NodB是来源于根瘤菌的脱乙酰基酶,可水解脱去几丁寡糖非还原端糖基的乙酰基。试验将体外合成的重组nodBNX和nodBBX基因,分别插入质粒pET-28a的lac启动子的下游,构建了可以表达融合蛋白NodB1(T7-tag+NodB+His-tag)和NodB2(NodB+His-tag)...NodB是来源于根瘤菌的脱乙酰基酶,可水解脱去几丁寡糖非还原端糖基的乙酰基。试验将体外合成的重组nodBNX和nodBBX基因,分别插入质粒pET-28a的lac启动子的下游,构建了可以表达融合蛋白NodB1(T7-tag+NodB+His-tag)和NodB2(NodB+His-tag)的重组大肠杆菌pET-NodB-NX和pET-NodBBX,在0.1 mM IPTG诱导下,两种重组菌均可表达目的蛋白NodB1和NodB2,分子量分别为30 kD和26 kD,经包含体复性、Ni柱亲和层析得到NodB纯化产物,以重组NodB催化几丁五糖的脱乙酰基反应,酶解产物通过薄层层析和ESI-MS检测。试验结果表明:融合蛋白NodB1和NodB2均具有转乙酰基活性,但NodB2活性大于NodB1。展开更多
文摘NodB是来源于根瘤菌的脱乙酰基酶,可水解脱去几丁寡糖非还原端糖基的乙酰基。试验将体外合成的重组nodBNX和nodBBX基因,分别插入质粒pET-28a的lac启动子的下游,构建了可以表达融合蛋白NodB1(T7-tag+NodB+His-tag)和NodB2(NodB+His-tag)的重组大肠杆菌pET-NodB-NX和pET-NodBBX,在0.1 mM IPTG诱导下,两种重组菌均可表达目的蛋白NodB1和NodB2,分子量分别为30 kD和26 kD,经包含体复性、Ni柱亲和层析得到NodB纯化产物,以重组NodB催化几丁五糖的脱乙酰基反应,酶解产物通过薄层层析和ESI-MS检测。试验结果表明:融合蛋白NodB1和NodB2均具有转乙酰基活性,但NodB2活性大于NodB1。
