免疫刺激剂CpGODN防治烟曲霉菌引起的变态反应性结膜炎的实验研究

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作者 李思媛 赵格 +3 位作者 李长优 杨玲玲 陈豪 王宜强 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期308-313,共6页

背景研究证实免疫调节剂CpGODN对蛋白类过敏原引起的变态反应性结膜炎有防治作用，但其对真菌引发的变态反应性结膜炎是否有类似作用尚不清楚。目的研究局部应用CpGODN是否能够预防或减轻烟曲霉菌引发的变态反应性结膜炎。方法建立烟曲... 背景研究证实免疫调节剂CpGODN对蛋白类过敏原引起的变态反应性结膜炎有防治作用，但其对真菌引发的变态反应性结膜炎是否有类似作用尚不清楚。目的研究局部应用CpGODN是否能够预防或减轻烟曲霉菌引发的变态反应性结膜炎。方法建立烟曲霉菌变态反应性结膜炎小鼠模型，用CpGODN或对照ODN（GpCODN）对其进行干预，PBS干预作为阴性对照。实验分为预防实验（模型动物在变态反应原再次激发前给药）和治疗实验（激发后给药），对小鼠眼部临床症状进行评分。取小鼠结膜组织进行组织病理学检查，并计数标本中的炎性细胞。应用实时定量聚合酶链反应（real-timePCR）法动态观察小鼠结膜组织中TLR4mRNA的变化；将烟曲霉菌免疫原与眼部回流淋巴结和脾脏的细胞进行共培养，流式细胞分析培养细胞中调节性T淋巴细胞的比例和活化状态。结果预防实验中，结膜下注射CpGODN组与GpCODN对照组、PBS对照组比较，小鼠眼部过敏症状评分差异均无统计学意义（P〉0．05）；CpGODN组与GpCODN对照组、PBS对照组比较结膜组织中性粒细胞数降低，差异均有统计学意义（21．25±11．59vs30．75-4-_11．44，21．25±11．59vs69．00±9．90；t=5．140，t=3．210，P〈0．01）；TLR4mRNA表达上调。在治疗实验中，CpGODN组与GpCODN对照组、模型对照组比较，跟部过敏症状评分降低（t=4．000，t=2．750，P〈O．05）；中性粒细胞数显著减少（t=4．870，t=3．829，P〈0．01）。CpGODN治疗组小鼠眼部回流淋巴结CD4^＋CD25^＋细胞以及CD4^＋CD25^＋CD69’细胞所占的比例均显著高于GpCODN组和PBS对照组（P〈0．05）。结论CpGODN通过上调结膜TLR4的表达、活化Treg细胞来预防和治疗烟曲霉菌引起的变态反应性结膜炎，预先结膜下注射和点眼均可减轻小鼠眼部过敏症状和晚期结膜炎性细胞的聚集。 展开更多

关键词 烟曲霉菌 变态反应性结膜炎 CpG ODN 调节性T淋巴细胞

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左氧氟沙星白芨多糖滴眼液的眼部药物代谢动力学研究 被引量：3

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作者 杨丽娜 辛萌 吴祥根 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第5期422-426,共5页

目的评价5g.L-1左氧氟沙星白芨多糖滴眼液(左氧白芨滴眼液)滴兔眼后,药物在眼部的药物代谢动力学,以及与5g.L-1左氧氟沙星滴眼液(可乐必妥)比较其相对生物利用度。方法新西兰大白兔64只(128眼),平均分为2组,实验组给予左氧白芨滴眼液50... 目的评价5g.L-1左氧氟沙星白芨多糖滴眼液(左氧白芨滴眼液)滴兔眼后,药物在眼部的药物代谢动力学,以及与5g.L-1左氧氟沙星滴眼液(可乐必妥)比较其相对生物利用度。方法新西兰大白兔64只(128眼),平均分为2组,实验组给予左氧白芨滴眼液50μL滴眼,对照组给予可乐必妥50μL滴眼。分别于不同时间点取房水和角膜,应用高效液相色谱法测定左氧氟沙星浓度。采用DASver2.0药物代谢动力学程序计算各药物代谢动力学参数。结果所建立的高效液相色谱法能将左氧氟沙星与其他杂质很好地分离,其最低定量浓度为53.95μg.L-1,组织中回收率稳定。左氧白芨滴眼液与可乐必妥在房水中的半衰期(t1/2)分别为90.512min和106.480min,达峰时间(tmax)分别为45.000min和60.000min,达峰浓度(Cmax)分别为2318.973μg.L-1和1111.457μg.L-1(P<0.05);角膜中t1/2分别为109.400min和64.956min,tmax分别为10.000min和15.000min,Cmax分别为23.012μg.g-1和16.389μg.g-1。左氧白芨滴眼液组房水和角膜中药物质量浓度曲线下面积(AUC0-240)分别是可乐必妥组的1.79倍和1.37倍。结论左氧白芨滴眼液较可乐必妥生物利用度显著提高。 展开更多

关键词 左氧氟沙星 白芨多糖 药物代谢动力学 生物利用度

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眼部疾病中上皮细胞转型相关信号通路的研究进展 被引量：1

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作者 马健利 刘廷 董晓光 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2010年第7期678-683,共6页

上皮细胞间质转型(EMT)是一种基本的病理生理现象,参与胚胎发育、组织重构和肿瘤转移等过程,以上皮细胞表型的缺失及间质特性的获得为重要特征,主要表现为具有极性的上皮细胞转化成具有活动能力、能够在细胞基质间自由移动的间质细胞。... 上皮细胞间质转型(EMT)是一种基本的病理生理现象,参与胚胎发育、组织重构和肿瘤转移等过程,以上皮细胞表型的缺失及间质特性的获得为重要特征,主要表现为具有极性的上皮细胞转化成具有活动能力、能够在细胞基质间自由移动的间质细胞。研究发现,各种刺激通过多种不同的信号途径诱导上皮细胞发生EMT是许多眼部疾病,如视网膜母细胞瘤、创伤后白内障、视网膜新生血管形成等重要的病理变化过程。就眼部疾病中与EMT有关的信号通路进行综述。 展开更多

关键词 上皮细胞 间质细胞 转型 细胞运动 信号转导

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三种常用非甾体类抗炎滴眼液对人角膜上皮细胞的毒性研究 被引量：17

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作者 曲明俐 段豪云 +2 位作者 王瑶 王茜 周庆军 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期627-632,共6页

背景 双氯芬酸钠滴眼液、普拉洛芬滴眼液和溴芬酸钠滴眼液是眼科临床常用的非甾体类抗炎药（NSAIDs）,长期应用可导致人角膜上皮细胞（HCECs）的损伤,但3种滴眼液导致HCECs的损伤程度及滴眼液中添加物的细胞毒性尚不清楚. 目的 评价双... 背景 双氯芬酸钠滴眼液、普拉洛芬滴眼液和溴芬酸钠滴眼液是眼科临床常用的非甾体类抗炎药（NSAIDs）,长期应用可导致人角膜上皮细胞（HCECs）的损伤,但3种滴眼液导致HCECs的损伤程度及滴眼液中添加物的细胞毒性尚不清楚. 目的 评价双氯芬酸钠滴眼液、普拉洛芬滴眼液和溴芬酸钠滴眼液及其相应原料药对HCECs的毒性,明确其细胞毒性的主要来源. 方法 常规培养HCECs,分别在培养液中添加1∶1、1∶2、1∶5、1∶10稀释的滴眼液或原料药,使最终质量分数分别为0.10％、0.05％、0.02％和0.01％.采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组药物处理后HCECs的增生率;3种滴眼液均稀释至质量浓度0.002％（1∶50）,以Transwell法检测各组药物处理后HCECs迁移率;采用乳酸脱氢酶（LDH）检测法测定各组药物处理后HCECs损伤程度.结果 3种滴眼液对HCECs的毒性作用具有剂量依赖性,差异均有统计学意义（均P=0.00）,其中双氯芬酸钠滴眼液对HCECs增生、迁移和损伤影响最大,溴芬酸钠滴眼液对HCECs损伤程度最小,差异均有统计学意义（增生：F药物=20.25,P=0.00;迁移：F=103.43,P=0.00;损伤：F药物=164.16,P=0.00）.与滴眼液相比,原料药的细胞毒性作用普遍较小,其中普拉洛芬原料药对HCECs增生、迁移和损伤影响最小,差异均有统计学意义（增生：F药物=332.27,P=0.00;迁移：F=23.02,P=0.00;损伤：F药物=154.83,P=0.00）. 结论 双氯芬酸钠滴眼液、普拉洛芬滴眼液和溴芬酸钠滴眼液中以双氯芬酸钠对角膜上皮的毒性作用最大;3种药物的细胞毒性来源是添加物本身或原料药与添加物综合作用的结果. 展开更多

关键词 非甾体抗炎滴眼液 细胞毒性 原料药 添加物

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关注哺乳动物晶状体再生及“晶状体干细胞”的研究 被引量：2

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作者 谢立信 张辉 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期481-484,共4页

一些哺乳动物的晶状体摘出后，在囊袋存在的情况下可以再生出新的晶状体。目前普遍认为囊袋内不能被完全清除而残留的晶状体上皮细胞（LECs）是晶状体再生的来源。但是哺乳动物的晶状体再生并非晶状体发育的简单重复，残余LECs的无序增... 一些哺乳动物的晶状体摘出后，在囊袋存在的情况下可以再生出新的晶状体。目前普遍认为囊袋内不能被完全清除而残留的晶状体上皮细胞（LECs）是晶状体再生的来源。但是哺乳动物的晶状体再生并非晶状体发育的简单重复，残余LECs的无序增生、移行和转化会影响再生晶状体的透明性。大量研究围绕LECs异常增生的机制进行，而近年来“晶状体干细胞”理论被逐渐提出。总结国内外关于哺乳动物晶状体再生研究的现状，提出一些观点和看法，希望为临床预防后发性白内障以及对其进行药物治疗提供新的靶点和思路。 展开更多

关键词 晶状体 再生 干细胞 后发性白内障 哺乳动物

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外培养组织工程细胞膜片重建眼表研究进展 被引量：1

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作者 王付燕(综述) 周庆军(审校) 谢立信(审校) 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期887-891,共5页

角膜缘干细胞是角膜上皮细胞再生的来源,是维持眼表稳态的关键。近年来,随着对成体干细胞认识的加深以及组织工程、生物材料及细胞培养技术的发展,体外培养的细胞膜片移植,包括角膜缘和口腔黏膜上皮细胞膜片移植进行眼表重建的基础研究... 角膜缘干细胞是角膜上皮细胞再生的来源,是维持眼表稳态的关键。近年来,随着对成体干细胞认识的加深以及组织工程、生物材料及细胞培养技术的发展,体外培养的细胞膜片移植,包括角膜缘和口腔黏膜上皮细胞膜片移植进行眼表重建的基础研究获得了一定的进展,在临床应用中也得到了较好的治疗效果,但对眼表重建的临床效果和移植细胞的体内转归方面仍无定性的结论。本文主要对利用组织工程技术构建的自体或异体角膜缘上皮细胞、口腔黏膜上皮细胞膜片移植重建眼表的基础研究进展、临床应用情况及移植细胞体内转归的进展进行介绍和比较,以期为该领域的研究提供有益的探索方向。 展开更多

关键词 角膜缘 上皮细胞 角膜 口腔黏膜上皮细胞 眼表重建 角膜缘干细胞缺乏

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角膜基质细胞Nrf2-ARE信号通路活化缺陷在圆锥角膜发病中的作用 被引量：5

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作者 边江 曲明俐 +3 位作者 王瑶 杨玲玲 史伟云 周庆军 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期109-114,共6页

背景 氧化应激在圆锥角膜发病过程中具有重要的作用,核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件（Nrf2-ARE）信号通路是介导细胞氧化应激反应的关键通路,但其在圆锥角膜发病中的作用及其机制鲜见报道. 目的 研究正常角膜与圆锥角膜基质细胞中Nrf... 背景 氧化应激在圆锥角膜发病过程中具有重要的作用,核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件（Nrf2-ARE）信号通路是介导细胞氧化应激反应的关键通路,但其在圆锥角膜发病中的作用及其机制鲜见报道. 目的 研究正常角膜与圆锥角膜基质细胞中Nrf2-ARE信号通路活化的区别及Nrf2-ARE通路对角膜基质降解酶表达水平的影响,探讨圆锥角膜发病的具体机制.方法 于2012年11月至2013年6月在青岛眼科医院收集圆锥角膜患者术中的角膜组织样本和正常供体角膜样本,采用中性蛋白酶和胶原蛋白酶联合消化法分离角膜基质细胞并用含质量分数10％胎牛血清的DMEM/F12培养基培养细胞,待细胞80％融合后在培养基中加入200 μmol/L H2O2处理1h以模拟氧化应激微环境.采用DCFH-DA荧光底物孵育法检测细胞内活性氧簇（ROS）含量,分别采用Western blot和实时定量PCR法检测细胞核内Nrf2mRNA及其蛋白、Nrf2-ARE信号通路下游抗氧化蛋白、尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）、uPA受体（uPAR） mRNA及其蛋白的相对表达水平,采用明胶酶谱法检测细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性.结果 正常培养条件下,圆锥角膜基质细胞中ROS荧光强于正常角膜基质细胞,细胞核内Nrf2蛋白表达水平均明显高于正常角膜基质细胞,差异有统计学意义（t=18.155,P＜0.01）,但在H2O2处理条件下,圆锥角膜基质细胞中ROS荧光强度明显强于正常角膜基质细胞,且圆锥角膜基质细胞核内Nrf2表达水平明显低于正常培养条件下的圆锥角膜基质细胞,差异有统计学意义（t=62.123,P＜0.01）.正常培养条件下,圆锥角膜基质细胞间还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化还原酶1（NQO-1）、血红素氧合酶1（HO-1）、超氧化物歧化酶2（SOD2） mRNA及其蛋白的相对表达量明显低于正常角膜基质细胞,差异均有统计学意义（均P＜0.01）;但在H2O2培养条件下2种细胞间未见明显变化（NQO-1：t=2.209,P=0.092;HO-1：t=0.293,P=0.784;SOD2：t=0.749,P=0.495）;圆锥角膜基质细胞uPA、uPAR表达量和MMP-2活性均明显高于正常角膜基质细胞,差异均有统计学意义（t=19.164、15.458、4.818,均P＜0.01）. 结论 圆锥角膜基质细胞在Nrf2-ARE信号通路活化方面存在缺陷,且这种缺陷与其表达基质降解酶的水平密切相关,说明该通路异常可能是圆锥角膜发病的机制之一. 展开更多

关键词 圆锥角膜 核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件信号通路 角膜基质细胞 氧化应激

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改良角膜表面镜片术法建立兔曲霉菌性角膜炎动物模型 被引量：5

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作者 刘廷 徐园园 +1 位作者 陈豪 谢立信 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期101-106,共6页

背景真菌性角膜感染动物模型是研究真菌性角膜炎发病机制的工具，目前的制作方法主要有划痕法、基质注射法和角膜表面镜片术法，但均有其不足之处。目的探讨一种简便、易操作的改良兔曲霉菌性角膜炎动物模型制作方法。方法成年新西兰白... 背景真菌性角膜感染动物模型是研究真菌性角膜炎发病机制的工具，目前的制作方法主要有划痕法、基质注射法和角膜表面镜片术法，但均有其不足之处。目的探讨一种简便、易操作的改良兔曲霉菌性角膜炎动物模型制作方法。方法成年新西兰白兔18只，采用烟曲霉菌孢子附贴滤纸片的改良角膜表面镜片术法制作真菌性角膜炎动物模型。将浸有10^8孢子／ml（10^8孢子／ml组，6只）或10^6孢子／ml（106孢子／ml组，6只）真菌混悬液的滤纸贴敷于去上皮的角膜基质并用角膜接触镜覆盖，将浸有生理盐水的滤纸贴敷于另6只兔眼角膜作为对照组。分别于造模后3、7、14d裂隙灯下观察眼前节症状，参照Dong的标准进行症状评分。制备角膜刮片并用质量分数10％KOH和荧光白染色在荧光显微镜下检测真菌菌丝，角膜组织切片分别行苏木精-伊红和过碘酸希夫染色，光学显微镜下观察角膜形态学改变和菌丝生长情况。对感染组织进行真菌培养以验证模型的质量。结果10^8孢子／ml组和10^6孢子／ml组真菌性角膜炎模型成功者分别为6眼和4眼，裂隙灯检查表明造模3d后10^8孢子／ml组眼前节症状明显重于10^6孢子／ml组，且随着时间的延长，炎性损伤逐渐转向增生期。造模后3d和7d，2组感染的兔眼症状评分明显高于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．01），10^8孢子／ml组兔眼的症状评分均明显高于10^6孢子／ml组，差异有统计学意义（P〈0．01），造模后14d，10^8孢子／ml组兔眼的症状评分明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。造模后3d和7d，2组兔眼角膜刮片中均可见真菌菌丝。角膜组织病理学检查显示，造模3d和7d后10^8孢子／ml组可见炎性细胞浸润和角膜基质细胞坏死，并可见真菌菌丝，造模后14d可见新生血管长入。10^6孢子／ml组炎症轻于10^8孢子／ml组。真菌培养结果表明，造模后3d和7d时10^8孢子／ml组均见菌丝生长，而10^6孢子／ml组仅在造模3d时可见菌丝生长。结论改良角膜表面镜片术法可成功制备兔曲霉菌性角膜炎动物模型，是一种简便、易于操作的真菌性角膜炎动物模型制作方法。 展开更多

关键词 曲霉菌 真菌性角膜炎 动物模型 角膜表面镜

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ROCK抑制剂Y-27632在角膜保存时对角膜缘干细胞活性的促进作用 被引量：2

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作者 王瑶 段豪云 +2 位作者 杨玲玲 曲明俐 周庆军 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期787-792,共6页

背景 角膜缘干细胞（LSCs）对维持角膜上皮的稳定和角膜组织透明性有重要作用.Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）抑制剂Y-27632能够促进人胚胎干细胞、角质上皮细胞等的增生,减少细胞凋亡.目的 探讨Y-27632对离体兔角膜保存和体外LSCs扩... 背景 角膜缘干细胞（LSCs）对维持角膜上皮的稳定和角膜组织透明性有重要作用.Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）抑制剂Y-27632能够促进人胚胎干细胞、角质上皮细胞等的增生,减少细胞凋亡.目的 探讨Y-27632对离体兔角膜保存和体外LSCs扩增能力的影响. 方法 在细胞培养基MEM中加入质量分数12.5％硫酸软骨素、质量分数10.0％低分子右旋糖酐、20.0 mg/L地塞米松、100 mg/L妥布霉素注射液、9.5 g/L Hepes,使用时添加0.375 mg/L L-谷氨酰胺,制备成角膜活性保存液.将新西兰大白兔的角膜组织片分别置于含或不含Y-27632的角膜活性保存液中保存4、7、14d,采用质量分数0.25％锥虫蓝和质量分数0.2％茜素红染色法观察角膜内皮细胞密度及形态,采用Giemsa染色法并使用Image J图像分析软件计数克隆球数量和LSCs活性,计算LSCs存活率和克隆形成效率. 结果 角膜片保存4d时,Y-27632保存液组和单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞形态无明显差别,角膜片保存7d时,Y-27632保存液组角膜内皮细胞形态仍保持规则的六边形,而单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞的细胞膜轻微皱缩,少数细胞体积变大.角膜片保存14 d时单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞可见较多的茜素红斑.单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞计数为（2 262±75）/mm2,Y-27632保存液组角膜内皮细胞计数为（2 425 ±95）/mm2,差异有统计学意义（P＜0.001）.新鲜角膜片和角膜片保存4d时,Y-27632保存液组和单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆球均较大,其内细胞数较多,而保存7d和14 d时,与Y-27632保存液组比较,单纯角膜中期保存液组LSCs克隆球直径明显缩小.新鲜分离的角膜片和角膜片保存4d时,Y-27632保存液组与单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆形成率和角膜上皮细胞存活率的差异均无统计学意义（均P＞0.05）;角膜片保存7d和14d时,角膜缘上皮细胞的活性率分别为（73.00±2.12）％和（56.00±0.71）％,明显高于单纯角膜中期培养液组的（66.00±4.00）％和（49.00±0.71）％,差异均有统计学意义（t=3.098,P=0.018;t=9.798,P=0.000）;角膜片保存7d和14 d时,Y-27632保存液组与单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆形成效率分别为（11.05±0.21）％和（3.10±1.97）％,明显高于单纯角膜中期保存液组中的（2.05±1.20）％和（0.40±0.14）％,差异均有统计学意义（t=18.107,P=0.000;t=3.184,P=0.017）.结论角膜保存液中添加Y-27632可明显提高离体角膜保存的效果,同时可维持LSCs的活性及克隆形成能力.Y-27632可作为角膜保存液的有效添加成分。 展开更多

关键词 Rho相关激酶/拮抗剂& 抑制剂 细胞培养 角膜缘/细胞学 干细胞 角膜上皮 细胞生存/药物作用 角膜保存 兔

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三种抗生素的抗菌活性及角膜上皮细胞毒性比较 被引量：3

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作者 王瑶 陈豪 +2 位作者 王茜 杨玲玲 周庆军 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2010年第6期496-500,共5页

目的比较左氧氟沙星、加替沙星和莫西沙星的抗菌活性及对角膜上皮细胞的毒性作用。方法细菌与细胞共孵育1h后,抗生素处理1h,行荧光染色和CFU计数;MTT法和划痕法检测细胞的增生和迁移能力,评价3种抗生素的细胞毒性作用。结果 3种抗生素... 目的比较左氧氟沙星、加替沙星和莫西沙星的抗菌活性及对角膜上皮细胞的毒性作用。方法细菌与细胞共孵育1h后,抗生素处理1h,行荧光染色和CFU计数;MTT法和划痕法检测细胞的增生和迁移能力,评价3种抗生素的细胞毒性作用。结果 3种抗生素的抗菌效果均非常显著,其中莫西沙星对金黄色葡萄球菌和左氧氟沙星对绿脓杆菌的抑菌活性最强,对凝固酶阴性葡萄球菌和黏质沙雷菌的抗菌效果差异无统计学意义;在质量浓度低于125mg/L时,左氧氟沙星的毒性明显低于莫西沙星和加替沙星。结论莫西沙星、左氧氟沙星和加替沙星3种抗生素在抗菌活性和上皮细胞毒性方面存在一定差异。 展开更多

关键词 抗菌活性 药物/毒性 左氧氟沙星 加替沙星 莫西沙星

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神经肽P物质与神经营养性角膜病变的关系及其应用现状 被引量：3

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作者 万珊珊(综述) 周庆军 谢立信(审校) 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期233-237,共5页

神经营养性角膜病变是由多种因素损伤角膜感觉神经,导致角膜知觉减退,进而引起角膜营养障碍和炎症性改变,其常表现为复发性或持续性的角膜上皮缺损、角膜创伤愈合的延迟,产生角膜溃疡,甚至穿孔。目前临床靶向性治疗神经修复仍有一定难度... 神经营养性角膜病变是由多种因素损伤角膜感觉神经,导致角膜知觉减退,进而引起角膜营养障碍和炎症性改变,其常表现为复发性或持续性的角膜上皮缺损、角膜创伤愈合的延迟,产生角膜溃疡,甚至穿孔。目前临床靶向性治疗神经修复仍有一定难度。P物质作为一种神经递质,在眼部神经、角膜上皮细胞、角膜基质细胞及多种免疫细胞中广泛表达,通过启动胞内信号通路产生相应生物学功能。近年来,随着P物质相关研究增多,神经营养性角膜病变的治疗方式逐渐发生改变。本文回顾神经营养性角膜病变的临床特征及发病机制,从感染、手术及全身性疾病导致神经营养性角膜病变方面,总结神经肽P物质与神经营养性角膜病变关系及其应用前景。 展开更多

关键词 神经营养性角膜病变 P物质 疱疹病毒感染 眼部手术 糖尿病

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沉默信号调控因子1在1型糖尿病模型小鼠角膜和三叉神经节中的表达及意义 被引量：2

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作者 王晔 赵晓雯 +1 位作者 谢立信 于洋 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期982-986,共5页

背景糖尿病是引发角膜神经病变的高危因素之一。沉默信号调控因子1（Sirtl）在糖代谢、脂代谢、胰岛素分泌调节中发挥着重要的作用，并与神经系统性疾病密切相关。目前，关于Sirtl与糖尿病性角膜神经病变的关系尚不完全清楚。目的探讨Si... 背景糖尿病是引发角膜神经病变的高危因素之一。沉默信号调控因子1（Sirtl）在糖代谢、脂代谢、胰岛素分泌调节中发挥着重要的作用，并与神经系统性疾病密切相关。目前，关于Sirtl与糖尿病性角膜神经病变的关系尚不完全清楚。目的探讨Sirtl在1型糖尿病C57BL／6-Ins2Aklta／J小鼠角膜及三叉神经节中的表达及其意义，探讨Sirtl与糖尿病性角膜神经病变的关系。方法取C57BL／6-Ins2Aklta／J雄性小鼠与同窝出生的野生型C57BL／6小鼠各8只，分别作为1型糖尿病模型组和正常对照组。两组小鼠均在12月龄时过量麻醉处死，处死前检测空腹血糖、测体质量。取小鼠三叉神经节和角膜组织，采用苏木精-伊红染色法检测两组小鼠三叉神经节和角膜组织的组织病理学变化，用免疫组织化学法检测三叉神经节和角膜组织中Sirtl蛋白的表达和定位；用荧光定量PCR法检测Sirtl mRNA在三叉神经节和角膜组织中的表达；采用Westernblot检测两组小鼠三又神经节和角膜组织中Sirtl蛋白的相对表达量，并进行比较。结果C57BIM6-Ins2Akita／J小鼠三叉神经节细胞大小不均，细胞排列较为疏松，神经纤维排列紊乱，角膜上皮细胞层数减少，角膜变薄；野生型C57BL／6小鼠神经节细胞排列紧密，细胞形态均一，神经纤维排列整齐。免疫组织化学法检测结果显示，C57BL／6-Ins2Akita／J小鼠角膜中Sirtl蛋白的表达强度低于野生型C57BL／6小鼠。荧光定量PCR结果显示，SirtlmRNA在C57BL／6-Ins2Akita／J小鼠角膜表达的灰度值显著低于野生型C57BL／6小鼠（0．56±O．03VS．0．98±0．13），差异有统计学意义（t=5．853，P=0．010）；C57BL／6-Ins2Akita／J小鼠三叉神经节中SirtlmRNA表达的灰度值为2．45±0．18，低于野生型C57BL／6小鼠的2．51±0．22，但差异无统计学意义（t=0．587，P=0．599）。Westernblot检测结果显示，C57BL／6-Ins2Akita／J小鼠角膜中Sirtl蛋白的表达显著低于野生型C57BL／6小鼠（0．780±0．017vs．1．300±0．012），差异有统计学意义（t=33．140，P=0．001）；两组小鼠间三叉神经节中Sial蛋白的表达差异无统计学意义（1．100±0．015 vs．1．110±0．017）（t=0．430，P=0．709）。结论12月龄C57BL／6一Ins2Akita／J小鼠角膜的神经和结构发育异常，Sirtl参与糖尿病角膜病变的发病，有可能是潜在的靶点分子。 展开更多

关键词 1型糖尿病 沉默信号调控因子1 角膜 三叉神经节 动物模型

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氧诱导小鼠视网膜新生血管发生中乙酰肝素酶及串珠素的表达 被引量：2

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作者 万磊 董晓光 +2 位作者 刘廷 程钧 谢立信 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2010年第3期210-215,共6页

目的研究小鼠视网膜新生血管发生过程中乙酰肝素酶(HPA)及其作用底物串珠素在视网膜中的表达。方法将65只新生幼鼠于生后7d在体积分数(75±2)%高氧环境中饲养5d后,再置于相对低氧环境中诱导产生视网膜新生血管为高氧诱导组。另外65... 目的研究小鼠视网膜新生血管发生过程中乙酰肝素酶(HPA)及其作用底物串珠素在视网膜中的表达。方法将65只新生幼鼠于生后7d在体积分数(75±2)%高氧环境中饲养5d后,再置于相对低氧环境中诱导产生视网膜新生血管为高氧诱导组。另外65只新生幼鼠在正常环境中饲养作为正常对照组。分别在小鼠生后第12、13、17、21、30天通过荧光素眼底血管造影(FFA)和视网膜病理切片观察视网膜新生血管的形态变化。通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测不同时间点视网膜组织中HPA和串珠素在mRNA水平的变化,Western blot检测不同时间点视网膜组织中HPA在蛋白水平的表达变化。结果高氧诱导组与正常对照组的HPA mRNA表达水平差异有统计学意义(Fgroup=16.303,P=0.000),各时间点的HPAmRNA表达水平差异有统计学意义(Ftime=18.614,P=0.000),生后第12、13、17、21天相应时间点2组小鼠视网膜HPAmRNA的表达水平差异均有统计学意义(P=0.001,P=0.000,P=0.000,P=0.001)。高氧诱导组与正常对照组HPA蛋白表达水平差异有统计学意义(Fgroup=458.134,P=0.000),各时间点的HPA蛋白表达水平差异有统计学意义(Ftime=78.466,P=0.000)。高氧诱导组与正常对照组的串珠素mRNA表达水平差异有统计学意义(Fgroup=7.351,P=0.013),各时间点的串珠素mRNA表达水平差异有统计学意义(Ftime=9.098,P=0.000)。生后第13、17、21天的高氧诱导组小鼠视网膜串珠素mRNA的表达水平与正常对照组相应时间点,差异均有统计学意义(P=0.048,P=0.000,P=0.003)。伴随着视网膜新生血管的增多和消退,HPA在基因和蛋白水平及串珠素在基因水平的表达均呈先升高后降低的趋势。结论HPA及其作用底物可能是促进视网膜新生血管生长的重要因素。 展开更多

关键词 视网膜新生血管 乙酰肝素酶 串珠素 高氧性视网膜病变

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羊膜对人视网膜色素上皮细胞增生和分化的影响 被引量：1

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作者 王瑶 宫华青 +3 位作者 杨玲玲 王茜 周庆军 王宜强 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期786-790,共5页

背景人视网膜色素上皮（RPE）细胞移植治疗视网膜变性性疾病是目前的研究热点之一，许多生物载体可制备RPE细胞单层，但多存在着细胞毒性、稳定性差及免疫反应等问题。目的检测羊膜对人RPE细胞增生和分化的影响，探讨其作为人RPE细胞层... 背景人视网膜色素上皮（RPE）细胞移植治疗视网膜变性性疾病是目前的研究热点之一，许多生物载体可制备RPE细胞单层，但多存在着细胞毒性、稳定性差及免疫反应等问题。目的检测羊膜对人RPE细胞增生和分化的影响，探讨其作为人RPE细胞层载体进行移植的可能性。方法将RPE细胞系ARPE-19细胞株用含质量分数10％胎牛血清的DMEM／F12培养基进行培养和传代，8～12代细胞用于实验。将传代细胞分为2个组，一组细胞接种于去上皮羊膜作为实验组，另一组细胞直接在培养孔内进行培养作为对照组。分别于接种后24、48、72、96h行MTT实验，测定RPE细胞的吸光度（A492）值以评估两组细胞在增生能力方面的不同；培养3周后的细胞层行苏木精-伊红染色，检测细胞在不同培养载体上是否存在形态学方面的区别；分别收集同一孔中生长于羊膜和培养板表面的细胞，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测色素上皮衍生因子（PEDF）、钙黏蛋白（N—cadherin）、β-连环蛋白（β—catenin）以及细胞连接相关蛋白的表达情况；同时收集培养3周时的细胞行透射电子显微镜和扫描电子显微镜检查，比较不同载体培养的ARPE-19细胞在超微结构方面的区别。结果与对照组相比，实验组细胞增生的速度明显变缓，两组细胞增生情况比较差异有统计学意义（F=41．760，P=0．000）。苏木精-伊红染色结果显示，同一培养孔内实验组的细胞密度明显低于对照组，说明羊膜对ARPE-19细胞增生的影响不是通过细胞分泌的可溶性因子的作用。RT—PCR结果显示，实验组细胞连接相关蛋白claudin 1、N—cadherin和PEDF mRNA在培养细胞上的表达水平均明显高于对照组，差异均有统计学意义（t=15．828，P=0．000；t=6．839，P=0．002；t=14．667，P=0．000）；Connexin 43的表达低于对照组，差异有统计学意义（t=3．358，P=0．024）。超微结构分析发现羊膜载体上的细胞呈典型的多边形RPE细胞表型，分化现象明显，而普通培养板培养的RPE细胞形态主要呈梭形，细胞层厚薄不均。结论去上皮羊膜为载体培养的RPE细胞增生速度变慢，但培养的细胞分化程度较高，提示羊膜可作为RPE细胞体外培养的良好载体，用于制备移植所需功能成熟的RPE细胞片层。 展开更多

关键词 羊膜 视网膜色素上皮细胞 增生 分化

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小鼠TGFBI基因真核表达载体的构建和表达

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作者 牛静宜 陈鹏 +2 位作者 王晔 谢立信 王宜强 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2009年第3期161-165,共5页

目的构建小鼠TGFBI基因的真核表达载体,为研究角膜营养不良的发病机制奠定基础。方法提取BALB/cBy小鼠正常角膜组织总RNA,经反转录-PCR合成TGFBI cDNA,克隆入真核表达载体pcDNA3.1并测序验证。用不同剂量重组质粒pcDNA3.1-TGFBI转染NIH... 目的构建小鼠TGFBI基因的真核表达载体,为研究角膜营养不良的发病机制奠定基础。方法提取BALB/cBy小鼠正常角膜组织总RNA,经反转录-PCR合成TGFBI cDNA,克隆入真核表达载体pcDNA3.1并测序验证。用不同剂量重组质粒pcDNA3.1-TGFBI转染NIH3T3细胞,通过SYBR荧光实时定量PCR和Western blot检测TGFBI在细胞中的表达。结果测序结果显示扩增到的TGFBI cDNA以正确序列和方式插入载体,实时定量PCR和Western blot结果显示TGFBI在NIH3T3细胞中表达增强。结论成功构建了小鼠TGFBI基因真核表达载体,并在细胞中进行表达,为进一步研究TGFBI在角膜内的生理、病理功能奠定基础。 展开更多

关键词 TGFBI 构建 真核表达载体 角膜营养不良

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p16^INK4a基因及其抑制基因Bmil在不同年龄人角膜内皮细胞中的表达及其意义

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作者 臧新杰 王晔 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期117-121,共5页

背景p16^INK4a基因在细胞老化和早衰过程中发挥着重要作用，是目前已知的细胞衰老的主导基因。角膜内皮细胞（CECs）周期停滞于G。期且体内缺乏增生能力，是否与细胞衰老有关尚未得知。目的探讨不同年龄的正常人CECs中p16^INK4a基因及... 背景p16^INK4a基因在细胞老化和早衰过程中发挥着重要作用，是目前已知的细胞衰老的主导基因。角膜内皮细胞（CECs）周期停滞于G。期且体内缺乏增生能力，是否与细胞衰老有关尚未得知。目的探讨不同年龄的正常人CECs中p16^INK4a基因及其抑制基因Bmil的表达。方法收集临床上DX液保存的行角膜移植手术后剩余的供体周边环状角膜组织，记录供体年龄。经锥虫蓝一茜素红双染法观察CECs的活性；行苏木精一伊红染色以证实角膜材料的组织结构正常。将收集到的角膜环材料按照年龄分为〈30岁组、30～50岁组和〉50岁组，每组30个角膜环，其中15个用于总RNA提取，另外15个角膜环等分为3份，分别用于免疫组织化学检测、免疫荧光检测和CECs活性的观察。提取每个角膜环的总RNA，行实时荧光定量PCR检测，观察p16^INK4amRNA、BmilmRNA和Ki67mRNA在CECs中的表达。行冰冻切片免疫组织化学染色，检测p16^INK4a、Bmil和Ki67蛋白在CECs中的表达。免疫荧光法检测p16”“。在CECs的表达。结果苏木精一伊红染色结果显示，供体角膜上皮、基质和内皮结构完整，排列规则。实时荧光定量PCR检测显示随年龄增长，p16^INK4a。mRNA的表达增强，而BmilmRNA和Ki67mRNA的表达减弱，差异均有统计学意义（F=5．703，P=0．014；F=3．950，P=0．042；F=548．500，P=0．000），其中与〈30岁组比较，〉50岁组p16^INK4amRNA在CECs中的表达量明显升高，而BmilmRNA和Ki67mRNA的表达均明显降低，差异均有统计学意义（P=0．006、0．013、0．000）。免疫组织化学结果可见，p16^INK4a。蛋白在各组CECs中均有表达，主要位于细胞核内，而Bmil与Ki67在年老供体的表达强度均弱于年轻供体，与实时荧光定量PCR的结果基本一致。免疫荧光染色显示，年老供体CECs p16^INK4a的表达强度强于年轻供体。结论细胞衰老主导基因p16^INK4a的表达随年龄增加而增高，其抑制基因Bmil的表达随年龄增加而降低。 展开更多

关键词 角膜内皮细胞 衰老 P16^INK4A基因 Bmi1基因

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直接PCR法对感染性棘阿米巴角膜炎的诊断价值 被引量：5

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作者 袁青 宋子成 +1 位作者 孙士营 赵格 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1011-1015,共5页

背景棘阿米巴角膜炎的致盲率极高，发病初期易误诊为真菌性角膜炎或病毒性角膜炎，常规的临床诊断方法费时较长，特异性差，极易错过治疗的“时间窗”。常规PCR法检测简单、特异、有效，但由于病变标本取材量少，不易提取组织DNA，限制... 背景棘阿米巴角膜炎的致盲率极高，发病初期易误诊为真菌性角膜炎或病毒性角膜炎，常规的临床诊断方法费时较长，特异性差，极易错过治疗的“时间窗”。常规PCR法检测简单、特异、有效，但由于病变标本取材量少，不易提取组织DNA，限制了其临床应用。目的探讨非提取组织DNA的直接PCR法扩增棘阿米巴虫株18SrRNA保守序列在棘阿米巴角膜炎快速诊断中的可行性。方法从山东省眼科研究所暨青岛眼科医院诊治的10例棘阿米巴角膜炎患者的病变角膜中分离10株棘阿米巴虫株，经鉴定均为T4基因型虫株。用直接PCR法分别扩增棘阿米巴原虫、白念珠菌、绿脓杆菌、I型单纯疱疹病毒以及正常人角膜上皮细胞以确定该方法的特异性。将棘阿米巴原虫稀释至不同的浓度以确定直接PCR法的敏感性。采用SPF级6周龄健康雌性BALB／c小鼠构建棘阿米巴角膜炎动物模型，于感染后第1、3、5、7、10、15天获取角膜组织，分别进行直接PCR、实时定量PCR（real—timePCR）、K0H封片镜检和原虫培养鉴定，比较各种方法的有效性和可行性。结果直接PCR法仅能扩增棘阿米巴DNA，其他病原体DNA均未扩增出；在每个获取的棘阿米巴角膜炎样本中最少可检测到10个棘阿米巴原虫。在棘阿米巴角膜炎小鼠模型中，直接PCR法在感染后第1、3、5、7、10、15天的阳性检出率分别为80．0％、90．0％、80．0％、70．0％、70．0％和50．0％，总阳性率为73．3％，高于原虫培养法的31．7％，差异有统计学意义（P=0．005）；K0H封片镜检的总阳性率为56．7％，real—timePCR法检测的总阳性率为61．7％，均略低于直接PCR法，差异均无统计学意义（P=0．056、0．172）。结论直接PCR法操作简单，在上述4种方法中对棘阿米巴原虫检测的特异性和敏感性最高，能够快速诊断棘阿米巴角膜炎，尤其对于待检标本少而无法提取DNA的患者可首选。 展开更多

关键词 棘阿米巴 角膜炎 聚合酶链反应 直接法

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miR-204对年龄相关性白内障LECs的抗氧化损伤作用及其机制 被引量：10

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作者 苏现华 王晔 黄钰森 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期227-233,共7页

背景miRNAs是一类非编码的小分子RNA，对LECs的凋亡发挥调控作用，但miRNAs对年龄相关性白内障患者LECs中氧化损伤的生物学效应及其机制仍需进一步研究。目的探讨miR-204在体内及体外对年龄相关性白内障氧化损伤的作用及其机制。方法收... 背景miRNAs是一类非编码的小分子RNA，对LECs的凋亡发挥调控作用，但miRNAs对年龄相关性白内障患者LECs中氧化损伤的生物学效应及其机制仍需进一步研究。目的探讨miR-204在体内及体外对年龄相关性白内障氧化损伤的作用及其机制。方法收集20例年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜和20个正常供体眼晶状体前囊膜，采用实时荧光定量PCR法检测2个组晶状体前囊膜中miR-204的表达量。对人晶状体上皮细胞系HLE—B3进行培养，在细胞培养液中添加200μmol／LH2O2建立LECs氧化损伤模型，然后将细胞分为模型对照组、miR-204拟似物组、拟似物对照组、miR-204拮抗物组、拮抗物对照组，分别在细胞培养液中添加相应的转染剂，未用H2O2处理的LECs作为正常对照组。转染后24h采用实时定量PCR法测定各组LECs中miR-204mRNA的表达以验证转染率；采用流式细胞仪测定体外各组细胞的凋亡率；采用实时荧光定量PCR和Westernblot法检测LECs中TP53INPl及p53mRNA和蛋白的相对表达量。结果年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜中miR-204mRNA相对表达量明显低于正常人，差异有统计学意义（t=14．21，P〈0．05）。正常对照组、模型对照组、miR-204拟似物组、拟似物对照组、miR-204拮抗物组、拮抗物对照组细胞凋亡率分别为1．31±O．12、4．90±0．28、2．60±0．15、4．39±0．20、5．74±0．13和4．34±0．63，模型对照组细胞凋亡率明显高于正常对照组，差异有统计学意义（t=-20．69，P〈0．01）；miR-204拟似物组细胞凋亡率明显低于拟似物对照组，而miR-204拮抗物组细胞凋亡率明显高于拮抗物对照组，差异均有统计学意义（t=-12．20，P〈0．01；t=3．79，P〈0．05）。实时荧光定量PCR和Westernblot法检测结果显示，模型对照组细胞中TP53INP1、p53mRNA及蛋白的相对表达量明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（mRNA相对表达量：t=6．44、11．71，均P〈0．01；蛋白相对表达量：t=10．72、t=19．40，均P〈0．01）；miR-204拟似物组细胞中TP53INP1、p53mRNA和蛋白的相对表达量低于拟似物对照组，差异均有统计学意义（mRNA相对表达量：t=-19．28、-10．58，均P〈0．01；蛋白相对表达量：t=-6．50、-6．36，均P〈0．05）；miR-204拮抗物组TP53INP1、p53mRNA的相对表达量高于拮抗物对照组，差异均有统计学意义（mRNA相对表达量：t=4．07、3．74，均P〈0．05；蛋白相对表达量：t=7．18、10．58，均P〈0．05）。结论MiR-204通过下调靶基因TP531NP1在LECs中的表达抑制LECs的凋亡，从而对年龄相关性白内障LECs发挥抗氧化损伤作用，该作用可能是通过影响TP53INPl-p53通路实现的。 展开更多

关键词 微小RNA TP53INP1 P53 年龄相关性白内障 氧化损伤

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后囊膜混浊的体外上皮-间质转化模型的建立 被引量：1

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作者 杨宝霞 王晔 +2 位作者 赵晓雯 刘廷 黄钰森 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期210-217,共8页

背景上皮一间质转化（EMT）是导致后囊膜混浊（PCO）的主要发病机制之一，研究LECs的EMT过程对PCO的防治具有重要意义，但目前缺乏研究EMT的PCO体外细胞模型。目的建立新的人晶状体囊外摘出术PCO的体外囊袋培养模型，探讨PCO形成过程中L... 背景上皮一间质转化（EMT）是导致后囊膜混浊（PCO）的主要发病机制之一，研究LECs的EMT过程对PCO的防治具有重要意义，但目前缺乏研究EMT的PCO体外细胞模型。目的建立新的人晶状体囊外摘出术PCO的体外囊袋培养模型，探讨PCO形成过程中LECsEMT的发生情况。方法利用健康供体的40只尸眼行体外模拟的白内障摘出术，游离晶状体囊袋后用昆虫针固定于培养皿，置于含体积分数10％胎牛血清的DMEM／F12培养液中培养4周，分别于培养后0、3、7、14和28d在光学显微镜下观察培养囊袋中LECs的生长情况；收集0、3、7和28d的囊袋组织制备组织病理学切片，采用苏木精一伊红染色法检测囊袋上LECs的细胞形态；采用免疫组织化学染色法检测EMT标志物OL—SMA、E—cadherin和Vimentin蛋白在囊袋上LECs中的表达和定位；采用实时荧光定量PCR和Westernblot法检测不同时间点囊袋上LECs中a-SMA、E—cadherin和VimentinmRNA及其蛋白的表达变化。结果未进行培养的囊袋后囊膜上未发现LECs生长，囊袋培养后3d可见后囊膜周边出现LECs并逐渐向中央区增生，培养后7dLECs完全覆盖后囊膜，略呈铺路石样外观并出现皱褶，此后随着培养时间的延长皱褶的数量增多并伸长，囊袋张力增强。免疫组织化学染色结果显示，随培养时间的延长，囊袋上LECs中E—cadherin的表达强度逐渐下降，而a-SMA和Vimentin的表达强度逐渐增强。实时荧光定量PCR检测表明，培养后0、3、7、14和28d囊袋上LECs中E—cadherinmRNA的相对表达量分别为3．35±0．13、1．47±0．20、1．13±0．14、1．00±0．85和0．23±0．03，VimentinmRNA的相对表达量分别为1．00±0．73、1．05±0．14、2．24±0．43、2．84±0．34和8．570±0．40，d—SMAmRNA的相对表达量分别为1．00±0．06、2．68±0．28、4．24±0．05、2．05±0．90和15．30±0．19，总体比较差异均有统计学意义（E—cadherinmRNA：F=23．430，P=0．000；VimentinmRNA：F=8．915，P=0．002；d—SMAmRNA：F=103．500，P=0．000），其中培养后28d囊袋上LECs中E—eadherinmRNA的相对表达量最低，而VimentinmRNA和a—SMAmRNA的相对表达量均最高，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。Westernbla检测结果表明，培养后0、3和28d囊袋上LECs中E—eadherhin蛋白表达的灰度值分别为1．443±0．017、1．023±0．003和0．568±0．018，Vimentin蛋白表达的灰度值分别为0．565±O．012，1．156±0．007和1．24±0．009，d＋SMA蛋白表达的灰度值分别为0．195±0．045，0．693±O．036和1．501±0．005，总体比较差异均有统计学意义（E—cadherhin：F=2787．000，P=0．000；Vimentin：F=4488．000，P=0．000；d—SMA：F=1173．000，P=0．000），其中培养后3、28dLECs中E—cadherhin蛋白表达明显低于0d，而Vimentin和a-SMA蛋白表达明显高于0d，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论本研究中的新囊袋模型进行LECs体外培养能模拟体内白内障术后晶状体后囊LECs的EMT自然过程，是探讨PCO发生机制和方法新的体外细胞模型。 展开更多

关键词 上皮-间质转化 晶状体上皮细胞 后发性白内障 白内障摘出/不良反应 晶状体囊 细 胞培养 人 囊袋模型

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小鼠视网膜铺片免疫荧光染色技术的探讨 被引量：2

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作者 窦方方 刘廷 董晓光 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第8期714-717,共4页

目的探讨一种简便、易操作的小鼠视网膜铺片免疫荧光染色技术。方法 30只C57BL/6J成年小鼠行40g.L-1多聚甲醛心脏灌注固定,摘取眼球,剥离视网膜,随机分为3组:A组20个视网膜直接置于3g.L-1TritonX-100中4℃孵育1h;B组20个视网膜先置入甲... 目的探讨一种简便、易操作的小鼠视网膜铺片免疫荧光染色技术。方法 30只C57BL/6J成年小鼠行40g.L-1多聚甲醛心脏灌注固定,摘取眼球,剥离视网膜,随机分为3组:A组20个视网膜直接置于3g.L-1TritonX-100中4℃孵育1h;B组20个视网膜先置入甲醇冰上固定30min,再置于3g.L-1TritonX-100中4℃孵育1h;C组20个视网膜先置入甲醇冰上固定30min,再置于3g.L-1TritonX-100中4℃孵育过夜。各组分别行α-平滑肌肌动蛋白免疫荧光染色,荧光显微镜下照相,观察其差异。结果荧光显微镜下观察,A组视网膜血管荧光微弱,血管模糊不清;B组视网膜可见荧光,血管分枝清晰可见,但荧光较弱;C组视网膜荧光强亮,α-平滑肌肌动蛋白特异性表达在血管内皮细胞及周细胞的胞膜上,荧光呈空泡状,背景染色轻。结论视网膜铺片免疫荧光染色是一种较好的、简便易行的视网膜组织形态学观察方法,实验过程中甲醇脱脂处理和足够的TritonX-100浸泡是保证染色成功的关键。 展开更多

关键词 视网膜铺片 免疫荧光 小鼠眼球

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