禽痘病毒载体疫苗研究进展 被引量：2

1

作者 黄兵 王莉莉 《家禽科学》 2005年第12期40-42,共3页

关键词 禽痘病毒 载体疫苗 体外生产 抗原基因 接种方法 外源DNA 生物学领域 功能化研究 T细胞反应 免疫抵抗力

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从禽病研讨会看我国的禽病研究进展 被引量：1

2

作者 李玉峰 牟建青 宋敏训 《山东家禽》 2002年第11期10-12,共3页

关键词 禽病研讨会 传染性支气管炎 法氏囊炎 中国 发展 禽流感 新城疫

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山东省主要水禽疾病状况及防制对策

3

作者 宋敏训 马秀丽 +2 位作者 李峰 牟建青 刘玉山 《山东家禽》 2004年第12期21-22,共2页

关键词 山东 水禽 疾病 流行特点 病因 防制 生物安全 疫苗免疫 药物

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PCR用于鸭瘟病毒诊断的研究 被引量：9

4

作者 马秀丽 宋敏训 +4 位作者 李玉峰 李峰 王春玲 黄兵 艾武 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期408-411,共4页

根据鸭瘟病毒UL6和UL7基因序列,设计合成了一对引物,以2株疫苗株1、株强毒株和1株山东分离株DNA为模板,进行PCR扩增,得到预期690 bp的目的片段。将扩增的目的片段克隆到pMD18_T载体,经Amp平板筛选,HindIII、BamHI双酶切鉴定,获得阳性重... 根据鸭瘟病毒UL6和UL7基因序列,设计合成了一对引物,以2株疫苗株1、株强毒株和1株山东分离株DNA为模板,进行PCR扩增,得到预期690 bp的目的片段。将扩增的目的片段克隆到pMD18_T载体,经Amp平板筛选,HindIII、BamHI双酶切鉴定,获得阳性重组质粒。对重组质粒进行序列测定,与参考序列比较,山东分离株与参考序列的同源性为99.7%,其余3株DPV与参考序列的同源性均为100%。应用PCR可检测人工感染和自然感染鸭瘟的组织中的鸭瘟病毒,表明PCR检测鸭瘟病毒具有很高的特异性、敏感性,该法能够用于鸭瘟急性及亚临床感染的检测与诊断。 展开更多

关键词 鸭瘟病毒 PCR 诊断

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单抗ELISA试剂盒检测肉鸽新城疫病毒初步研究 被引量：1

5

作者 李玉峰 曹福敏 +3 位作者 李峰 马秀丽 王春玲 刘玉山 《山东家禽》 2004年第6期7-8,共2页

应用新城疫病毒单克隆抗体建立的抗原捕捉ELISA试剂盒,对人工攻毒和自然发病的肉鸽进行检测,结果表明,从人工攻毒肉鸽各脏器组织均可检出新城疫病毒,从自然发病肉鸽泄殖腔内也可检出病毒。

关键词 单抗ELISA试剂盒 检测方法 肉鸽 新城疫病毒

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动物抗菌肽及其基因工程研究进展 被引量：2

6

作者 吴静 李玉峰 +3 位作者 黄兵 马秀丽 李峰 宋敏训 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第2期55-57,共3页

关键词 动物抗菌肽 基因工程 革兰氏阴性细菌 无脊椎动物 免疫防御系统 抗微生物活性 活性物质 原核生物

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雏鸭病毒性肝炎病毒山东株的分离鉴定 被引量：5

7

作者 马秀丽 宋敏训 +2 位作者 李峰 王春玲 刘玉山 《山东农业科学》 2004年第4期54-56,共3页

自山东地区疑似雏鸭病毒性肝炎的发病或病死肉雏鸭的肝脏中分离到3株病毒,经病毒分离、血清中和试验、单抗Dot-ELISA鉴定、氯仿敏感试验以及动物回归试验,确诊该地区雏鸭所患为Ⅰ型鸭病毒性肝炎。高免卵黄抗体的被动保护试验结果表明,... 自山东地区疑似雏鸭病毒性肝炎的发病或病死肉雏鸭的肝脏中分离到3株病毒,经病毒分离、血清中和试验、单抗Dot-ELISA鉴定、氯仿敏感试验以及动物回归试验,确诊该地区雏鸭所患为Ⅰ型鸭病毒性肝炎。高免卵黄抗体的被动保护试验结果表明,高免卵黄抗体可有效控制Ⅰ型雏鸭病毒性肝炎的发生。 展开更多

关键词 雏鸭 病毒性 肝炎病毒 山东株 分离鉴定

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一株肉鸡H9亚型禽流感病毒的分离鉴定及其对肉鸡增重的影响 被引量：3

8

作者 于可响 沙明利 +2 位作者 史玉颖 林树乾 姜亦飞 《山东农业科学》 2009年第1期107-109,共3页

从济南地区发病鸡群中分离到一株病毒,经血清中和试验和RT-PCR鉴定为H9亚型禽流感病毒(命名为D J07),并对其ELD50、HI相关系数及HA基因序列进行了分析,将D J07回归试验肉鸡,发现其能显著降低试验鸡的增重率,而且降低幅度比蛋鸡源性H9要大。

关键词 H9亚型禽流感病毒 分离鉴定 回归试验 增重率

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鸡毒支原体油乳剂灭活疫苗的研究 被引量：1

9

作者 艾武 牟建青 +7 位作者 李峰 宋敏训 杨英阁 王春玲 黄兵 李玉峰 张秀美 王莉莉 《山东农业科学》 2002年第2期38-40,共3页

应用鸡毒支原体 (MG)F株、地方分离株SJ - 1制成油乳剂灭活疫苗 ,通过安全性、抗体产生时间、免疫效力和田间试验 ,证明该疫苗的安全性和免疫效力良好 ,注射常规剂量的 4倍 ,未见不良反应。接种后15天均可产生免疫力 ,30天后达高峰 ,免... 应用鸡毒支原体 (MG)F株、地方分离株SJ - 1制成油乳剂灭活疫苗 ,通过安全性、抗体产生时间、免疫效力和田间试验 ,证明该疫苗的安全性和免疫效力良好 ,注射常规剂量的 4倍 ,未见不良反应。接种后15天均可产生免疫力 ,30天后达高峰 ,免疫 6个月攻毒保护率为 94 %。 展开更多

关键词 鸡毒支原体 油乳剂 灭活疫苗 抗体 田间试验 安全性 免疫效力

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表达新城疫病毒融合蛋白基因禽痘病毒重组体的构建 被引量：1

10

作者 黄兵 于可响 +3 位作者 高月花 宋敏训 牟建青 李峰 《家禽科学》 2006年第1期13-16,共4页

通过RT-PCR扩增新城疫病毒F基因,利用禽痘病毒复合启动子、SV40 PolyA终止信号序列构建F基因表达盒。将F基因表达盒与loxp-GFP-loxP序列串联插入禽痘病毒重组臂,构建了禽痘病毒转移质粒载体。在脂质体介导下转染CEF,获得了带有绿色荧光... 通过RT-PCR扩增新城疫病毒F基因,利用禽痘病毒复合启动子、SV40 PolyA终止信号序列构建F基因表达盒。将F基因表达盒与loxp-GFP-loxP序列串联插入禽痘病毒重组臂,构建了禽痘病毒转移质粒载体。在脂质体介导下转染CEF,获得了带有绿色荧光信号的重组病毒rFPVFGFP。通过二次转染,利用Cre-loxP位点特异性重组将重组病毒基因组的GFP自动去除,结果获得了只含新城疫病毒F基因表达盒的重组禽痘病毒rFPVF。试验结果表明,rFPVF复制稳定,表达的F蛋白具有免疫原性,能够刺激鸡只产生抗新城疫病毒的中和抗体。 展开更多

关键词 禽痘病毒 新城疫病毒 融合蛋白 位点特异性重组 绿色荧光蛋白

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用荧光定量RT-PCR方法检测新型鸭呼肠孤病毒 被引量：10

11

作者 韩宏宇 马秀丽 +4 位作者 黄兵 李建亮 张玉瑶 于可响 崔言顺 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第8期1331-1336,共6页

根据新型鸭呼肠孤病毒（novel duck reovirus,NDRV）S1基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量RT-PCR检测方法。根据含目的基因的质粒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。敏感性试验显示,该方法最低... 根据新型鸭呼肠孤病毒（novel duck reovirus,NDRV）S1基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量RT-PCR检测方法。根据含目的基因的质粒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。敏感性试验显示,该方法最低可检出15个拷贝的病毒c DNA,其病毒最低检出量为0.5TCID50。该方法具有良好的特异性,对鸭坦布苏病毒（DTMUV）、A型鸭甲肝病毒（DHV-1）、C型鸭甲肝病毒（DHV-3）、番鸭呼肠孤病毒（MDRV）、减蛋综合征病毒（EDSV）、鸭新城疫病毒（NDV）、鸭瘟病毒（DPV）、鸭疫里默氏杆菌（RA）的检测结果均为阴性。该方法重复性好,组内变异系数为0.32%~0.91%,组间变异系数为1.03%~1.51%。利用该方法对人工感染雏鸭的粪便排毒情况进行检测,结果发现,攻毒后2~12 d是粪便排毒期,其中3~6 d是排毒高峰期。临床样品检测结果表明,该方法比常规RT-PCR具有更高的敏感性,而且从收到样品到得出检测结果只需4 h。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量RT-PCR

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鸭病毒性肝炎多价卵黄抗体的研制 被引量：6

12

作者 于可响 沙明利 +3 位作者 林树乾 孙锦 马秀丽 黄兵 《山东农业科学》 2008年第1期104-105,共2页

选取4株不同地区分离的适应鸡胚的鸭肝炎病毒作为疫苗株制备灭活苗,免疫试验鸡制备卵黄抗体。鸡胚中和试验表明,第三次免疫后15天,抗体中和效价(PD50)都在29以上,卵黄抗体保护雏鸭试验显示,本试验制备的卵黄抗体有着显著的预防效果,并... 选取4株不同地区分离的适应鸡胚的鸭肝炎病毒作为疫苗株制备灭活苗,免疫试验鸡制备卵黄抗体。鸡胚中和试验表明,第三次免疫后15天,抗体中和效价(PD50)都在29以上,卵黄抗体保护雏鸭试验显示,本试验制备的卵黄抗体有着显著的预防效果,并大大提高攻毒后雏鸭的存活率。 展开更多

关键词 鸭肝炎病毒 卵黄抗体 存活率

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鸡α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达、纯化及其抗病毒活性测定 被引量：3

13

作者 吴静 李玉峰 +3 位作者 宋敏训 黄兵 马秀丽 李峰 《山东农业科学》 2006年第1期61-64,共4页

本试验将已构建的鸡α-干扰素重组酵母表达质粒pPIC-ChIFNα克隆至Pichia pastorisGS115基因组中,从阳性转化子中筛选出2株能高效表达鸡α-干扰素的重组酵母菌株,并对表达产物进行了纯化和抗病毒活性的测定。结果表明,Pichia pastoris... 本试验将已构建的鸡α-干扰素重组酵母表达质粒pPIC-ChIFNα克隆至Pichia pastorisGS115基因组中,从阳性转化子中筛选出2株能高效表达鸡α-干扰素的重组酵母菌株,并对表达产物进行了纯化和抗病毒活性的测定。结果表明,Pichia pastoris表达的重组ChIFNα具有较高的抗病毒活性,其活性单位为570×104U/ml,结合蛋白定量计算其比活性为2 980×104U/mg。 展开更多

关键词 鸡α-干扰素成熟蛋白 PICHIA PASTORIS 基因表达 分离纯化 抗病毒活性

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鸡抗鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体的研制及应用 被引量：6

14

作者 马秀丽 宋敏训 +3 位作者 李峰 牟建青 王春玲 李新华 《家禽科学》 2005年第1期13-14,共2页

应用雏鸭病毒性肝炎病毒(DHV)弱毒疫苗和DHV油乳剂灭活苗多次免疫产蛋鸡,制备鸡抗鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体,自制鸭病毒性肝炎病毒高免卵黄抗体的疗效取决于卵黄抗体的中和效价及治疗的时间。实验室试验及临床应用结果表明,卵黄抗体的... 应用雏鸭病毒性肝炎病毒(DHV)弱毒疫苗和DHV油乳剂灭活苗多次免疫产蛋鸡,制备鸡抗鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体,自制鸭病毒性肝炎病毒高免卵黄抗体的疗效取决于卵黄抗体的中和效价及治疗的时间。实验室试验及临床应用结果表明,卵黄抗体的中和效价应达28以上,并且在感染DHV24h以内对雏鸭进行肌肉注射,治疗效果最为理想。 展开更多

关键词 鸡抗鸭病毒性肝炎 高免卵黄抗体 雏鸭 病毒性肝炎 抗体效价

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H_5亚型禽流感单克隆抗体的研制及应用 被引量：2

15

作者 马秀丽 宋敏训 +4 位作者 黄兵 艾武 王莉莉 李峰 李玉峰 《家禽科学》 2005年第6期11-13,共3页

以禽流感H5亚型病毒分别免疫BABL/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验(HI)和间接ELISA检测细胞上清液,结果获得了3株抗禽流感H5亚型病毒特异性单克隆抗体,分别命名为1B6,1D4,7D1;其中1D4株为抗禽流感H5亚型病毒血凝... 以禽流感H5亚型病毒分别免疫BABL/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验(HI)和间接ELISA检测细胞上清液,结果获得了3株抗禽流感H5亚型病毒特异性单克隆抗体,分别命名为1B6,1D4,7D1;其中1D4株为抗禽流感H5亚型病毒血凝素特异性单克隆抗体细胞株,1B6株和7D1株为针对禽流感病毒NP蛋白的单克隆抗体细胞株。经3次亚克隆后,100%杂交瘤细胞保持了分泌抗禽流感病毒抗体的能力。这些单克隆抗体小鼠腹水ELISA效价为105,HI效价为211￣12。研究结果表明,所有这些单克隆抗体仅与相应的禽流感病毒株发生特异性反应,而不与鸡新城疫病毒、产蛋下降综合征病毒、鹅副粘病毒等反应。所有这些单抗在禽流感诊断中将发挥重要作用。 展开更多

关键词 禽流感 单克隆抗体 血凝抑制试验 间接ELISA

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我省规模化养鸭主要疫病的流行与防制情况调查 被引量：1

16

作者 宋敏训 马秀丽 +3 位作者 牟建青 李峰 刘玉山 沙明利 《家禽科学》 2005年第4期22-24,共3页

关键词 山东 鸭 规模化养殖 疫病 流行特点 发病规律 症状表现 治疗方法

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含绿色荧光蛋白基因的鸭肠炎病毒SD-01株US2基因缺失转移载体的构建 被引量：1

17

作者 李子剑 李云龙 +1 位作者 陈苏 李玉峰 《家禽科学》 2007年第11期14-16,共3页

以鸭肠炎病毒(DEV)SD-01株DNA为模板,根据Gen Bank上已发表的基因序列设计一对引物,利用PCR技术扩增出US2全基因,将PCR产物连入pGM-T载体。用BamHI和EcoR V双酶切重组载体,使US2基因缺失约130bp,将含双loxP酶切位点的EGFP完整表达盒插入... 以鸭肠炎病毒(DEV)SD-01株DNA为模板,根据Gen Bank上已发表的基因序列设计一对引物,利用PCR技术扩增出US2全基因,将PCR产物连入pGM-T载体。用BamHI和EcoR V双酶切重组载体,使US2基因缺失约130bp,将含双loxP酶切位点的EGFP完整表达盒插入BamH I和EcoR V酶切位点之间,成功构建了以US2基因为重组臂的含EGFP基因的转移质粒载体pUS2-loxP-EGFP-loxP。 展开更多

关键词 鸭肠炎病毒 US2基因 EGFP基因 转移载体

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一步法RT-PCR快速检测鸡新城疫病毒强毒株 被引量：2

18

作者 黄兵 王莉莉 +3 位作者 宋敏训 艾武 田夫林 梁成珠 《山东家禽》 2004年第12期11-13,共3页

本文参照NDV融合蛋白(F)基因序列设计引物,通过一步法RT-PCR扩增到NDV强毒株的170bp大小的特异条带。试验中未检出NDV弱毒株、IBV、AIV、IBDV的RNA,能够检出NDV尿囊液毒的最低滴度为10-5稀释度(相当于103.7EID50病毒量)。对山东省不同... 本文参照NDV融合蛋白(F)基因序列设计引物,通过一步法RT-PCR扩增到NDV强毒株的170bp大小的特异条带。试验中未检出NDV弱毒株、IBV、AIV、IBDV的RNA,能够检出NDV尿囊液毒的最低滴度为10-5稀释度(相当于103.7EID50病毒量)。对山东省不同地区于1997至2003年所分离的21个NDV强毒株检测全为阳性,而6个NDV弱毒株全为阴性。整个实验操作从病毒核酸提取到判定结果,在5h内即可完成。实验结果表明,该方法特异、敏感。 展开更多

关键词 一步法RT-PCR 快速检测 鸡 新城疫病毒 强毒株 分离 鉴定

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禽流感及其防制

19

作者 宋敏训 李新华 +1 位作者 刘玉山 李峰 《山东农业科学》 2004年第1期66-70,共5页

关键词 禽流感 防制 A型流感病毒 正粘病毒科

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种蛋及雏鸡抗传染性法氏囊病毒母源抗体的测定

20

作者 王春玲 吴树康 +3 位作者 牟建青 沙明利 宋敏训 王莉莉 《山东农业科学》 2005年第4期52-53,共2页

将本所鸡场海兰褐蛋37.8℃孵化,收集孵化前种蛋至孵化后1～13日龄鸡胚蛋黄及1～24日龄雏鸡血清分别测定其法氏囊(IBD)AGP抗体水平,以期测定IBD母源抗体的衰减规律.结果表明,种蛋及13日龄前鸡胚在这14天期间,其母源抗体AGP滴度维持在26.... 将本所鸡场海兰褐蛋37.8℃孵化,收集孵化前种蛋至孵化后1～13日龄鸡胚蛋黄及1～24日龄雏鸡血清分别测定其法氏囊(IBD)AGP抗体水平,以期测定IBD母源抗体的衰减规律.结果表明,种蛋及13日龄前鸡胚在这14天期间,其母源抗体AGP滴度维持在26.5左右,1～7日龄雏鸡母源抗体均维持在26以上,7日龄为最高,可达26.6,但在10、12、14、20日龄时,分别降至23.4、21.4、20.4、20.2,24日龄时则完全消失. 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊病 母源抗体 衰减规律

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