和进入,而且可以抑制PRRSV的复制和干扰PRRSV的释放。此外,QR可以增强ZnSO_(4)抗PRRSV感染的作用。本研究为进一步明确ZnSO_(4)抗PRRSV感染的分子机制奠定了理论基础。
关键词
硫酸锌
猪繁殖与呼吸综合征病毒
抗病毒
槲皮素
Keywords
Zinc sulfate
Porcine respiratory and reproductive syndrome virus
Antiviral
Quercetin
分类号
S852 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪圆环病毒2型感染树突状细胞外泌体中差异miRNA分析
上官琳晖
丁文文
刘佳宇
范阔海
尹伟
孙娜
孙盼盼
李宏全
《山西农业大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2023
1
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职称材料
2
ZnSO_(4)通过干扰PRRSV的生命周期阶段抑制PRRSV的增殖
杨惠珍
李晓姣
孙家振
吴子璇
范阔海
尹伟
孙娜
张振彪
李宏全
《山西农业大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2024
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