毕赤酵母工程菌产乳糖酶发酵条件优化的研究 被引量：7

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作者 侯重文 朱梓昂 +2 位作者 张秀华 刘飞 马河 《食品与药品》 CAS 2016年第5期305-311,共7页

目的优化毕赤酵母工程菌株VGal3186的发酵条件。方法对发酵培养基中的碳源、氮源、金属离子和p H、温度、接种量等发酵条件分别进行了单因素和正交试验优化,并在50 L发酵罐中验证。还对所产重组米曲霉乳糖酶进行酶学性质研究。结果优化... 目的优化毕赤酵母工程菌株VGal3186的发酵条件。方法对发酵培养基中的碳源、氮源、金属离子和p H、温度、接种量等发酵条件分别进行了单因素和正交试验优化,并在50 L发酵罐中验证。还对所产重组米曲霉乳糖酶进行酶学性质研究。结果优化后的发酵培养基为葡萄糖45 g/L、甘油15 g/L、蛋白胨20 g/L、酵母提取物20 g/L、KH_2PO_4 4 g/L、MgSO_4 9 g/L、CaCl_2 0.5 g/L、FeSO_4 90 mg/L、CuSO_4 6 mg/L、K_2SO_4 18.2 g/L,发酵条件为p H 7.0、发酵温度30℃、接种量7%,转速300 r/min。摇瓶发酵酶活性可达689 U/m L,较优化前提高了35.2%。50 L发酵罐中酶活性可达5264 U/m L,酶学性质表现更好。结论毕赤酵母工程菌株VGal3186经发酵优化后产量更高,产乳糖酶酶学性质好,在食品工业中应用潜力巨大。 展开更多

关键词 乳糖酶 毕赤酵母 发酵优化

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重组人骨形成蛋白-2基因工程菌株的构建及蛋白复性纯化

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作者 张秀华 刘飞 +5 位作者 刘英梅 陈勉 刘霞 刘金明 凌沛学 王凤山 《食品与药品》 CAS 2019年第5期337-342,共6页

目的构建一株高效表达人骨形成蛋白2(hBMP-2)的基因工程菌株,并通过复性、纯化获得有生物活性的rhBMP-2。方法采用基因工程法将hBMP-2基因片段与pET-28a(+)质粒载体相连,构建大肠杆菌表达系统。工程菌发酵后,超声破碎收集包涵体,包涵体... 目的构建一株高效表达人骨形成蛋白2(hBMP-2)的基因工程菌株,并通过复性、纯化获得有生物活性的rhBMP-2。方法采用基因工程法将hBMP-2基因片段与pET-28a(+)质粒载体相连,构建大肠杆菌表达系统。工程菌发酵后,超声破碎收集包涵体,包涵体经裂解后通过稀释复性法进行复性,SDS-PAGE检测复性情况,并采用HiTrapHeparinHP纯化,C2C12细胞检测活性。结果rhBMP-2在大肠杆菌中以无活性的包涵体形式表达,1L发酵罐高密度发酵rhBMP-2包涵体湿重可达20g/L。采用稀释法复性,蛋白复性率大于40%,亲和层析纯化后,二聚体蛋白纯度达95%以上,且能诱导C2C12细胞碱性磷酸酶的表达,具有同市售产品相同的细胞活性。结论成功构建了高效表达rhBMP-2的基因工程菌株,复性方法简单且无需对包涵体进行纯化,蛋白复性浓度高,纯化方法简便,大大降低了工业化生产成本。 展开更多

关键词 人骨形成蛋白2 大肠杆菌 包涵体 复性 纯化 生物活性

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谷物中β-葡聚糖的提取、纯化及生物活性研究进展

3

作者 李溢真 陈勉 +6 位作者 孔令斌 王传金 尉茜 牛林林 房晓豫 刘飞 刘峰 《食品与药品》 CAS 2024年第3期I0010-I0014,共5页

谷物是人类重要食物来源之一,β-葡聚糖是一种功能性多糖。本文综述了谷物来源的β-葡聚糖的提取、纯化及生物活性,分析了不同提取方式对β-葡聚糖纯度和产率的影响,以及不同纯化方法的优缺点、分离效果。旨在为深入和全面地开发利用谷... 谷物是人类重要食物来源之一,β-葡聚糖是一种功能性多糖。本文综述了谷物来源的β-葡聚糖的提取、纯化及生物活性,分析了不同提取方式对β-葡聚糖纯度和产率的影响,以及不同纯化方法的优缺点、分离效果。旨在为深入和全面地开发利用谷物中β-葡聚糖资源提供参考。 展开更多

关键词 Β-葡聚糖 谷物 提取 纯化 生物活性

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普鲁兰糖生物合成和分子量调控机制的研究进展 被引量：3

4

作者 刘飞 刁梦奇 +4 位作者 张金华 张林军 袁超 王凤山 凌沛学 《食品与药品》 CAS 2020年第1期72-77,共6页

普鲁兰糖是由出芽短梗霉产生的一种胞外多糖,在食品、药物、化妆品等领域有广泛应用,但其具体的分子合成机制和分子量调控机制尚不明确。本文回顾了近年普鲁兰糖生物合成途径及分子量调控机制研究,并绘制了可能的普鲁兰糖合成途径,总结... 普鲁兰糖是由出芽短梗霉产生的一种胞外多糖,在食品、药物、化妆品等领域有广泛应用,但其具体的分子合成机制和分子量调控机制尚不明确。本文回顾了近年普鲁兰糖生物合成途径及分子量调控机制研究,并绘制了可能的普鲁兰糖合成途径,总结了影响普鲁兰糖产量和分子量的因素。 展开更多

关键词 普鲁兰糖 出芽短梗霉 生物合成途径 分子量调控

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冠突散囊菌发酵产物的抑菌作用及特性研究 被引量：6

5

作者 张芳芳 刘飞 +4 位作者 袁超 高亮 王羽 凌沛学 朱希强 《食品与药品》 CAS 2019年第1期62-65,共4页

目的测定冠突散囊菌发酵液不同溶剂提取物的抑菌作用、抑菌物质的温度及其p H稳定性。方法依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取冠突散囊菌发酵液,采用打孔法测定冠突散囊菌发酵液不同溶剂提取物对细菌、真菌及放线菌的抑菌作用及在不... 目的测定冠突散囊菌发酵液不同溶剂提取物的抑菌作用、抑菌物质的温度及其p H稳定性。方法依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取冠突散囊菌发酵液,采用打孔法测定冠突散囊菌发酵液不同溶剂提取物对细菌、真菌及放线菌的抑菌作用及在不同温度及p H值下的稳定性。结果发酵液乙酸乙酯提取相的抑菌作用较其他提取相强。其中,对枯草芽孢杆菌与白色链霉菌的抑制作用最显著,且该抑菌物质在25～121℃,p H 4～8范围内均能保持稳定的抑菌活性。结论乙酸乙酯能有效提取冠突散囊菌发酵液中的抑菌物质,抑菌物质在一定的温度及p H范围内具有良好的稳定性。 展开更多

关键词 冠突散囊菌 发酵液 抑菌作用 稳定性

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一种7β-羟基类固醇脱氢酶的酶学性质研究及在熊去氧胆酸生物合成中的应用 被引量：2

6

作者 刘英梅 郭新艳 +6 位作者 张秀华 王丽丽 刘飞 张晓元 陈勉 张艳艳 袁丹丹 《食品与药品》 CAS 2022年第4期331-336,共6页

目的高效表达7β-羟基类固醇脱氢酶(7β-HSDH),通过酶学性质研究优化反应条件,用于化学药物中间体7-羰基石胆酸(7K-LCA)向熊去氧胆酸(UDCA)的生物转化。方法以pET-28a为载体,将7β-HSDH基因在E.coli BL21(DE3)中表达,通过菌种发酵、分... 目的高效表达7β-羟基类固醇脱氢酶(7β-HSDH),通过酶学性质研究优化反应条件,用于化学药物中间体7-羰基石胆酸(7K-LCA)向熊去氧胆酸(UDCA)的生物转化。方法以pET-28a为载体,将7β-HSDH基因在E.coli BL21(DE3)中表达,通过菌种发酵、分离、纯化得到高纯度酶蛋白,并对其酶学性质进行测定,包括最适温度、最适pH、热稳定性及金属离子(主要包括Na^(+),K^(+),Cu^(2+),Mg^(2+),Mn^(2+))对酶活的影响。结果7β-HSDH基因可在E.coli BL21(DE3)中可溶性表达,经过分离纯化得到高纯度、高活性的7β-HSDH酶蛋白。酶学性质研究结果表明,100 mmol/L MgCl_(2)条件下酶的比活达83 U/mg,与未添加金属离子的对照53 U/mg相比,酶活提高约57%。反应体系瞬时高温可提高瞬时酶活,有利于缩短反应时间。结论实现了化学药物中间体7K-LCA向UDCA的酶法生物催化,为酶法生物合成熊去氧胆酸的工业化生产提供了新的实验基础。 展开更多

关键词 熊去氧胆酸 7β-羟基类固醇脱氢酶 酶学性质 绿色生物合成

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核桃肽的制备、分离纯化及生物活性研究进展 被引量：2

7

作者 李溢真 陈勉 +8 位作者 袁丹丹 牛林林 袁嘉丽 陈磊 马学彬 王传金 孔令斌 尉茜 刘飞 《食品与药品》 CAS 2023年第3期267-272,共6页

核桃粕是一种优质的植物蛋白资源,利用其制备的核桃肽有抗氧化、降血压等保健功能。但目前核桃粕常被作为废弃物或低价值饲料、肥料,该现状阻碍了核桃产业的发展。因此,利用核桃粕开发生物活性肽等产品,对于实现综合利用、提高副产品附... 核桃粕是一种优质的植物蛋白资源,利用其制备的核桃肽有抗氧化、降血压等保健功能。但目前核桃粕常被作为废弃物或低价值饲料、肥料,该现状阻碍了核桃产业的发展。因此,利用核桃粕开发生物活性肽等产品,对于实现综合利用、提高副产品附加值具有重要意义。本文综述了核桃肽的制备、分离纯化及其生物活性,探讨了核桃肽在食品、医药行业的不同用途,旨在为核桃粕的高效利用和核桃产业发展提供参考信息。 展开更多

关键词 核桃肽 制备 分离纯化 生物活性

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γ-聚谷氨酸体外抗氧化性及抑制透明质酸酶活性的研究 被引量：14

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作者 张天娇 刘霞 +3 位作者 邓观杰 刘飞 朱希强 凌沛学 《食品与药品》 CAS 2017年第3期153-157,共5页

目的考察γ-聚谷氨酸体外抗氧化活性及对透明质酸酶的抑制活性。方法利用DPPH法测定高相对分子质量(Mr)(140万)和低Mr(10万)γ-聚谷氨酸的DPPH自由基清除率曲线,以IC_(50)值作为评价试样清除DPPH自由基能力的指标,并与抗氧化剂Vc磷酸酯... 目的考察γ-聚谷氨酸体外抗氧化活性及对透明质酸酶的抑制活性。方法利用DPPH法测定高相对分子质量(Mr)(140万)和低Mr(10万)γ-聚谷氨酸的DPPH自由基清除率曲线,以IC_(50)值作为评价试样清除DPPH自由基能力的指标,并与抗氧化剂Vc磷酸酯镁和α-熊果苷比较,评价两种Mrγ-聚谷氨酸的抗氧化性;同时利用DNS法测定以上两种M_r的γ-聚谷氨酸对透明质酸酶的抑制活性。结果 140万Mrγ-聚谷氨酸清除DPPH自由基的IC_(50)值为25.5 mg/mL,略优于10万Mrγ-聚谷氨酸(IC_(50) 30.5 mg/mL)。两者清除自由基的效果约为Vc磷酸酯镁(IC_(50) 13 mg/mL)的一半,低于α-熊果苷(IC_(50) 0.016 mg/mL);另外,两种M_rγ-聚谷氨酸在低浓度(0.008%)条件下即可抑制约50%透明质酸酶活性,且其抑制率呈浓度依赖性。结论γ-聚谷氨酸是一种优良的化妆品原料,除具有超强的保湿作用之外,还具有中等程度的抗氧化活性及良好的透明质酸酶抑制活性,表明其在功能性化妆品中具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 Γ-聚谷氨酸 活性 抗氧化 透明质酸酶

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AMH检测技术研究进展 被引量：9

9

作者 张小刚 刘霞 +2 位作者 刘飞 朱希强 凌沛学 《食品与药品》 CAS 2017年第5期372-377,共6页

抗缪勒氏管激素(anti-Mullerian hormone,AMH)因其检测不受月经周期及激素避孕药的影响,近年广泛应用于卵巢储备功能的评价、绝经年龄的预测、卵巢相关疾病的诊断、儿童性别发育异常的诊断及辅助生殖技术(ART)。AMH检测技术的发展日新月... 抗缪勒氏管激素(anti-Mullerian hormone,AMH)因其检测不受月经周期及激素避孕药的影响,近年广泛应用于卵巢储备功能的评价、绝经年龄的预测、卵巢相关疾病的诊断、儿童性别发育异常的诊断及辅助生殖技术(ART)。AMH检测技术的发展日新月异,从最早的免疫细胞化学分析及放射免疫分析技术(RIA),再到酶联免疫吸附测定技术(ELISA),目前已经发展到全自动AMH检测技术。本文主要从AMH检测技术的发展及不同阶段技术的比较、优缺点等方面予以综述。 展开更多

关键词 抗缪勒氏管激素(AMH) 卵巢储备 酶联免疫吸附测定技术 全自动AMH检测技术

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一株产耐热耐碱木聚糖酶菌株的筛选及酶学性质研究 被引量：5

10

作者 张晓元 郝荣华 +3 位作者 刘飞 陈勉 朱希强 凌沛学 《食品与药品》 CAS 2017年第2期77-83,共7页

目的对分离得到的一株产耐热耐碱木聚糖酶细菌ZH-07进行鉴定,并对其产木聚糖酶进行酶学性质分析。方法根据培养基上透明圈大小筛选产酶量高的菌株,通过菌落形态、生理生化特征及16S rDNA序列同源性比对等分析鉴定菌株种属。并通过一系... 目的对分离得到的一株产耐热耐碱木聚糖酶细菌ZH-07进行鉴定,并对其产木聚糖酶进行酶学性质分析。方法根据培养基上透明圈大小筛选产酶量高的菌株,通过菌落形态、生理生化特征及16S rDNA序列同源性比对等分析鉴定菌株种属。并通过一系列单因素试验、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和薄层色谱(TLC)进行酶学性质研究。结果 ZH-07菌株鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。该菌能以农业废弃物玉米芯为碳源,液体发酵产耐热耐碱木聚糖酶,50℃培养36 h,木聚糖酶的最高酶活性达1664.9 U/m L;木聚糖酶的相对分子质量(Mr)约24×10~3,无纤维素酶活性;酶促反应最适温度为70℃,最适pH 10,70℃、pH 10处理3 h仍保持64.7%的活性。结论 Bacillus subtilis ZH-07产木聚糖酶有较好的热稳定性和碱稳定性,在低聚木糖工业生产中有巨大应用潜力。 展开更多

关键词 木聚糖酶 芽孢杆菌 耐碱耐热 分离 鉴定

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密码子优化提高海藻糖合成酶基因在大肠杆菌中的表达水平 被引量：9

11

作者 张晓元 郝荣华 +3 位作者 刘飞 袁丹丹 陈勉 凌沛学 《食品与药品》 CAS 2019年第1期1-6,共6页

目的优化灰色链霉菌海藻糖合成酶(Trehalose synthase,TreS)基因密码子,提高海藻糖合成酶大肠杆菌基因工程菌株表达水平。方法基于大肠杆菌基因组密码子偏好数据表对tres基因进行密码子优化得基因tres1。基因工程法构建分别含tres及tres... 目的优化灰色链霉菌海藻糖合成酶(Trehalose synthase,TreS)基因密码子,提高海藻糖合成酶大肠杆菌基因工程菌株表达水平。方法基于大肠杆菌基因组密码子偏好数据表对tres基因进行密码子优化得基因tres1。基因工程法构建分别含tres及tres1基因的表达载体pET-26b(+)-tres和pET-26b(+)-tres1,CaCl2法转入大肠杆菌BL21(DE3)获得表达海藻糖合成酶的大肠杆菌基因工程菌株,采用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对摇瓶发酵粗酶液进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析及酶活性测定以确定表达水平。结果 1707 bp海藻糖合成酶tres基因共优化碱基序列268 bp,优化后序列的GC含量由65.8%降低至54.4%,密码子适应指数(CAI)由0.37提升至0.97,SDS-PAGE及酶活性分析表明,含pet-26b(+)-tres1表达载体的大肠杆菌基因工程菌株海藻糖合成酶蛋白表达量高,酶活性比含pet-26b(+)-tres工程菌提高60.3%以上。结论密码子优化可有效提高海藻糖合成酶TreS蛋白在大肠杆菌中的表达,为海藻糖合成酶的异源高效表达提供了重要参考。 展开更多

关键词 海藻糖合成酶 密码子 海藻糖 基因表达

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可食用多糖复合防腐保鲜剂在冷鲜肉中的应用研究 被引量：4

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作者 刘英梅 李珍爱 +5 位作者 刘飞 朱希强 凌沛学 苏移山 李海军 张秀华 《食品与药品》 CAS 2018年第2期114-117,共4页

目的开发一种应用于肉类保鲜的天然、绿色、可食用复合防腐保鲜剂。方法以市售冷鲜猪肉为研究对象,利用普鲁兰多糖成膜的特点,使用纳他霉素、乳酸链球菌素作为主要防腐保鲜剂,柠檬酸作为防腐保鲜增强剂,以色泽、气味、pH、菌落总数和挥... 目的开发一种应用于肉类保鲜的天然、绿色、可食用复合防腐保鲜剂。方法以市售冷鲜猪肉为研究对象,利用普鲁兰多糖成膜的特点,使用纳他霉素、乳酸链球菌素作为主要防腐保鲜剂,柠檬酸作为防腐保鲜增强剂,以色泽、气味、pH、菌落总数和挥发性盐基氮(TVB-N)作为评价指标,优化防腐保鲜剂复配方案。结果最优复配配方为:乳酸链球菌素(0.2 g/L),纳他霉素(0.1 g/L),普鲁兰多糖(5 g/L),柠檬酸(10 g/L)。结论本研究为冷鲜肉防腐保鲜提供了一种经济、安全、有效、实用的配方。 展开更多

关键词 普鲁兰多糖 冷鲜肉 复合保鲜剂

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益生元降血脂功效研究进展 被引量：3

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作者 袁超 张林军 +4 位作者 师景双 刁梦奇 葛萍 刘飞 张金华 《食品与药品》 CAS 2020年第5期416-420,J0001,J0002,共7页

益生元因安全有效,无毒副作用的特点,其降血脂功效受到越来越多的关注。本文综述了近年益生元在降血脂功效和作用机制方面的研究进展,并对益生元在降血脂方面的应用前景进行了展望。

关键词 益生元 高脂血症 胆固醇 甘油三酯

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一步析出法制备鱼鳞柠檬酸钙

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作者 陈勉 陈磊 +4 位作者 刘飞 侯重文 于林艳 朱希强 凌沛学 《食品与药品》 CAS 2017年第1期13-17,共5页

目的建立可应用于工业化生产的鱼鳞柠檬酸钙制备工艺。方法通过降低柠檬酸用量,建立鱼鳞钙质溶出和析出一步完成的制备工艺,并通过滴定法和电感耦合等离子体发射光谱法检测了所得柠檬酸钙和微量镁、磷和锌含量。结果柠檬酸用量和总液量... 目的建立可应用于工业化生产的鱼鳞柠檬酸钙制备工艺。方法通过降低柠檬酸用量,建立鱼鳞钙质溶出和析出一步完成的制备工艺,并通过滴定法和电感耦合等离子体发射光谱法检测了所得柠檬酸钙和微量镁、磷和锌含量。结果柠檬酸用量和总液量减少,并省却加碱中和环节,柠檬酸钙收率提高了88.3%,其中柠檬酸钙含量95.24%,微量元素镁含量0.03%,磷含量0.47%,锌含量10.9μg/g。结论实现了通过鱼鳞一步简捷制备高含量柠檬酸钙的目的,产品天然复合微量镁、磷和锌元素,工艺适合工业化规模生产用于补钙的食品强化剂。 展开更多

关键词 鱼鳞 柠檬酸钙 总液量 收率 含量

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鱼源胶原肽特征质量指标检测分析

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作者 牛林林 袁丹丹 +7 位作者 陈磊 蔡久庆 刘娟 张明 陈勉 张晓元 张艳艳 刘飞 《食品与药品》 CAS 2021年第5期391-396,共6页

目的鱼源胶原肽的市售样品与实验室研制样品特征质量指标的对比。方法GPC色谱法测定鱼源胶原蛋白肽相对分子质量(Mr)和OPA柱前衍生法检测氨基酸含量。结果市售样品胶原肽Mr小于1000的占比约为40%,特征性氨基酸羟脯氨酸的含量50~150μg/... 目的鱼源胶原肽的市售样品与实验室研制样品特征质量指标的对比。方法GPC色谱法测定鱼源胶原蛋白肽相对分子质量(Mr)和OPA柱前衍生法检测氨基酸含量。结果市售样品胶原肽Mr小于1000的占比约为40%,特征性氨基酸羟脯氨酸的含量50~150μg/ml,比例在3%~7%;实验室研制的胶原肽Mr小于1000的占比约为88.47%,特征性氨基酸羟脯氨酸的含量为228.71μg/ml,约为11.71%。结论鱼源胶原肽产品之间存在质量差异,与市售样品肽相比,本实验室研制的胶原肽低分子量占比更高,特征性氨基酸羟脯氨酸含量更高。 展开更多

关键词 鱼源胶原肽 相对分子质量 氨基酸 羟脯氨酸

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