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题名2种诱导iPSC向神经干细胞分化方法的比较
被引量：3
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作者
杨坦
刘华
汪运山
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机构
山东省医学科学院基础医学研究所
山东大学附属济南市中心医院中心实验室
山东省移植与组织工程研究中心
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出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期188-192,共5页
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基金
973计划资助项目(No.2012CB966503
No.2012CB966504)
国家青年科学基金资助项目(No.81200950)
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文摘
目的:整体比较2种促进诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSC)向神经干细胞(neural stem cells,NSC)分化的方法,确定一种稳定、高效的获得NSC的方法,并对NSC进行系统鉴定。方法:方法A:SB431542和drosomophorin的浓度均为5μmmol/L,诱导初始密度100%;方法 B:SB431542的浓度为5 mmol/L,drosomophorin的浓度为1 mmol/L,诱导初始密度为40%。比较及鉴定方法:镜下观察诱导获得NSC的状态;realtime PCR比较神经干细胞相关基因Pax6、nestin、Sox1、Sox2等表达量;流式细胞术分析诱导第16天Pax6阳性率;免疫荧光定性分析神经干细胞相关蛋白的表达及其自发分化的能力。结果:方法 A获得的NSC悬起后成球趋势明显,圆形,透明;方法 B诱导获得NSC形状不规则,色灰暗。Real-time PCR结果证明方法 A诱导获得的细胞神经干细胞相关基因的表达量高于方法 B。流式细胞术分析证明第16天,PAX6的阳性率,方法 A高于方法 B。经鉴定,方法 A获得的神经干细胞高表达Pax6、nestin、Sox2等基因自发分化30 d,形成明显的神经纤维束,表达TUJ-1、MAP2及GFAP等神经元和胶质细胞的特异性标志物。结论:方法 A整体优于方法 B,我们推荐方法 A作为诱导i PSC向神经干细胞分化的方法。
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关键词
诱导性多能干细胞
分化
神经干细胞
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Keywords
Induced pluripotent stem cells
Differentiation
Neural stem cells
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分类号
R33-3
[医药卫生—人体生理学]
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