目的:研究脑痰清(Nao Tan Qing,NTQ)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠中神经干细胞增殖的影响,并探究其分子机制。方法:将五转家族性阿尔茨海默病模型小鼠(transgenic mice with five familial Alzheimer’s disease,5×...目的:研究脑痰清(Nao Tan Qing,NTQ)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠中神经干细胞增殖的影响,并探究其分子机制。方法:将五转家族性阿尔茨海默病模型小鼠(transgenic mice with five familial Alzheimer’s disease,5×FAD小鼠)随机分为两组:AD组、AD+NTQ组,分别使用去离子水或NTQ灌胃处理;利用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法等检测海马区神经干细胞增殖情况;体外分离培养C57/BL6J小鼠胚胎神经干细胞,分别使用PBS、NTQ处理细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖情况,TUNEL检测细胞凋亡,使用免疫荧光染色检测Y染色体性别决定区(sex-determing region of Y chromosome,SRY)盒转录因子2(SRY-box transcription factor 2,SOX2)阳性、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxy uridine,BrdU)阳性及双皮质素(doublecortin,DCX)阳性细胞,通过实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测SOX2、DCX表达。利用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测cyclin D1、p27/Kip1及GATA2的表达情况;使用cyclin D1-细胞周期依赖性蛋白激酶(cyclin-depen-dent kinase,CDK)抑制剂体外处理神经干细胞后,通过实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测SOX2表达水平。结果:与AD组相比,AD+NTQ组小鼠海马区SOX2+细胞数量增多、SOX2 mRNA及蛋白水平显著增加;NTQ处理神经干细胞后,神经球直径显著增加,BrdU+、SOX2+及DCX+细胞数目增加,SOX2、DCX mRNA水平增加,SOX2蛋白水平显著增加。AD+NTQ组小鼠海马区GATA2及下游分子p27/Kip1表达下降,对cyclin D1的抑制作用减弱,使细胞发生增殖。添加cyclin D1-CDK抑制剂可减弱NTQ所引发的SOX2、DCX表达量增加。结论:NTQ通过调控GATA2-p27/Kip1-cyclin D1信号通路,维持神经干细胞增殖,改善AD小鼠认知障碍。展开更多
目的构建环状RNA(circRNA)-微小RNA(miRNA)-信使RNA(mRNA)竞争性内源RNA(ceRNA)网络,探讨其在刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎(AIH)小鼠模型中的潜在调控机制,并验证关键基因的表达与肝损伤的关系。方法使用高通量数据筛选差异表达的circ...目的构建环状RNA(circRNA)-微小RNA(miRNA)-信使RNA(mRNA)竞争性内源RNA(ceRNA)网络,探讨其在刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎(AIH)小鼠模型中的潜在调控机制,并验证关键基因的表达与肝损伤的关系。方法使用高通量数据筛选差异表达的circRNA、miRNA和mRNA,基于Pearson相关分析和Miranda程序预测miRNA与mRNA及circRNA的配对关系,构建ceRNA网络。对网络中的差异表达基因进行GO和KEGG富集分析。选取SPF级雄性C57BL/6小鼠12只,采用随机数字表法分为对照组和模型组,每组6只,模型组通过尾静脉注射刀豆蛋白A构建AIH小鼠模型,对照组注射生理盐水。通过qRT-PCR和Western Blot方法验证circ_0001577、miR-7055-3p和Akt3的表达。测定血清转氨酶(ALT、AST)和肝组织中丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量,并分析其与基因表达的相关性。计量资料两组间比较采用成组t检验。使用Spearman相关分析法分析基因表达与肝损伤指标之间的相关性。结果构建了包含5795个circRNAmiRNA-mRNA配对的ceRNA网络,发现circ_0001577为中心基因。与对照组小鼠比较,模型组中的circ_0001577和Akt3表达上调,miR-7055-3p下调,差异均有统计学意义(P值均<0.05),且circ_0001577与Akt3呈正相关(r=0.861,P<0.001),miR-7055-3p与两者呈负相关(r值分别为−0.644、−0.855,P值均<0.05)。模型组小鼠肝脏Akt3蛋白表达显著高于对照组(1.04±0.10 vs 0.72±0.06,t=−6.49,P=0.001),并与circ_0001577呈正相关(r=0.579,P=0.048),与miR-7055-3p呈负相关(r=−0.891,P<0.001)。模型组小鼠血清ALT、AST和肝组织MDA、NO含量较对照组均显著增加(P值均<0.05),上述肝损伤指标与circ_0001577、Akt3呈正相关(r值分别为0.849、0.865、0.811、0.801;0.889、0.954、0.938、0.961,P值均<0.05),与miR-7055-3p呈负相关(r值分别为−0.687、−0.818、−0.833、−0.870,P值均<0.05),且与Akt蛋白表达呈正相关(r值分别为0.648、0.796、0.848、0.860,P值均<0.05)。结论circ_0001577通过竞争性吸附miR-7055-3p,导致Akt3抑制被解除,进而促进Akt3的表达,参与AIH的发生发展。circ_0001577及其相关通路可能成为AIH的潜在治疗靶点。展开更多
文摘目的:研究脑痰清(Nao Tan Qing,NTQ)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠中神经干细胞增殖的影响,并探究其分子机制。方法:将五转家族性阿尔茨海默病模型小鼠(transgenic mice with five familial Alzheimer’s disease,5×FAD小鼠)随机分为两组:AD组、AD+NTQ组,分别使用去离子水或NTQ灌胃处理;利用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法等检测海马区神经干细胞增殖情况;体外分离培养C57/BL6J小鼠胚胎神经干细胞,分别使用PBS、NTQ处理细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖情况,TUNEL检测细胞凋亡,使用免疫荧光染色检测Y染色体性别决定区(sex-determing region of Y chromosome,SRY)盒转录因子2(SRY-box transcription factor 2,SOX2)阳性、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxy uridine,BrdU)阳性及双皮质素(doublecortin,DCX)阳性细胞,通过实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测SOX2、DCX表达。利用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测cyclin D1、p27/Kip1及GATA2的表达情况;使用cyclin D1-细胞周期依赖性蛋白激酶(cyclin-depen-dent kinase,CDK)抑制剂体外处理神经干细胞后,通过实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测SOX2表达水平。结果:与AD组相比,AD+NTQ组小鼠海马区SOX2+细胞数量增多、SOX2 mRNA及蛋白水平显著增加;NTQ处理神经干细胞后,神经球直径显著增加,BrdU+、SOX2+及DCX+细胞数目增加,SOX2、DCX mRNA水平增加,SOX2蛋白水平显著增加。AD+NTQ组小鼠海马区GATA2及下游分子p27/Kip1表达下降,对cyclin D1的抑制作用减弱,使细胞发生增殖。添加cyclin D1-CDK抑制剂可减弱NTQ所引发的SOX2、DCX表达量增加。结论:NTQ通过调控GATA2-p27/Kip1-cyclin D1信号通路,维持神经干细胞增殖,改善AD小鼠认知障碍。
文摘目的构建环状RNA(circRNA)-微小RNA(miRNA)-信使RNA(mRNA)竞争性内源RNA(ceRNA)网络,探讨其在刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎(AIH)小鼠模型中的潜在调控机制,并验证关键基因的表达与肝损伤的关系。方法使用高通量数据筛选差异表达的circRNA、miRNA和mRNA,基于Pearson相关分析和Miranda程序预测miRNA与mRNA及circRNA的配对关系,构建ceRNA网络。对网络中的差异表达基因进行GO和KEGG富集分析。选取SPF级雄性C57BL/6小鼠12只,采用随机数字表法分为对照组和模型组,每组6只,模型组通过尾静脉注射刀豆蛋白A构建AIH小鼠模型,对照组注射生理盐水。通过qRT-PCR和Western Blot方法验证circ_0001577、miR-7055-3p和Akt3的表达。测定血清转氨酶(ALT、AST)和肝组织中丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量,并分析其与基因表达的相关性。计量资料两组间比较采用成组t检验。使用Spearman相关分析法分析基因表达与肝损伤指标之间的相关性。结果构建了包含5795个circRNAmiRNA-mRNA配对的ceRNA网络,发现circ_0001577为中心基因。与对照组小鼠比较,模型组中的circ_0001577和Akt3表达上调,miR-7055-3p下调,差异均有统计学意义(P值均<0.05),且circ_0001577与Akt3呈正相关(r=0.861,P<0.001),miR-7055-3p与两者呈负相关(r值分别为−0.644、−0.855,P值均<0.05)。模型组小鼠肝脏Akt3蛋白表达显著高于对照组(1.04±0.10 vs 0.72±0.06,t=−6.49,P=0.001),并与circ_0001577呈正相关(r=0.579,P=0.048),与miR-7055-3p呈负相关(r=−0.891,P<0.001)。模型组小鼠血清ALT、AST和肝组织MDA、NO含量较对照组均显著增加(P值均<0.05),上述肝损伤指标与circ_0001577、Akt3呈正相关(r值分别为0.849、0.865、0.811、0.801;0.889、0.954、0.938、0.961,P值均<0.05),与miR-7055-3p呈负相关(r值分别为−0.687、−0.818、−0.833、−0.870,P值均<0.05),且与Akt蛋白表达呈正相关(r值分别为0.648、0.796、0.848、0.860,P值均<0.05)。结论circ_0001577通过竞争性吸附miR-7055-3p,导致Akt3抑制被解除,进而促进Akt3的表达,参与AIH的发生发展。circ_0001577及其相关通路可能成为AIH的潜在治疗靶点。
