线粒体功能障碍参与动脉粥样硬化的分子机制 被引量：12

1

作者 司艳红 陈晓凤 秦树存 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期897-903,共7页

以往认为,线粒体的主要功能是提供能量,目前发现线粒体还是调节细胞氧化应激与凋亡的关键部位,并且与毗邻的细胞器内质网保持密切联系.线粒体功能障碍时,可通过加重机体氧化应激、炎症反应、细胞凋亡及胆固醇蓄积等病理过程,影响动脉粥... 以往认为,线粒体的主要功能是提供能量,目前发现线粒体还是调节细胞氧化应激与凋亡的关键部位,并且与毗邻的细胞器内质网保持密切联系.线粒体功能障碍时,可通过加重机体氧化应激、炎症反应、细胞凋亡及胆固醇蓄积等病理过程,影响动脉粥样硬化(AS)的发生发展.本综述首先简单介绍了线粒体的基本功能,然后重点分析线粒体功能障碍时,参与AS的最新证据及其分子机制.此方面研究提示,线粒体可能是AS的潜在治疗靶点. 展开更多

关键词 线粒体功能障碍 动脉粥样硬化 氧化应激 凋亡

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内质网应激在动脉粥样硬化发生、发展和防治中的作用 被引量：33

2

作者 姚树桐 秦树存 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期364-368,384,共6页

内质网（endoplasmic reticulum，ER）是真核细胞内蛋白合成、折叠修饰及转运的重要细胞器和钙离子储存库，并与脂质合成和氧化还原平衡的维持密切相关。ER对多种刺激非常敏感，例如氧化应激、钙稳态失衡、胆固醇超负荷和糖基化改变等... 内质网（endoplasmic reticulum，ER）是真核细胞内蛋白合成、折叠修饰及转运的重要细胞器和钙离子储存库，并与脂质合成和氧化还原平衡的维持密切相关。ER对多种刺激非常敏感，例如氧化应激、钙稳态失衡、胆固醇超负荷和糖基化改变等理化环境变化均可导致ER的功能紊乱，出现以未折叠和／或错误折叠蛋白积聚以及钙稳态失衡为主要特征的内质网应激（ER stress，ERS）反应。 展开更多

关键词 内质网应激 细胞凋亡 动脉粥样硬化 治疗靶点

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Wnt/β-catenin通路在动脉粥样硬化发生发展中的作用 被引量：7

3

作者 马守原 姚树桐 +1 位作者 朱平 秦树存 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期564-568,共5页

动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）作为心血管疾病（cardiovascular disease,CVD）的主要病理基础,严重危害人们的健康~[1]。AS是多因素、多发病环节参与的慢性炎症性疾病,内皮损伤和功能减退是其发生的启动环节,炎症细胞浸润和炎症... 动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）作为心血管疾病（cardiovascular disease,CVD）的主要病理基础,严重危害人们的健康~[1]。AS是多因素、多发病环节参与的慢性炎症性疾病,内皮损伤和功能减退是其发生的启动环节,炎症细胞浸润和炎症介质释放、氧化应激反应、血管平滑肌细胞增殖以及泡沫细胞形成和死亡是AS发生发展的关键机制。 展开更多

关键词 WNT/Β-CATENIN信号通路 动脉粥样硬化

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动脉粥样硬化组织冷冻切片的染色技术 被引量：1

4

作者 宋光乐 郭守东 +2 位作者 黄慧慧 朱霞 隋宏书 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1168-1169,共2页

本实验室在辅助科研工作中制作大量动脉粥样硬化的实验动物模型,在实践中摸索出HE染色和油红O染色两种技术的优化制片方法。同时应用新型实用专利封片剂(已经申请专利保护),不再使用传统明胶甘油封片,改进封片技术不但使病理切片色泽艳... 本实验室在辅助科研工作中制作大量动脉粥样硬化的实验动物模型,在实践中摸索出HE染色和油红O染色两种技术的优化制片方法。同时应用新型实用专利封片剂(已经申请专利保护),不再使用传统明胶甘油封片,改进封片技术不但使病理切片色泽艳丽,而且可以在室温下长期保存不再褪色。笔者用该方法制作切片标本长达2年,室温保存至今未褪色,现结合实践工作介绍如下。 展开更多

关键词 动脉粥样硬化 冷冻切片 油红O染色

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高密度脂蛋白抗动脉粥样硬化的新机制：调节造血干/祖细胞的功能

5

作者 展恩欣 杨娜娜 秦树存 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期455-460,共6页

高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)血浆水平与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)性心血管疾病呈负相关,成为抗AS的重要靶点和热点.然而,近年来多个临床试验未能证明升高血浆HDL的水平对心血管的保护作用,使得人们开始重新审视... 高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)血浆水平与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)性心血管疾病呈负相关,成为抗AS的重要靶点和热点.然而,近年来多个临床试验未能证明升高血浆HDL的水平对心血管的保护作用,使得人们开始重新审视HDL抗AS功能生物学特性的复杂性.近5年来的研究发现,HDL可通过对造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)和内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能的调节发挥抗AS的作用,本文就这一新机制进行综述,期待为HDL迄今尚不完全清楚的复杂心血管保护机制提供研究思路. 展开更多

关键词 高密度脂蛋白 动脉粥样硬化 造血干细胞 内皮祖细胞

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吡格列酮联合瑞舒伐他汀钙对2型糖尿病患者高密度脂蛋白的干预效应 被引量：13

6

作者 陈晓凤 司艳红 +4 位作者 吕小红 于爱玲 董蓉蓉 薛雅卓 秦树存 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期452-458,共7页

动脉粥样硬化性心血管疾病是糖尿病最常见的并发症,而患者高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)水平和功能是影响AS发生发展的重要指标之一。本文旨在探讨吡格列酮与瑞舒伐他汀钙联合治疗对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T... 动脉粥样硬化性心血管疾病是糖尿病最常见的并发症,而患者高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)水平和功能是影响AS发生发展的重要指标之一。本文旨在探讨吡格列酮与瑞舒伐他汀钙联合治疗对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者HDL的改善作用,以期在临床上预测该治疗措施对糖尿病并发症的防治效果。将70例T2DM患者,按年龄、性别、病情、药物基本匹配的原则,分为对照组和吡格列酮组,每组35人,两组患者除常规使用胰岛素降糖治疗外,对照组给予瑞舒伐他汀钙片,吡格列酮组给予瑞舒伐他汀钙片及盐酸吡格列酮片,治疗3个月后临床观察患者空腹血糖(fasting blood sugar,FPG)、餐后血糖(post-prandial glycaemia,PPG)、糖化血红蛋白(glycated hemoglobin,Hb A1c)、甘油三酯(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)水平,同时提取患者HDL,检测不同药物治疗对HDL功能的改善效果。与治疗前相比,吡格列酮组患者FPG、PPG、Hb A1c、TC、TG及LDL-C均明显下降,HDLC水平明显升高;治疗后组间比较显示:与对照组相比,吡格列酮干预后患者HDL-C水平升高10.67%。HDL功能检测显示:药物治疗3月后,与对照组相比,吡格列酮组患者HDL介导细胞胆固醇外排效率增加25%,并使细胞内相关转运蛋白ATP结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)表达增加;同时,吡格列酮组患者HDL抗巨噬细胞凋亡功能亦明显提高。在2型糖尿病治疗中,吡格列酮联合瑞舒伐他汀钙不仅可以稳定血糖、血脂水平,而且可以升高HDL水平,改善HDL的功能,对于延缓T2DM患者出现心血管并发症具有重要意义。 展开更多

关键词 2型糖尿病 吡格列酮 瑞舒伐他汀钙 高密度脂蛋白

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南蛇藤中齐墩果酸和熊果酸的提取工艺优化及毛细管电泳检测其含量分布 被引量：7

7

作者 张颖 崔英杰 +2 位作者 郭守东 司艳红 秦树存 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第22期66-71,共6页

利用响应曲面法优化南蛇藤中齐墩果酸(OA)和熊果酸(UA)的超声提取工艺-联用,建立毛细管电泳技术测定两化合物在南蛇藤不同部位中的分布。结果显示,齐墩果酸和熊果酸的最佳提取条件为采用80%甲醇,料液比20mL·g-1,超声提取时间为50mi... 利用响应曲面法优化南蛇藤中齐墩果酸(OA)和熊果酸(UA)的超声提取工艺-联用,建立毛细管电泳技术测定两化合物在南蛇藤不同部位中的分布。结果显示,齐墩果酸和熊果酸的最佳提取条件为采用80%甲醇,料液比20mL·g-1,超声提取时间为50min。齐墩果酸在根、茎、皮、叶中的含量分别为0.2561、0.6748、0.5190、0.1832mg·g-1,熊果酸在根、茎、皮、叶中的含量分别为0.3720、0.1558、0.1097、0.0677mg·g-1。结果表明,南蛇藤因用药部位不同各化学成分存在显著差异,响应曲面优化物质提取工艺具有简便、高效、节约试剂等优点,毛细管电泳技术是一种线性关系好、精密度高、准确、快速测定物质含量的简便方法。该研究为进一步开发南蛇藤的用药资源提供了理论依据。 展开更多

关键词 南蛇藤 超声提取 毛细管电泳 齐墩果酸 熊果酸 响应曲面法

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蜂胶醇提物通过抑制caspase-12减轻氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡 被引量：10

8

作者 李严严 徐晓燕 +6 位作者 张家君 方永奇 田华 焦鹏 桑慧 秦树存 姚树桐 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2202-2208,共7页

目的:研究蜂胶醇取物(ethanol extract of propolis,EEP)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的巨噬细胞凋亡的抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予EEP(7.5、15和30 mg/L)... 目的:研究蜂胶醇取物(ethanol extract of propolis,EEP)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的巨噬细胞凋亡的抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予EEP(7.5、15和30 mg/L)、4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA;5 mmol/L)或二亚苯基碘鎓(diphenyleneiodonium,DPI;5μmol/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)或衣霉素(tunicamycin,TM;4 mg/L)继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC双染法检测细胞活力和凋亡情况;试剂盒测定细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平。采用免疫印迹技术检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径关键蛋白caspase-12的表达变化。结果:与ERS抑制剂PBA相似,EEP呈剂量依赖性减轻ox-LDL所致的巨噬细胞损伤,表现为细胞活力增加(P<0.01),凋亡率降低(P<0.05),且可抑制ERS诱导剂TM所引起的巨噬细胞活力下降和凋亡(P<0.05);与氧化应激抑制剂DPI相似,EEP可抑制ox-LDL诱导的氧化应激反应,表现为ROS和MDA生成减少(P<0.01),SOD活性增加(P<0.05);EEP显著抑制ox-LDL和TM所诱导的caspase-12活化(P<0.05);与ox-LDL组比较,PBA和DPI预处理组caspase-12活性也受到明显抑制(P<0.01)。结论:EEP可减轻ox-LDL所诱导的RAW264.7巨噬细胞凋亡,其机制可能与抑制氧化应激和caspase-12活化有关。 展开更多

关键词 蜂胶醇取物 半胱天冬酶12 氧化低密度脂蛋白 巨噬细胞 细胞凋亡

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氧化低密度脂蛋白通过CD36介导的氧化应激诱导巨噬细胞自噬 被引量：9

9

作者 姚树桐 李严严 +5 位作者 刘庆华 岳峰 田华 桑慧 杨娜娜 秦树存 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1002-1007,共6页

目的:研究氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)对巨噬细胞自噬的诱导作用,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予抗CD36单克隆抗体(2 mg/L)、二亚苯基碘鎓(diphenyleneiodonium,DPI;5μmol... 目的:研究氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)对巨噬细胞自噬的诱导作用,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予抗CD36单克隆抗体(2 mg/L)、二亚苯基碘鎓(diphenyleneiodonium,DPI;5μmol/L)、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA;3 mmol/L)或雷帕霉素(1μmol/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)继续培养12 h。采用MTT法检测细胞活力,采用相应试剂盒测定培养液乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性以及活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,以评价细胞膜完整性和氧化应激反应。采用免疫印迹技术检测自噬标志分子beclin-1和微管相关蛋白1轻链3-II(microtubule-associated protein 1 light chain 3-II,LC3-II)表达变化。结果:ox-LDL诱导巨噬细胞自噬反应,表现为beclin-1和LC3-II上调;与自噬抑制剂3-MA相似,抗CD36单抗可显著抑制ox-LDL所诱导的LC3-II和beclin-1表达。抗CD36单抗明显抑制ox-LDL所诱导的氧化应激,包括抑制NADPH氧化酶活性和ROS、MDA水平以及升高SOD活性,其作用与NADPH氧化酶抑制剂DPI相似。另外,DPI显著抑制ox-LDL所诱导的beclin-1和LC3-II表达,且ox-LDL所诱导的细胞活力降低和LDH漏出可被3-MA促进并可被自噬诱导剂雷帕霉素拮抗。结论:ox-LDL可诱导巨噬细胞自噬,其机制可能与CD36介导ox-LDL摄取进而触发的氧化应激有关,且一定程度的自噬可减轻ox-LDL所诱导的巨噬细胞损伤。 展开更多

关键词 自噬 氧化低密度脂蛋白 CD36 氧化应激 巨噬细胞

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载脂蛋白A-I模拟肽D4F通过抑制caspase-12减轻氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡 被引量：6

10

作者 田华 李严严 +6 位作者 丁明德 杨娜娜 焦鹏 桑慧 方永奇 姚树桐 秦树存 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1750-1755,共6页

目的:探讨载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I,Apo A-I)模拟肽D4F对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的巨噬细胞凋亡和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径关键分子caspase-12的影响,并... 目的:探讨载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I,Apo A-I)模拟肽D4F对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的巨噬细胞凋亡和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径关键分子caspase-12的影响,并阐明其可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予12.5、25和50 mg/L D4F、5 mmol/L ERS抑制剂4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA)或5μmol/L二亚苯基碘鎓(diphenyleneiodonium,DPI)预处理1 h后,再加入100 mg/L ox-LDL或4 mg/L ERS诱导剂衣霉素(tunicamycin,TM)继续培养24 h。MTT法检测细胞活力;TUNEL法检测细胞凋亡情况;试剂盒测定细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶活性;Western blot法检测caspase-12的表达变化。结果:与ERS抑制剂PBA相似,D4F可抑制ox-LDL或TM所致的巨噬细胞活力降低和凋亡,且呈浓度依赖性(P<0.05)。与氧化应激抑制剂DPI相似,D4F显著抑制ox-LDL诱导的氧化应激反应,表现为ROS和MDA生成减少(P<0.01)、SOD活性增加以及NADPH氧化酶活性降低(P<0.05);与PBA和DPI相似,D4F可减轻ox-LDL诱导的巨噬细胞caspase-12活化,且呈浓度依赖性(P<0.05);另外,D4F还可抑制TM诱导的caspase-12活化(P<0.05)。结论:D4F能够抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡,其机制至少部分是通过减轻氧化应激继而抑制caspase-12活化实现的。 展开更多

关键词 载脂蛋白A-I模拟肽D4F CASPASE-12 氧化低密度脂蛋白 巨噬细胞 细胞凋亡

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载脂蛋白A-I模拟肽D-4F对巨噬细胞源性泡沫细胞清道夫受体A1的抑制作用 被引量：7

11

作者 赵莉 姚树桐 +8 位作者 陈军 苗成 李严严 田华 周健 翟雷 桑慧 王义围 秦树存 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1742-1747,共6页

目的:研究载脂蛋白A-I模拟肽D-4F对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,oxLDL)所诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞清道夫受体A1(scavenger receptor A1,SR-A1)的抑制作用及其机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予不同... 目的:研究载脂蛋白A-I模拟肽D-4F对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,oxLDL)所诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞清道夫受体A1(scavenger receptor A1,SR-A1)的抑制作用及其机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予不同浓度的D-4F(12.5、25和50 mg/L)、紊乱模拟肽sD-4F(50 mmol/L)处理1h或者5 mmol/L内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)抑制剂4-苯丁酸处理30 min后,再加入ox-LDL(100 mg/L)继续培养12 h。另外培养巨噬细胞给予50 mg/L D-4F或sD-4F处理1 h,再加入2 mg/L ERS诱导剂衣霉素(tunicamycin,TM)处理4 h。MTT法检测细胞活力;试剂盒检测细胞内总胆固醇含量;分别采用免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)技术检测SR-A1和ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)蛋白和mRNA表达变化;采用多功能酶标仪检测DiI-ox-LDL摄取情况。结果:D-4F明显减轻ox-LDL所诱导的巨噬细胞损伤和细胞内的胆固醇蓄积。ox-LDL可显著上调SR-A1和GRP78表达,而D-4F对上述变化具有明显抑制作用,且呈浓度依赖性。D-4F显著抑制TM所诱导的SR-A1和GRP78蛋白水平以及巨噬细胞对ox-LDL的摄取。结论:D-4F可通过抑制SR-A1表达减轻ox-LDL所诱导的巨噬细胞内胆固醇蓄积和细胞损伤,其机制可能与抑制GRP78介导的ERS信号途径有关。 展开更多

关键词 动脉粥样硬化 载脂蛋白A-I模拟肽 内质网应激 清道夫受体A1 泡沫细胞

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氢分子通过激活自噬抑制C/EBP同源蛋白介导的巨噬细胞凋亡 被引量：5

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作者 田华 高聪聪 +6 位作者 郑冠琳 姚来彬 焦鹏 杨娜娜 孔雅茹 姚树桐 秦树存 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1368-1375,共8页

目的:研究氢分子对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导巨噬细胞凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养鼠源RAW264.7巨噬细胞,处理前更换为饱和含氢培养基,分别给予3-甲基腺嘌呤(3-methyladenin... 目的:研究氢分子对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导巨噬细胞凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养鼠源RAW264.7巨噬细胞,处理前更换为饱和含氢培养基,分别给予3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA;5 mmol/L)和雷帕霉素(rapamycin,Rap;3μmol/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC双染法检测细胞活力和凋亡情况,试剂盒测定培养基中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,Western blot法检测自噬标志分子beclin-1和内质网应激相关促凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)表达的变化,激光共聚焦显微镜观测细胞内微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达变化。结果:氢分子显著抑制ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞活力降低、LDH漏出增加、细胞凋亡及CHOP表达上调;ox-LDL诱导巨噬细胞自噬反应,表现为beclin-1表达上调,LC3颗粒化聚集,而氢分子可进一步促进ox-LDL对细胞自噬的诱导作用,且氢分子的这种促进作用可被自噬抑制剂3-MA拮抗,而被自噬诱导剂Rap增强(P<0.01)。另外,氢分子对ox-LDL所致的巨噬细胞凋亡、细胞活力降低及CHOP上调的抑制作用也可被3-MA拮抗,而被Rap促进。在体外培养的人源THP-1巨噬细胞中也观察到类似的结果,即氢分子不仅可抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡和CHOP上调,也可使beclin-1表达进一步上调(P<0.01)。结论:氢分子可通过下调CHOP表达抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡,其上游机制可能是通过激活自噬实现的。 展开更多

关键词 氢分子 C/EBP同源蛋白 细胞自噬 氧化型低密度脂蛋白 巨噬细胞 细胞凋亡

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自噬通过抑制C/EBP同源蛋白表达减轻氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡 被引量：6

13

作者 田华 马守原 +6 位作者 康攀攀 郝奇 焦鹏 邵夏炎 徐晓燕 秦树存 姚树桐 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2192-2198,共7页

目的:研究自噬对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)所致巨噬细胞凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,分别给予3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA;3 mmol/L)、雷帕霉素(rapamyci... 目的:研究自噬对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)所致巨噬细胞凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,分别给予3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA;3 mmol/L)、雷帕霉素(rapamycin,Rap;1μmol/L)或4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA;4 mmol/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)继续培养12 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC双染法检测细胞活力和凋亡情况;相应试剂盒测定培养液乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)和细胞内caspase-3活性;采用Western blot法检测自噬标志分子beclin-1和内质网应激标志分子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)及促凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)表达的变化;采用激光共聚焦显微镜观测细胞内微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的变化。结果:ox-LDL处理可显著降低巨噬细胞活力,并增加LDH漏出、凋亡率及caspase-3活性;ox-LDL对细胞的上述损伤作用可被自噬抑制剂3-MA促进而被自噬诱导剂雷帕霉素拮抗。ox-LDL诱导巨噬细胞自噬反应,表现为beclin-1表达上调,LC3颗粒化显著;ox-LDL对自噬的诱导作用可被3-MA抑制而被Rap增强。另外,3-MA可促进ox-LDL所诱导的CHOP进一步上调,而Rap可明显拮抗ox-LDL对CHOP的诱导作用。PBA可显著抑制ox-LDL所诱导的GRP78上调,且明显减轻ox-LDL所诱导的自噬反应,表现为beclin-1表达下调,LC3颗粒化程度减弱。结论:内质网应激介导ox-LDL对巨噬细胞自噬的诱导作用,而一定程度的自噬可通过抑制CHOP表达从而减轻ox-LDL所诱导的巨噬细胞凋亡。 展开更多

关键词 自噬 内质网应激 氧化低密度脂蛋白 巨噬细胞 细胞凋亡

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过表达磷脂转运蛋白对小鼠脂蛋白上鞘氨醇-1-磷酸含量的影响 被引量：4

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作者 于杨 冯玉梅 +8 位作者 郭守东 崔英杰 宋国华 冯蕾 罗甜 陈超 王义维 蒋宪成 秦树存 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1421-1426,共6页

目的:探讨血浆脂蛋白上鞘氨醇-1-磷酸(S1P)和磷脂转运蛋白(PLTP)的相互作用及机制。方法:检测雄性10周龄PLTP转基因(PLTP-Tg)及野生型(WT)小鼠血浆S1P和脂蛋白上S1P含量,转运实验检测PLTP对S1P的转运作用,免疫印迹检测S1P载体载脂蛋白M(... 目的:探讨血浆脂蛋白上鞘氨醇-1-磷酸(S1P)和磷脂转运蛋白(PLTP)的相互作用及机制。方法:检测雄性10周龄PLTP转基因(PLTP-Tg)及野生型(WT)小鼠血浆S1P和脂蛋白上S1P含量,转运实验检测PLTP对S1P的转运作用,免疫印迹检测S1P载体载脂蛋白M(apoM)含量。结果:PLTP-Tg小鼠血浆S1P含量较WT小鼠下降21.1%(P<0.01),高密度脂蛋白(HDL)组分上S1P含量下降约35.1%,而低密度脂蛋白(LDL)组分上S1P比例则增加了127.4%。转运实验表明,在37℃时D-Hanks缓冲液中PLTP能够促进S1P从红细胞转运至重组脂质体。PLTP-Tg小鼠血浆中apoM含量与WT小鼠比较无变化。结论:生理水平PLTP对保持HDL上S1P含量有重要意义,过表达PLTP可显著降低HDL上S1P,同时升高LDL上S1P,其机制可能与PLTP介导S1P转运有关。 展开更多

关键词 鞘氨醇-1-磷酸 磷脂转运蛋白 红细胞

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泛素-蛋白酶体系统对Aβ生成与代谢调控作用的研究进展 被引量：3

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作者 孙利利 王浩 +1 位作者 秦树存 张继国 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期153-156,共4页

阿尔茨海默症(AD)是中枢神经系统退行性疾病,目前其确切发病机制未明,也无有效的治疗手段。淀粉样蛋白级联假说认为,β淀粉样蛋白(Aβ)是AD形成的关键因素。泛素-蛋白酶体系统(UPS)是胞内主要蛋白质质量控制系统,最近研究发现其可调控A... 阿尔茨海默症(AD)是中枢神经系统退行性疾病,目前其确切发病机制未明,也无有效的治疗手段。淀粉样蛋白级联假说认为,β淀粉样蛋白(Aβ)是AD形成的关键因素。泛素-蛋白酶体系统(UPS)是胞内主要蛋白质质量控制系统,最近研究发现其可调控Aβ的生成和代谢,进而参与AD的发生。UPS可通过调控泛素化APP、β-分泌酶及γ-分泌酶各成分的代谢参与Aβ生成;同时UPS也是Aβ主要降解途径之一;而Aβ也可抑制UPS系统蛋白酶体活性。本文对此进行了综述。 展开更多

关键词 泛素-蛋白酶体系统 淀粉样蛋白 APP Β-分泌酶 Γ-分泌酶

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MG132对SH-SY5Y细胞Aβ水平的影响 被引量：1

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作者 王浩 孙利利 +5 位作者 于杨 杨艳茹 马健 陈伟 张继国 秦树存 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1195-1199,共5页

目的:观察蛋白酶体抑制剂MG132诱导SH-SY5Y细胞凋亡及调节β-淀粉样蛋白(beta-amyloid protein,Aβ)生成的作用,并对其机制进行探讨。方法:培养SH-SY5Y细胞,MG132对细胞进行处理,浓度分别为2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L,24 h后检测... 目的:观察蛋白酶体抑制剂MG132诱导SH-SY5Y细胞凋亡及调节β-淀粉样蛋白(beta-amyloid protein,Aβ)生成的作用,并对其机制进行探讨。方法:培养SH-SY5Y细胞,MG132对细胞进行处理,浓度分别为2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L,24 h后检测各项指标。MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)水平;Western blot检测淀粉样蛋白前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)、β-分泌酶(BACE1)、早老蛋白1(presenilins 1,PS1)、早老蛋白2(presenilins 2,PS2)、nicastrin(NCT)和α-分泌酶(ADAM10)蛋白表达。结果:经MG132处理后,细胞活力明显下降,诱导细胞凋亡,随剂量增加凋亡率分别为36.97%、46.20%、50.50%;细胞Aβ_(1-42)和Aβ_(1-40)蛋白水平明显上升;APP及Aβ代谢相关蛋白PS1、PS2和BACE1表达均出现剂量依赖性的增加,而ADAM10表达呈剂量依赖性降低;NCT水平变化不明显。结论:MG132能诱导神经细胞凋亡,通过影响Aβ生成途径关键蛋白而促进Aβ的产生,说明蛋白酶体活性下降可通过调节Aβ途径参与阿尔茨海默病的发生。 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 泛素-蛋白酶体系统 MG132 Β-淀粉样蛋白 细胞凋亡

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MG132对SHSY-5Y细胞Aβ代谢的影响及机制研究

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作者 孙利利 王浩 +3 位作者 于杨 焦鹏 张继国 秦树存 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第B11期19-20,共2页

目的近年研究发现泛素-蛋白酶体系统（ubiquitin-proteasomes system,UPS）在阿尔茨海默症（Alzhei-mer’sdisease,AD）发病中起重要作用,但其详细机制还未明确.本课题组通过培养人神经母细胞瘤细胞SHSY-5Y,观察不同浓度蛋白酶体抑制剂M... 目的近年研究发现泛素-蛋白酶体系统（ubiquitin-proteasomes system,UPS）在阿尔茨海默症（Alzhei-mer’sdisease,AD）发病中起重要作用,但其详细机制还未明确.本课题组通过培养人神经母细胞瘤细胞SHSY-5Y,观察不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132对细胞凋亡及β淀粉样蛋白（βamyloid,Aβ）代谢的影响,以期为阐明UPS在AD中的作用及机制提供依据.方法培养SHSY-5Y细胞,MG132对细胞进行处理,浓度分别为2.5μmol·L^-1、5μmol·L^-1、10μmol·L^-1,24后检测各项指标.流式细胞术检测细胞凋亡;Elisa法检测细胞Aβ40、Aβ42水平;Westernblot检测β淀粉样蛋白前体蛋白（APP）,β-分泌酶（BACE1）,γ-分泌酶相关组分早老蛋白1（presenilins1,PS1）、早老蛋白2（presenilins2,PS2）、Nicastrin（NCT）,α-分泌酶（ADAM10）等蛋白表达.结果细胞经MG132处理后,细胞活力下降,明显诱导细胞凋亡,随剂量增加凋亡率分别为3697%、462%、505%;经MG132处理后,细胞Aβ42、Aβ40蛋白水平明显上升;APP及Aβ代谢相关蛋白PS1、PS2和BACE1表达均出现剂量依赖性的增加,而ADAM10表达呈剂量依赖性降低;NCT水平变化不明显.结论MG132能诱导神经细胞凋亡,通过影响Aβ生成途径关键蛋白而干扰其代谢,说明蛋白酶体活性下降,可能通过促进Aβ的产生进而参与AD发生. 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 泛素-蛋白酶体系统 MG132 Β淀粉样蛋白 凋亡

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磷脂转运蛋白对中枢神经脑组织代谢的可能作用及其生物学意义

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作者 王浩 于杨 秦树存 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期330-331,共2页

众所周知，中枢神经系统中富含脂类，其中占体重2％的脑组织包含了机体20％以上的脂类，接近脑干重的一半，脂质种类主要为磷脂和胆固醇。磷脂转运蛋白（PLTP）是染色体20q12～13．1编码广泛表达的脂质转运蛋白，对于血浆脂质代谢具有... 众所周知，中枢神经系统中富含脂类，其中占体重2％的脑组织包含了机体20％以上的脂类，接近脑干重的一半，脂质种类主要为磷脂和胆固醇。磷脂转运蛋白（PLTP）是染色体20q12～13．1编码广泛表达的脂质转运蛋白，对于血浆脂质代谢具有重要意义，可参与磷脂、未酯化胆固醇、酰基甘油酯、特定载脂蛋白（apo）、维生素E的转运等。 展开更多

关键词 中枢神经系统 小神经胶质细胞 磷脂转移蛋白质类 阿尔茨海默病 唐氏综合征

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液相色谱-串联质谱法检测人血浆及脂蛋白唾液酸的含量 被引量：5

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作者 郭守东 桑慧 +5 位作者 杨娜娜 阚玉杰 李富裕 李煜 李方圆 秦树存 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1197-1200,共4页

建立了液相色谱-串联质谱（LC-MS / MS）检测人血浆脂蛋白唾液酸的方法，并比较了糖尿病患者与健康人血浆脂蛋白唾液酸的差异。采用 pH =2的醋酸水解唾液酸，高速离心后采用优化的条件进行 LC-MS / MS 分析。结果表明：在负离子模式下... 建立了液相色谱-串联质谱（LC-MS / MS）检测人血浆脂蛋白唾液酸的方法，并比较了糖尿病患者与健康人血浆脂蛋白唾液酸的差异。采用 pH =2的醋酸水解唾液酸，高速离心后采用优化的条件进行 LC-MS / MS 分析。结果表明：在负离子模式下，唾液酸的检出限和定量限分别为7.4和24.5 pg。唾液酸在2.5-80 ng / mL 范围内呈良好的线性关系，相关系数 R2大于0.998。糖尿病患者（平均年龄51.6岁）和健康人（平均年龄50.7岁）血浆中唾液酸的含量分别为（548.3±88.9）和（415.3±55.5）mg / L；两组实验人群中极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白唾液酸的含量分别为（4.91±0.19）、（6.95±0.28）、（3.61±0.22）μg / mg和（2.90±0.27）、（7.03±0.04）、（2.40±0.09）μg / mg。糖尿病患者极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白唾液酸含量显著高于同龄健康人水平（ P〈0.01）。该法可快速检测血浆中脂蛋白唾液酸含量，省时省力。 展开更多

关键词 液相色谱-串联质谱 唾液酸 脂蛋白 人血浆 糖尿病

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载脂蛋白A-I模拟肽L-4F减轻过氧化氢诱导的小鼠骨髓内皮祖细胞损伤 被引量：5

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作者 展恩欣 范昊昌 +5 位作者 陈晓凤 孙玉兰 杜云塞 黄文秀 杨娜娜 秦树存 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期1-7,共7页

目的:研究载脂蛋白A-I模拟肽L-4F是否减轻过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导的小鼠骨髓来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)氧化应激损伤及其机制。方法:通过密度梯度离心法分离小鼠骨髓单个核细胞,条件培养基EGM-2M... 目的:研究载脂蛋白A-I模拟肽L-4F是否减轻过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导的小鼠骨髓来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)氧化应激损伤及其机制。方法:通过密度梯度离心法分离小鼠骨髓单个核细胞,条件培养基EGM-2MV诱导分化培养EPCs。对培养EPCs先以PI3K/AKT抑制剂LY294002(30μmol/L)干预2 h后加入L-4F(75 mg/L)4 h,再加入100μmol/L H2O224 h。MTT法检测细胞活力,试剂盒检测各实验组培养基超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,以评价细胞氧化与抗氧化平衡及脂质过氧化程度;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;免疫印迹法检测p-AKT蛋白水平。结果:L-4F预处理显著抑制了H2O2诱导的细胞活力降低、SOD活性下降、MDA含量增加及细胞凋亡。H2O2下调p-AKT的蛋白水平,L-4F呈浓度依赖性地上调p-AKT的蛋白水平。LY294002抑制了L-4F减轻EPCs损伤的作用。结论:载脂蛋白A-I模拟肽L-4F部分通过PI3K/AKT通路减轻H2O2诱导的EPCs氧化应激损伤。 展开更多

关键词 动脉粥样硬化 载脂蛋白A-I模拟肽 内皮祖细胞 过氧化氢 氧化应激

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