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重组人骨形成蛋白-2基因工程菌株的构建及蛋白复性纯化
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作者 张秀华 刘飞 +5 位作者 刘英梅 陈勉 刘霞 刘金明 凌沛学 王凤山 《食品与药品》 CAS 2019年第5期337-342,共6页
目的构建一株高效表达人骨形成蛋白2(hBMP-2)的基因工程菌株,并通过复性、纯化获得有生物活性的rhBMP-2。方法采用基因工程法将hBMP-2基因片段与pET-28a(+)质粒载体相连,构建大肠杆菌表达系统。工程菌发酵后,超声破碎收集包涵体,包涵体... 目的构建一株高效表达人骨形成蛋白2(hBMP-2)的基因工程菌株,并通过复性、纯化获得有生物活性的rhBMP-2。方法采用基因工程法将hBMP-2基因片段与pET-28a(+)质粒载体相连,构建大肠杆菌表达系统。工程菌发酵后,超声破碎收集包涵体,包涵体经裂解后通过稀释复性法进行复性,SDS-PAGE检测复性情况,并采用HiTrapHeparinHP纯化,C2C12细胞检测活性。结果rhBMP-2在大肠杆菌中以无活性的包涵体形式表达,1L发酵罐高密度发酵rhBMP-2包涵体湿重可达20g/L。采用稀释法复性,蛋白复性率大于40%,亲和层析纯化后,二聚体蛋白纯度达95%以上,且能诱导C2C12细胞碱性磷酸酶的表达,具有同市售产品相同的细胞活性。结论成功构建了高效表达rhBMP-2的基因工程菌株,复性方法简单且无需对包涵体进行纯化,蛋白复性浓度高,纯化方法简便,大大降低了工业化生产成本。 展开更多
关键词 人骨形成蛋白2 大肠杆菌 包涵体 复性 纯化 生物活性
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谷物中β-葡聚糖的提取、纯化及生物活性研究进展
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作者 李溢真 陈勉 +6 位作者 孔令斌 王传金 尉茜 牛林林 房晓豫 刘飞 刘峰 《食品与药品》 CAS 2024年第3期I0010-I0014,共5页
谷物是人类重要食物来源之一,β-葡聚糖是一种功能性多糖。本文综述了谷物来源的β-葡聚糖的提取、纯化及生物活性,分析了不同提取方式对β-葡聚糖纯度和产率的影响,以及不同纯化方法的优缺点、分离效果。旨在为深入和全面地开发利用谷... 谷物是人类重要食物来源之一,β-葡聚糖是一种功能性多糖。本文综述了谷物来源的β-葡聚糖的提取、纯化及生物活性,分析了不同提取方式对β-葡聚糖纯度和产率的影响,以及不同纯化方法的优缺点、分离效果。旨在为深入和全面地开发利用谷物中β-葡聚糖资源提供参考。 展开更多
关键词 Β-葡聚糖 谷物 提取 纯化 生物活性
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普鲁兰糖生物合成和分子量调控机制的研究进展 被引量:3
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作者 刘飞 刁梦奇 +4 位作者 张金华 张林军 袁超 王凤山 凌沛学 《食品与药品》 CAS 2020年第1期72-77,共6页
普鲁兰糖是由出芽短梗霉产生的一种胞外多糖,在食品、药物、化妆品等领域有广泛应用,但其具体的分子合成机制和分子量调控机制尚不明确。本文回顾了近年普鲁兰糖生物合成途径及分子量调控机制研究,并绘制了可能的普鲁兰糖合成途径,总结... 普鲁兰糖是由出芽短梗霉产生的一种胞外多糖,在食品、药物、化妆品等领域有广泛应用,但其具体的分子合成机制和分子量调控机制尚不明确。本文回顾了近年普鲁兰糖生物合成途径及分子量调控机制研究,并绘制了可能的普鲁兰糖合成途径,总结了影响普鲁兰糖产量和分子量的因素。 展开更多
关键词 普鲁兰糖 出芽短梗霉 生物合成途径 分子量调控
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冠突散囊菌发酵产物的抑菌作用及特性研究 被引量:6
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作者 张芳芳 刘飞 +4 位作者 袁超 高亮 王羽 凌沛学 朱希强 《食品与药品》 CAS 2019年第1期62-65,共4页
目的测定冠突散囊菌发酵液不同溶剂提取物的抑菌作用、抑菌物质的温度及其p H稳定性。方法依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取冠突散囊菌发酵液,采用打孔法测定冠突散囊菌发酵液不同溶剂提取物对细菌、真菌及放线菌的抑菌作用及在不... 目的测定冠突散囊菌发酵液不同溶剂提取物的抑菌作用、抑菌物质的温度及其p H稳定性。方法依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取冠突散囊菌发酵液,采用打孔法测定冠突散囊菌发酵液不同溶剂提取物对细菌、真菌及放线菌的抑菌作用及在不同温度及p H值下的稳定性。结果发酵液乙酸乙酯提取相的抑菌作用较其他提取相强。其中,对枯草芽孢杆菌与白色链霉菌的抑制作用最显著,且该抑菌物质在25~121℃,p H 4~8范围内均能保持稳定的抑菌活性。结论乙酸乙酯能有效提取冠突散囊菌发酵液中的抑菌物质,抑菌物质在一定的温度及p H范围内具有良好的稳定性。 展开更多
关键词 冠突散囊菌 发酵液 抑菌作用 稳定性
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核桃肽的制备、分离纯化及生物活性研究进展 被引量:2
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作者 李溢真 陈勉 +8 位作者 袁丹丹 牛林林 袁嘉丽 陈磊 马学彬 王传金 孔令斌 尉茜 刘飞 《食品与药品》 CAS 2023年第3期267-272,共6页
核桃粕是一种优质的植物蛋白资源,利用其制备的核桃肽有抗氧化、降血压等保健功能。但目前核桃粕常被作为废弃物或低价值饲料、肥料,该现状阻碍了核桃产业的发展。因此,利用核桃粕开发生物活性肽等产品,对于实现综合利用、提高副产品附... 核桃粕是一种优质的植物蛋白资源,利用其制备的核桃肽有抗氧化、降血压等保健功能。但目前核桃粕常被作为废弃物或低价值饲料、肥料,该现状阻碍了核桃产业的发展。因此,利用核桃粕开发生物活性肽等产品,对于实现综合利用、提高副产品附加值具有重要意义。本文综述了核桃肽的制备、分离纯化及其生物活性,探讨了核桃肽在食品、医药行业的不同用途,旨在为核桃粕的高效利用和核桃产业发展提供参考信息。 展开更多
关键词 核桃肽 制备 分离纯化 生物活性
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密码子优化提高海藻糖合成酶基因在大肠杆菌中的表达水平 被引量:9
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作者 张晓元 郝荣华 +3 位作者 刘飞 袁丹丹 陈勉 凌沛学 《食品与药品》 CAS 2019年第1期1-6,共6页
目的优化灰色链霉菌海藻糖合成酶(Trehalose synthase,TreS)基因密码子,提高海藻糖合成酶大肠杆菌基因工程菌株表达水平。方法基于大肠杆菌基因组密码子偏好数据表对tres基因进行密码子优化得基因tres1。基因工程法构建分别含tres及tres... 目的优化灰色链霉菌海藻糖合成酶(Trehalose synthase,TreS)基因密码子,提高海藻糖合成酶大肠杆菌基因工程菌株表达水平。方法基于大肠杆菌基因组密码子偏好数据表对tres基因进行密码子优化得基因tres1。基因工程法构建分别含tres及tres1基因的表达载体pET-26b(+)-tres和pET-26b(+)-tres1,CaCl2法转入大肠杆菌BL21(DE3)获得表达海藻糖合成酶的大肠杆菌基因工程菌株,采用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对摇瓶发酵粗酶液进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析及酶活性测定以确定表达水平。结果 1707 bp海藻糖合成酶tres基因共优化碱基序列268 bp,优化后序列的GC含量由65.8%降低至54.4%,密码子适应指数(CAI)由0.37提升至0.97,SDS-PAGE及酶活性分析表明,含pet-26b(+)-tres1表达载体的大肠杆菌基因工程菌株海藻糖合成酶蛋白表达量高,酶活性比含pet-26b(+)-tres工程菌提高60.3%以上。结论密码子优化可有效提高海藻糖合成酶TreS蛋白在大肠杆菌中的表达,为海藻糖合成酶的异源高效表达提供了重要参考。 展开更多
关键词 海藻糖合成酶 密码子 海藻糖 基因表达
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益生元降血脂功效研究进展 被引量:3
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作者 袁超 张林军 +4 位作者 师景双 刁梦奇 葛萍 刘飞 张金华 《食品与药品》 CAS 2020年第5期416-420,J0001,J0002,共7页
益生元因安全有效,无毒副作用的特点,其降血脂功效受到越来越多的关注。本文综述了近年益生元在降血脂功效和作用机制方面的研究进展,并对益生元在降血脂方面的应用前景进行了展望。
关键词 益生元 高脂血症 胆固醇 甘油三酯
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鱼源胶原肽特征质量指标检测分析
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作者 牛林林 袁丹丹 +7 位作者 陈磊 蔡久庆 刘娟 张明 陈勉 张晓元 张艳艳 刘飞 《食品与药品》 CAS 2021年第5期391-396,共6页
目的鱼源胶原肽的市售样品与实验室研制样品特征质量指标的对比。方法GPC色谱法测定鱼源胶原蛋白肽相对分子质量(Mr)和OPA柱前衍生法检测氨基酸含量。结果市售样品胶原肽Mr小于1000的占比约为40%,特征性氨基酸羟脯氨酸的含量50~150μg/... 目的鱼源胶原肽的市售样品与实验室研制样品特征质量指标的对比。方法GPC色谱法测定鱼源胶原蛋白肽相对分子质量(Mr)和OPA柱前衍生法检测氨基酸含量。结果市售样品胶原肽Mr小于1000的占比约为40%,特征性氨基酸羟脯氨酸的含量50~150μg/ml,比例在3%~7%;实验室研制的胶原肽Mr小于1000的占比约为88.47%,特征性氨基酸羟脯氨酸的含量为228.71μg/ml,约为11.71%。结论鱼源胶原肽产品之间存在质量差异,与市售样品肽相比,本实验室研制的胶原肽低分子量占比更高,特征性氨基酸羟脯氨酸含量更高。 展开更多
关键词 鱼源胶原肽 相对分子质量 氨基酸 羟脯氨酸
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