山东省肉鸭沙门氏菌的分离鉴定及敏感抗菌药物的筛选 被引量：7

1

作者 齐静 王守荣 +11 位作者 李兰波 骆延波 李璐璐 胡明 王进文 李虹达 贾纪美 赵敏 杨胜福 李玉保 单虎 刘玉庆 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第7期216-220,共5页

从山东省各个地区的病死肉鸭采集317份组织样品进行细菌分离,并进行染色镜检和生化鉴定,共分离鉴定出105株沙门氏菌,分离率为33.1%。将临床推荐用药浓度的0.1倍作为抗药性检测浓度L,设置不同药物浓度梯度(1/4L、1/2L、L、2L和4L),进行1... 从山东省各个地区的病死肉鸭采集317份组织样品进行细菌分离,并进行染色镜检和生化鉴定,共分离鉴定出105株沙门氏菌,分离率为33.1%。将临床推荐用药浓度的0.1倍作为抗药性检测浓度L,设置不同药物浓度梯度(1/4L、1/2L、L、2L和4L),进行17种抗生素的药敏试验,根据L药物浓度梯度对分离菌株的抑菌率大于80%的原则进行敏感抗菌药物的筛选。结果表明,沙门氏菌是危害山东省肉鸭养殖的主要病原菌之一,且多重耐药现象较严重,其中氨苄西林、诺氟沙星、卡那霉素、氟苯尼考和培氟沙星等敏感药物可作为临床推荐药物对沙门氏菌进行防控。 展开更多

关键词 沙门氏菌 分离 鉴定 药敏试验 鸭

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水貂犬瘟热病毒受体SLAM的原核表达 被引量：6

2

作者 王聪 张洪亮 +3 位作者 黄娟 靳继惠 王怡男 单虎 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第2期68-71,共4页

为了获得犬瘟热病毒受体信号淋巴激活分子(SLAM)蛋白,本试验以pMD18-T-SLAM为模板,应用PCR方法扩增得到水貂SLAM基因,将SLAM基因连接到经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切处理后的pGEX-6p-1原核表达载体中,获得重组质粒pGEX-6p-1-SLAM,转化至大肠埃... 为了获得犬瘟热病毒受体信号淋巴激活分子(SLAM)蛋白,本试验以pMD18-T-SLAM为模板,应用PCR方法扩增得到水貂SLAM基因,将SLAM基因连接到经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切处理后的pGEX-6p-1原核表达载体中,获得重组质粒pGEX-6p-1-SLAM,转化至大肠埃希菌BL21中进行诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果表明,目的基因插入位置和阅读框正确,经诱导成功表达出分子质量约为63.2ku的SLAM-GST融合蛋白,该融合蛋白能与鼠抗GST标签单克隆抗体发生特异性反应,具有良好的抗原性。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 受体 信号淋巴激活分子 原核表达 水貂

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水貂犬瘟热病毒受体——信号淋巴细胞激活因子的细胞定位及组织分布 被引量：6

3

作者 黄娟 王聪 +1 位作者 张洪亮 单虎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期289-294,共6页

为探讨犬瘟热病毒受体——信号淋巴细胞激活因子(SLAM)的细胞定位、在水貂组织中的分布及病毒感染对受体表达水平的影响,本研究采用间接免疫荧光法(IFA)进行了SLAM细胞定位。以IFA检测感染水貂肝、脾、肺、肾、脑组织的犬瘟热病毒抗原,... 为探讨犬瘟热病毒受体——信号淋巴细胞激活因子(SLAM)的细胞定位、在水貂组织中的分布及病毒感染对受体表达水平的影响,本研究采用间接免疫荧光法(IFA)进行了SLAM细胞定位。以IFA检测感染水貂肝、脾、肺、肾、脑组织的犬瘟热病毒抗原,以半定量PCR和间接免疫组化法(IHA)检测健康水貂及感染水貂SLAM在以上组织中的分布。结果表明,在Vero-SLAM细胞膜及细胞质内可见SLAM特异性荧光;感染水貂肝、脾、肺、肾、脑组织均可见大量犬瘟热病毒抗原阳性细胞,健康水貂及感染水貂肝、脾、肺、肾、脑组织SLAM PCR阳性,IHA检出数量不一的SLAM阳性着色细胞,且感染水貂相应组织的SLAM阳性着色细胞显著多于健康水貂(P<0.05);感染水貂的肾、脾、肺组织中犬瘟热病毒阳性细胞显著多于SLAM阳性着色细胞。说明SLAM受体表达于细胞膜和细胞质,在肝、脾、肺、肾、脑组织中均有分布;犬瘟热病毒感染引起SLAM受体表达的上调;在水貂体内除了SLAM受体,还有其它犬瘟热病毒受体存在。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 受体 信号淋巴细胞激活因子(SLAM) 细胞定位 组织分布

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水貂犬瘟热流行病学调查 被引量：5

4

作者 王聪 邴啟政 +2 位作者 张荧 黄娟 单虎 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第4期198-201,共4页

为了调查山东省水貂犬瘟热的流行病学情况,对2010年8月-2012年8月期间由诸城、文登等地养貂场送诊的996份水貂病例进行了临床诊断和病原学检查。结果显示,共检出犬瘟热病毒阳性病料223份,阳性率为22.39%。其中,犬瘟热病毒与其他病原混... 为了调查山东省水貂犬瘟热的流行病学情况,对2010年8月-2012年8月期间由诸城、文登等地养貂场送诊的996份水貂病例进行了临床诊断和病原学检查。结果显示,共检出犬瘟热病毒阳性病料223份,阳性率为22.39%。其中,犬瘟热病毒与其他病原混合感染136例,占阳性病例的60.99%;阳性样本中未免疫病例116个;诸城检出阳性病例数最多,为147例;3月龄水貂发病率最高,占阳性病例的43.0%;水貂感染犬瘟热病毒主要症状为眼、鼻黏液性分泌物增多、脚垫增厚、呼吸困难;主要病理变化为肠、脑部出血。结果表明,犬瘟热依然是危害水貂养殖的重要疫病,且犬瘟热病毒易与其他病原混合感染;免疫接种能有效预防水貂犬瘟热,且宜在3月龄以前进行。 展开更多

关键词 水貂 犬瘟热 流行病学调查

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HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：3

5

作者 刘纪玉 杜以军 +9 位作者 刘星 吴家强 李俊 丛晓燕 赵新华 徐绍建 孙文博 时建立 单虎 王金宝 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第5期1-7,共7页

本试验旨在建立一种用SYBR GreenⅠ荧光染料检测HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子ISG15、ISG56、Mx1、OAS和PKR mRNA表达水平的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并在口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白抑制Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路中进行初步应用。利用TRI... 本试验旨在建立一种用SYBR GreenⅠ荧光染料检测HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子ISG15、ISG56、Mx1、OAS和PKR mRNA表达水平的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并在口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白抑制Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路中进行初步应用。利用TRIzol法提取总RNA,经Oligo d(T)15进行反转录,利用PCR扩增各段目的基因,并克隆至pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,经鉴定为阳性的重组质粒作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR标准曲线和熔解曲线,并进行灵敏性、特异性和重复性试验。根据建立的实时荧光定量RT-PCR方法,检测FMDV L蛋白对Ⅰ型IFN效应因子的抑制效果。HeLa细胞在转染FMDV L蛋白真核表达质粒,并受到Ⅰ型IFN刺激后ISG15、ISG56、Mx1、OAS和PKR的相对表达量较转染空载体或表达GST的真核表达质粒明显降低。本试验建立了HeLa细胞Ⅰ型IFN效应因子的实时荧光定量RT-PCR检测方法,为在mRNA水平上对HeLa细胞Ⅰ型IFN效应因子的定量分析奠定了基础,并成功地初步应用于FMDV L蛋白抑制Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路的研究中。 展开更多

关键词 实时荧光定量RT-PCR SYBR GreenⅠ 口蹄疫病毒 L蛋白 干扰素

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副猪嗜血杆菌河南分离株的鉴定及培养特性分析 被引量：1

6

作者 李书光 段笑笑 +3 位作者 苗立中 李峰 沈志强 单虎 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第8期24-29,共6页

为有效进行副猪嗜血杆菌(HPS)病的科学防控,本研究开展了疑似副猪嗜血杆菌病临床病料病原菌的分离鉴定、培养特性研究和致病性分析等工作。结果表明,成功分离到一株HPS,培养基中添加2种无机氮源均对该菌的生长具有促进作用,在以乳糖为... 为有效进行副猪嗜血杆菌(HPS)病的科学防控,本研究开展了疑似副猪嗜血杆菌病临床病料病原菌的分离鉴定、培养特性研究和致病性分析等工作。结果表明,成功分离到一株HPS,培养基中添加2种无机氮源均对该菌的生长具有促进作用,在以乳糖为碳源的培养基中HPS生长较好,不同动物来源的血清对HPS生长影响无显著性差异,27.5mg/L的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)即可满足HPS生长需求;药物敏感性试验显示,该菌株对某些药物具有较强的耐药性;致病性试验中,豚鼠对该分离株较敏感,具有较强的致病性。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 培养特性 致病性

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一例典型水貂犬瘟热病例诊断及H基因序列分析 被引量：1

7

作者 王聪 张倩 +2 位作者 张洪亮 王怡男 黄娟 《中国动物检疫》 CAS 2013年第2期49-52,共4页

为了对感染犬瘟热水貂的临床症状、病理特征及H基因突变情况进行全面了解，本试验对一水貂养殖场疑似犬瘟热发病水貂进行了全面诊断和基因序列分析。临床观察水貂眼角出现黏性分泌物，脚垫红肿发胀，精神状态萎靡。剖检病理变化为肺脏... 为了对感染犬瘟热水貂的临床症状、病理特征及H基因突变情况进行全面了解，本试验对一水貂养殖场疑似犬瘟热发病水貂进行了全面诊断和基因序列分析。临床观察水貂眼角出现黏性分泌物，脚垫红肿发胀，精神状态萎靡。剖检病理变化为肺脏严重出血，出现大面积肉样出血变性，胆囊肿大，胆汁呈浓稠深绿色，肾脏肿大，膀胱出现积尿现象，肠系膜出血、脱落。经HE染色发现，组织有明显增多的炎性细胞，局部有出血淤血现象。经胶体金、鲁戈氏碘凝集法和革兰氏染色镜检检测为单纯犬瘟热感染，RT-PCR检测CDV阳性。利用RT-PCR方法对CDVH基因进行扩增并进行测序，结果显示该株犬瘟热病毒为亚洲I型，与野毒株2544、48／05、98002、SD（07）1的同源性在92．6％～95．7%，与疫苗株CDV3、Convac、Lederle、Onderstepoort的同源性在90．9％～91．6％。 展开更多

关键词 水貂 犬瘟热 病例诊断 H基因 序列分析

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鸡源巴氏杆菌的分离鉴定及致病性研究 被引量：4

8

作者 秦晓冰 《安徽农业科学》 CAS 2019年第18期88-89,共2页

从青岛农业大学动物医院的蛋鸡送检病料中,无菌采集病死鸡肺脏、肝脏组织进行细菌的分离培养和鉴定,并对鉴定的分离菌进行药敏试验和致病性试验。结果表明,分离菌在血琼培养基上呈圆隆、露滴状、表面光滑带荧光的白色菌落,染色镜检为革... 从青岛农业大学动物医院的蛋鸡送检病料中,无菌采集病死鸡肺脏、肝脏组织进行细菌的分离培养和鉴定,并对鉴定的分离菌进行药敏试验和致病性试验。结果表明,分离菌在血琼培养基上呈圆隆、露滴状、表面光滑带荧光的白色菌落,染色镜检为革兰氏阴性短杆菌,经PCR鉴定该菌为多杀性巴氏杆菌;该菌对氟苯尼考、阿米卡星高度敏感,对头孢曲松、头孢氨苄、阿莫西林等13种药物表现出不同程度耐药;该菌对小鼠呈高致死性,表明该菌具有很强的致病性。 展开更多

关键词 鸡源多杀性巴氏杆菌 分离 鉴定 致病性

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猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法的建立 被引量：2

9

作者 胡继明 杨培培 +7 位作者 王颖 孙海芳 黄娟 陈俏俏 杨瑞梅 张传美 秦晓冰 单虎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期943-949,共7页

本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法。根据Shimen株设计1对特异性引物,建立猪瘟病毒RT-PCR-RFLP检测方法;对20份疑似猪瘟临床样品进行检测,并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株PCR产物进行克隆... 本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法。根据Shimen株设计1对特异性引物,建立猪瘟病毒RT-PCR-RFLP检测方法;对20份疑似猪瘟临床样品进行检测,并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株PCR产物进行克隆与序列分析,验证上述方法。结果RT-PCR扩增片段为825bp,产物经RFLP分析,野毒株的PCR产物能被ApaⅠ酶切为322bp和503bp 2个片段,兔化弱毒疫苗株则不能被酶切,检测出RNA的最低浓度为0.028 6μg.mL-1;8株流行野毒株都含GGGCCC序列(ApaⅠ酶切位点),2株疫苗株相应序列为GAGCCC,不能被ApaⅠ酶切;8株流行野毒株属于基因2群,2株疫苗株与HCLV遗传关系近,为基因1群。建立了可鉴别猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP检测方法,为猪瘟的防控提供有效手段。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 野毒株 兔化弱毒疫苗株 RT-PCR-RFLP

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犬源牛犬细小病毒和犬圆环病毒二联PCR检测方法的建立及应用 被引量：1

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作者 于永乐 姚延珠 +6 位作者 韩先杰 张传美 秦志华 杨瑞梅 张洪亮 刘维全 单虎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期978-982,共5页

本研究旨在建立可同时检测犬源牛犬细小病毒(CBoV)和犬圆环病毒(CCV)的二联PCR检测方法,并对两种病毒病当前的流行情况进行监测和调查。分别将已发表的CBoV和CCV基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5计算机软... 本研究旨在建立可同时检测犬源牛犬细小病毒(CBoV)和犬圆环病毒(CCV)的二联PCR检测方法,并对两种病毒病当前的流行情况进行监测和调查。分别将已发表的CBoV和CCV基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5计算机软件设计并合成了2对特异性扩增引物,目的片段大小分别为170 bp(CBoV)和239 bp(CCV)。分别提取CBoV和CCV重组质粒作为模板,进行二联PCR扩增试验。结果表明,本研究成功建立了可同时检测CBoV和CCV的二联PCR检测方法。并对其重复性、特异性和灵敏度进行验证,二联PCR最低检测限度为3.0 pg总DNA,而对犬细小病毒2型、犬瘟热病毒和犬副流感病毒的PCR检测结果均为阴性。对送检的30份病料进行检测,其中,4份为CBoV阳性,3份为CCV阳性,未检测到混合感染。综上所述,本研究所建立的CBoV和CCV二联PCR诊断方法特异性高,敏感性好,可用于临床犬腹泻病的流行病学调查。 展开更多

关键词 犬源牛犬细小病毒 犬圆环病毒 二联PCR

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禽腺病毒4型Fiber-2蛋白原核表达及间接ELISA的构建 被引量：1

11

作者 潘静 孟凯 秦晓冰 《山东农业科学》 北大核心 2021年第11期100-105,共6页

禽腺病毒(FAdV)是世界范围内流行的禽类常见传染病病原,2015年暴发的由新型血清4型禽腺病毒(FAdV-4)引起的急性传染病,给养殖户造成巨大的经济损失。为做到早期诊断和检测,并防控、净化该病毒病,本试验利用Fiber-2蛋白建立了检测FAdV-4... 禽腺病毒(FAdV)是世界范围内流行的禽类常见传染病病原,2015年暴发的由新型血清4型禽腺病毒(FAdV-4)引起的急性传染病,给养殖户造成巨大的经济损失。为做到早期诊断和检测,并防控、净化该病毒病,本试验利用Fiber-2蛋白建立了检测FAdV-4的ELISA方法。根据禽腺病毒4型SDJN0105株Fiber-2基因的核苷酸序列,经序列优化后合成1 440 bp基因序列,连入pET-30a(+)载体构建pET-30a(+)-Fiber-2重组质粒,在BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达Fiber-2蛋白,利用亲和层析柱纯化重组Fiber-2蛋白,经SDS-PAGE和Western-Blot鉴定后,以Fiber-2蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化建立检测禽腺病毒4型抗体的间接ELISA方法。结果表明,获得了以上清形式表达的重组Fiber-2蛋白,Western-Blot鉴定表明重组Fiber-2蛋白具有良好的免疫学活性;重组Fiber-2蛋白的最佳包被浓度为4.0μg/mL,待检血清最佳稀释度为1∶400;该方法特异性好,仅与禽腺病毒4型阳性抗体发生反应,敏感度可达1∶6400;批内和批间重复性变异系数均小于5%;构建的间接ELISA试剂盒在4℃环境下放置12个月仍然有效。本研究建立的禽腺病毒4型抗体间接ELISA检测方法特异性强、敏感性高、重复性好、保质期长,可用于禽腺病毒4型的监测和流行病学调查。 展开更多

关键词 禽腺病毒4型 Fiber-2蛋白 原核表达 间接ELISA

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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白特异性纳米抗体的原核表达及鉴定

12

作者 王鑫 张洪亮 +6 位作者 秦志华 郑乾坤 黄娟 董绍明 杨瑞梅 曲光刚 单虎 《中国动物检疫》 CAS 2023年第10期106-111,共6页

为获得针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白的特异性纳米抗体,并鉴定其抗原结合活性,以本实验室前期获得的PRRSV GP5蛋白特异性纳米抗体VHHGP5基因片段为模板,使用PCR对目... 为获得针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白的特异性纳米抗体,并鉴定其抗原结合活性,以本实验室前期获得的PRRSV GP5蛋白特异性纳米抗体VHHGP5基因片段为模板,使用PCR对目的片段进行扩增,将扩增的片段经双酶切处理后连接到pColdSUMO-FLAG载体上,随后转化至E.coli TOP 10感受态细胞。经菌液PCR鉴定,将构建成功的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG作为诱导剂对目的蛋白进行诱导表达,表达产物通过Ni-NTA亲和层析柱纯化。通过SDA-PAGE凝胶电泳分析表达及纯化后的蛋白,同时使用ELISA方法检测纯化后的纳米抗体效价,并使用Western blot鉴定纯化后的蛋白。SDS-PAGE结果显示,成功获得了大小约36 kDa的重组蛋白,利用原核表达系统制备的PRRSV GP5特异性纳米抗体重组蛋白以可溶性形式表达;ELISA结果显示,该纳米抗体结合抗原的效价为1:50000;Western blot结果显示,该纳米抗体具有较好的反应性和特异性。本试验为PRRSV检测用及治疗用新型抗体开发奠定了基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白 大肠杆菌表达系统 纳米抗体

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