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LncRNA SNHG12与EPHB 3竞争性结合miR-326促进乳腺癌的进展
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作者 李勇 全翊宁 +2 位作者 王坤 李洪利 尹崇高 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第9期1310-1319,共10页
乳腺癌(breast cancer,BRCA)的高转移与复发率使其成为全球癌症相关死亡的主要原因之一,探索其分子机制就显得尤为重要。课题组前期研究已证明,miR-326调控EPHB 3抑制BRCA细胞的进展。本研究进一步探讨LncRNA通过竞争性内源RNA(competin... 乳腺癌(breast cancer,BRCA)的高转移与复发率使其成为全球癌症相关死亡的主要原因之一,探索其分子机制就显得尤为重要。课题组前期研究已证明,miR-326调控EPHB 3抑制BRCA细胞的进展。本研究进一步探讨LncRNA通过竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)机制与EPHB 3竞争性结合miR-326影响BRCA进展的分子机制。通过生物信息学分析筛选出与miR-326具有潜在结合位点的LncRNA SNHG12,结果显示,SNHG12在BRCA组织中显著高表达,且与miR-326之间存在表达水平的负相关趋势,与EPHB3之间存在正相关趋势,提示其可能参与ceRNA调控网络。核质分离实验表明,SNHG12主要定位于胞质,双荧光素酶报告实验验证了其可直接结合miR-326。功能实验表明,敲低SNHG12可显著抑制BRCA细胞的增殖、侵袭与迁移;而抑制miR-326则会逆转此效应。此外,生物素标记的miRNA下拉检测结果显示,SNHG12和EPHB3在miR-326的下拉产物中显著富集,提示二者可与miR-326直接结合。Western印迹和挽救实验表明,SNHG12通过吸附miR-326解除其对EPHB 3的抑制作用,进而上调EPHB 3表达,促进BRCA细胞的增殖、侵袭与迁移能力。综上,本研究首次阐明LncRNA SNHG12通过ceRNA机制调控miR-326/EPHB3轴在BRCA中发挥促癌作用。提示SNHG12/miR-326/EPHB 3通路可能成为BRCA分子诊断与靶向治疗的潜在新靶点。 展开更多
关键词 乳腺癌 长非编码RNA SNHG12 miR-326 EPH受体B3 竞争性内源性RNA 侵袭 迁移
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miR-185-5p靶向负调控TM9SF1对肺腺癌细胞增殖、迁移和自噬能力的影响
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作者 王晓娜 龚秀莹 +5 位作者 赵苗苗 刘清华 李勇 王坤 尹崇高 李洪利 《解放军医学杂志》 北大核心 2025年第5期566-574,共9页
目的 探讨miR-185-5p靶向负调控跨膜9超家族蛋白1(TM9SF1)对肺腺癌细胞增殖、迁移和自噬能力的影响。方法 在基因表达综合数据库(GEO)中下载数据集GSE51853,分析miR-185-5p在肺腺癌组织中的表达情况。采用在线数据库miRTargetLink、miRT... 目的 探讨miR-185-5p靶向负调控跨膜9超家族蛋白1(TM9SF1)对肺腺癌细胞增殖、迁移和自噬能力的影响。方法 在基因表达综合数据库(GEO)中下载数据集GSE51853,分析miR-185-5p在肺腺癌组织中的表达情况。采用在线数据库miRTargetLink、miRTarbase和DIANA-microT-CD预测miR-185-5p靶向结合的蛋白,使用HADb网站下载自噬相关蛋白,将4个数据库所得结果取交集,通过StarBase数据库分析交集结果VEGFA和TM9SF1的生存曲线。分别将TM9SF13'UTR(WT)或TM9SF1 3'UTR(MUT)报告质粒与miR-185-5p对照质粒(CON)或miR-185-5p过表达质粒(over-miR-185-5p)共转染HEK-293T细胞,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-185-5p与TM9SF1的结合位点及荧光素酶活性。采用Western blotting检测转染miR-185-5p过表达质粒后A549细胞中TM9SF1蛋白的表达情况。将A549细胞分为3组:(1)CON+NC组,转染miR-185-5p对照质粒和TM9SF1对照质粒;(2)over-miR-185-5p+NC组,转染miR-185-5p过表达质粒和TM9SF1对照质粒;(3)over-miR-185-5p+over-TM9SF1组,转染miR-185-5p过表达质粒和TM9SF1过表达质粒。采用EdU细胞增殖实验、划痕实验和Transwell迁移实验验证miR-185-5p靶向结合TM9SF1对肺腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。分别采用stubRFPsensGFP-LC3自噬流检测慢病毒和JC-1实验检测肺腺癌细胞自噬流和线粒体膜电位(MMP)的改变。结果 GSE51853数据集中,miR-185-5p在肺腺癌组织中的表达水平明显低于正常肺组织(P<0.01);qRT-PCR检测结果显示,miR-185-5p在肺腺癌细胞NCI-H1299、A549中的表达水平低于正常肺上皮细胞BEAS-2B(P<0.01)。在线数据库miRTargetLink、miRTarbase、DIANA-microT-CD和HADb预测结果显示,miR-185-5p可靶向调控自噬相关蛋白TM9SF1。双荧光素酶报告基因实验和Western blotting检测结果分别显示,miR-185-5p可直接与TM9SF1 mRNA的3'UTR区结合,过表达miR-185-5p后靶蛋白TM9SF1的表达水平降低(P<0.05)。EdU细胞增殖实验、划痕实验和Transwell迁移实验结果显示,过表达miR-185-5p可抑制肺腺癌细胞的增殖和迁移能力,过表达TM9SF1能够削弱miR-185-5p对肺腺癌细胞增殖、迁移能力的抑制作用(P<0.05)。stub RFP-sens GFP-LC3自噬流检测慢病毒结果显示,过表达mi R-185-5p后A549细胞中自噬流加快,而同时过表达mi R-185-5p和TM9SF1后A549细胞中自噬流减慢;JC-1实验结果显示,过表达miR-185-5p后A549细胞中MMP水平降低,同时过表达miR-185-5p和TM9SF1后A549细胞中MMP水平升高。结论 miR-185-5p可能通过靶向负调控TM9SF1的表达影响肺腺癌细胞的增殖、迁移和自噬能力。 展开更多
关键词 肺腺癌 miR-185-5p TM9SF1 增殖 迁移 自噬
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miR-485-5p靶向RAPTOR影响口腔鳞状细胞癌迁移、侵袭和增殖
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作者 陈嘉雯 丁啸 +4 位作者 栾可峰 王高君 李洪利 胡温庭 孙学辉 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期429-435,共7页
目的:探讨mTOR调节相关蛋白(regulatory-associated protein of mTOR,RAPTOR)对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)迁移、侵袭和增殖能力的影响。方法:利用TCGA生物信息数据库查询在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squ... 目的:探讨mTOR调节相关蛋白(regulatory-associated protein of mTOR,RAPTOR)对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)迁移、侵袭和增殖能力的影响。方法:利用TCGA生物信息数据库查询在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)组织与癌旁组织中差异表达的mRNA。Western blot检测RAPTOR在人口腔上皮细胞HOEC和OSCC细胞系中的表达。利用伤口愈合实验、Transwell实验、EdU实验检测各组细胞迁移、侵袭及增殖能力。生物信息学网站预测与RAPTOR靶向结合的微小RNA(microRNA,miR)。功能学实验验证miR-485-5p是否可以靶向RAPTOR影响OSCC细胞的迁移、侵袭和增殖。结果:RAPTOR在HNSCC组织中较癌旁组织表达增高。伤口愈合、Transwell和EdU实验结果示,RAPTOR有促进OSCC细胞的迁移、侵袭和增殖能力。miR-485-5p能与RAPTOR靶向结合,且miR-485-5p上调能逆转RAPTOR促进CAL27细胞迁移、侵袭和增殖能力。结论:miR-485-5p通过靶向RAPTOR抑制OSCC细胞迁移、侵袭和增殖能力。 展开更多
关键词 mTOR调节相关蛋白 微小RNA-485-5p 口腔鳞状细胞癌 迁移 侵袭 增殖
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