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紫苏质体型PfLPAT1B基因的克隆及其在油脂合成中的功能分析
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作者 黄旭升 周雅莉 +4 位作者 柴旭东 闻婧 王计平 贾小云 李润植 《生物技术通报》 北大核心 2025年第7期226-236,共11页
【目的】溶血磷脂酸酰基转移酶(lysophosphatidic acid acyltransferase,LPAT)在植物生长发育和脂质代谢等过程中发挥重要作用,探究紫苏PfLPAT1B基因的生物学功能,为紫苏及其他油料作物的遗传改良和新品系培育提供科学依据。【方法】从... 【目的】溶血磷脂酸酰基转移酶(lysophosphatidic acid acyltransferase,LPAT)在植物生长发育和脂质代谢等过程中发挥重要作用,探究紫苏PfLPAT1B基因的生物学功能,为紫苏及其他油料作物的遗传改良和新品系培育提供科学依据。【方法】从紫苏基因组数据库鉴定PfLPAT1B基因序列,利用组学工具分析其序列特征及系统进化,通过RT-qPCR检测PfLPAT1B基因在紫苏不同组织及种子不同发育时期表达特性,利用LPAT缺陷型菌株SM2-1检测PfLPAT1B蛋白的活性,通过酿酒酵母与烟草遗传转化分析PfLPAT1B在油脂合成中的功能。【结果】PfLPAT1B共编码369个氨基酸,为碱性不稳定亲水蛋白;PfLPAT1B具有典型的LPAT酰基转移酶活性保守结构域。PfLPAT1B基因在紫苏不同组织及种子不同发育时期均有表达,在花中的表达量最高,且随着种子发育PfLPAT1B的表达量逐渐升高。亚细胞定位结果表明紫苏PfLPAT1B定位于叶绿体。SM2-1菌株互补酶活检测证明紫苏PfLPAT1B具有LPAT酶活性。酵母与烟草转化结果表明,过表达PfLPAT1B基因导致转基因酵母及烟草总油脂含量显著上升,且C16:0和C16:1含量显著上升。此外,过表达PfLPAT1B促进转基因烟草淀粉含量显著上升,可溶性糖含量显著降低,表明PfLPAT1B过表达可能促进转基因烟草碳通量的分配,使其从糖代谢途径进入油脂代谢途径。【结论】紫苏PfLPAT1B基因编码蛋白具有LPAT酰基转移酶活性,异源过表达PfLPAT1B可显著提高宿主组织油脂产量,并改变主要脂肪酸组分的含量。 展开更多
关键词 紫苏 溶血磷脂酸酰基转移酶 油脂合成积累 序列特征分析 表达特性分析 大肠杆菌互补功能测试 酿酒酵母转化 烟草异源表达
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大豆BCAT基因家族鉴定及GmBCAT3在干旱胁迫中的功能分析
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作者 王碧成 景海青 +5 位作者 万坤 张莹莹 丁家豪 李润植 薛金爱 张海平 《生物技术通报》 北大核心 2025年第10期196-209,共14页
【目的】支链氨基酸(branched-chain amino acids,BCAAs)是植物在干旱胁迫下积累的主要代谢物,支链氨基酸转氨酶(branched-chain amino acid transaminase,BCAT)是支链氨基酸合成最后一步反应的关键酶。研究大豆GmBCAT的生物学功能,为... 【目的】支链氨基酸(branched-chain amino acids,BCAAs)是植物在干旱胁迫下积累的主要代谢物,支链氨基酸转氨酶(branched-chain amino acid transaminase,BCAT)是支链氨基酸合成最后一步反应的关键酶。研究大豆GmBCAT的生物学功能,为大豆及其他作物抗旱遗传改良奠定理论基础,亦为培育优异抗逆性能的大豆新种质提供科学参考。【方法】从大豆全基因组鉴定GmBCAT基因家族成员,并预测GmBCAT蛋白亚细胞定位,通过烟草遗传转化研究GmBCAT3在BCAA合成积累及干旱胁迫应答中的功能。【结果】从大豆基因组中共鉴定到10个GmBCATs基因,同一类群GmBCAT成员具有相似的保守结构域及基因结构;GmBCATs启动子含有多种与植物生长发育及非生物胁迫相关的顺式元件;RT-qPCR分析发现,GmBCATs在大豆不同组织及种子不同发育时期差异表达,GmBCAT2和GmBCAT3在根和叶中表达水平显著高于其他组织;干旱胁迫处理后,大豆幼苗GmBCAT3表达量最高。亚细胞定位结果表明,GmBCAT3蛋白定位在叶绿体。烟草遗传转化显示,正常条件下,GmBCAT3转基因烟草缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸含量分别增加37.48%、63.46%和72.62%。干旱胁迫下,转基因烟草亮氨酸含量增加57.42%,而缬氨酸和异亮氨酸含量分别增加2.00和1.90倍;同时,转基因烟草脯氨酸含量增加3.40倍,丙二醛含量降低23.01%,SOD和POD活性分别升高72.33%和74.91%;过表达GmBCAT3烟草影响了BCAAs代谢相关基因的表达。【结论】大豆GmBCAT3异源过表达显著提高转基因烟草BCAAs含量,提高植株耐旱性。 展开更多
关键词 大豆 支链氨基酸转氨酶 基因组鉴定 表达分析 干旱胁迫应答 烟草遗传转化
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