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山东省肉鸭沙门氏菌的分离鉴定及敏感抗菌药物的筛选 被引量:7
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作者 齐静 王守荣 +11 位作者 李兰波 骆延波 李璐璐 胡明 王进文 李虹达 贾纪美 赵敏 杨胜福 李玉保 单虎 刘玉庆 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第7期216-220,共5页
从山东省各个地区的病死肉鸭采集317份组织样品进行细菌分离,并进行染色镜检和生化鉴定,共分离鉴定出105株沙门氏菌,分离率为33.1%。将临床推荐用药浓度的0.1倍作为抗药性检测浓度L,设置不同药物浓度梯度(1/4L、1/2L、L、2L和4L),进行1... 从山东省各个地区的病死肉鸭采集317份组织样品进行细菌分离,并进行染色镜检和生化鉴定,共分离鉴定出105株沙门氏菌,分离率为33.1%。将临床推荐用药浓度的0.1倍作为抗药性检测浓度L,设置不同药物浓度梯度(1/4L、1/2L、L、2L和4L),进行17种抗生素的药敏试验,根据L药物浓度梯度对分离菌株的抑菌率大于80%的原则进行敏感抗菌药物的筛选。结果表明,沙门氏菌是危害山东省肉鸭养殖的主要病原菌之一,且多重耐药现象较严重,其中氨苄西林、诺氟沙星、卡那霉素、氟苯尼考和培氟沙星等敏感药物可作为临床推荐药物对沙门氏菌进行防控。 展开更多
关键词 沙门氏菌 分离 鉴定 药敏试验
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抗禽大肠杆菌中药的体外抑菌方法和效果的研究 被引量:21
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作者 张慧 秦志华 +2 位作者 邹明 单虎 张启迪 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期598-602,共5页
为研究金银花、大青叶等10味中药对禽类大肠杆菌的体外抗菌效果,使用纸片法、打孔法同时对10种中药水提物进行体外抑菌试验,通过抑菌结果筛选较优抑菌试验方法,并测定抑菌效果较好中药的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明... 为研究金银花、大青叶等10味中药对禽类大肠杆菌的体外抗菌效果,使用纸片法、打孔法同时对10种中药水提物进行体外抑菌试验,通过抑菌结果筛选较优抑菌试验方法,并测定抑菌效果较好中药的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明,两种方法检测的药物抑菌圈大小除甘草、重楼外,均呈现显著性差异(P≤0.05),且其中的金银花、黄柏、贯众、黄连四味药抑菌结果差异极显著(P<0.01),说明纸片法效果更佳;10味中药中金银花、黄连的抑菌圈直径最大,分别为(15.10±0.01),(16.02±0.01)mm,呈高度敏感反应;二者的MIC分别是62.5,31.25 mg·mL-1,MBC为125,62.5 mg·mL-1。试验得出较好的体外抑菌试验方法为纸片法,10种抗禽大肠杆菌中药中以金银花、黄连效果最佳。 展开更多
关键词 中药 禽大肠杆菌 体外抑菌 最小抑菌浓度 最小杀菌浓度
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液相芯片技术在动物疫病检测中的研究进展 被引量:1
3
作者 杜文琪 夏立叶 +1 位作者 李桂梅 单虎 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第12期4138-4147,共10页
液相芯片技术是整合了激光技术、流式细胞仪、数字信号处理和传统化学技术的一种新型生物分子检测技术,目前广泛应用于各种免疫分析和核酸检测中。液相芯片技术支持单重和多重分析,可在多种测定方法中对蛋白质和核酸靶标进行高通量检测... 液相芯片技术是整合了激光技术、流式细胞仪、数字信号处理和传统化学技术的一种新型生物分子检测技术,目前广泛应用于各种免疫分析和核酸检测中。液相芯片技术支持单重和多重分析,可在多种测定方法中对蛋白质和核酸靶标进行高通量检测,具有高通量、操作简单、适用范围广、重复性好、特异性高、所需样品量少、更灵敏稳定、成本低等优点,正逐渐代替传统检测和定量病原体的工具,如实时荧光定量PCR扩增检测系统(qPCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等检测方法。动物传染病严重危害着养殖业健康发展,一些诸如高致病性禽流感的人畜共患病对人类健康造成了严重威胁。高效灵敏的诊断系统将有助于在传染病暴发期间筛选大量样本,防止感染扩散。液相芯片技术的发展为高通量检测和疾病的预防提供了新的平台。作者简要概述了液相芯片技术的原理和优点,重点阐述了液相芯片技术在检测动物疫病,包括猪病、禽病、兔病、犬病、啮齿类动物和其他动物疫病方面的研究进展。相信今后液相芯片技术会成为临床诊断、基础研究、新药开发、司法鉴定、食品卫生监督、生物武器防范等领域的一项重要分析检测技术,该技术的发展将大大推动生命科学研究与进步。 展开更多
关键词 液相芯片 动物疫病 检测 高通量
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鸭疫里默氏菌Ⅰ型整合子与耐药基因盒检测 被引量:2
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作者 蔡秀磊 单虎 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第7期25-28,共4页
为了明确整合子结构对鸭疫里默氏菌耐药性产生和传播的影响,根据已知的Ⅰ型整合子序列,应用PCR方法对22株临床分离菌株进行检测并测序分析。结果显示,22株(100%)菌均为Ⅰ型整合酶基因阳性,1株菌(4.5%)捕获了耐药基因盒aadA5,21株菌(95.... 为了明确整合子结构对鸭疫里默氏菌耐药性产生和传播的影响,根据已知的Ⅰ型整合子序列,应用PCR方法对22株临床分离菌株进行检测并测序分析。结果显示,22株(100%)菌均为Ⅰ型整合酶基因阳性,1株菌(4.5%)捕获了耐药基因盒aadA5,21株菌(95.5%)顺次捕获了耐药基因盒aac6-Ⅱ、catB3和aadA 1,证明了整合子结构是该菌耐药性传播的重要机制之一。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏菌 Ⅰ型整合子 耐药基因盒
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口蹄疫病毒VP1蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
5
作者 张芳源 杜文琪 +2 位作者 杨大为 李桂梅 单虎 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期82-90,共9页
为建立口蹄疫病毒(FMDV)快速、高效的血清学检测方法,根据GenBank收录的FMDV-O型国内流行株VP1基因(GenBank登录号:JN998085.1),构建重组质粒pCold TF-VP1,通过原核表达系统获得VP1蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达和反应... 为建立口蹄疫病毒(FMDV)快速、高效的血清学检测方法,根据GenBank收录的FMDV-O型国内流行株VP1基因(GenBank登录号:JN998085.1),构建重组质粒pCold TF-VP1,通过原核表达系统获得VP1蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达和反应原性后,将纯化后的蛋白作为抗原,建立FMDV抗体间接ELISA方法。结果显示,重组质粒成功转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,并以可溶性蛋白形式表达。建立的FMDV抗体间接ELISA方法其抗原包被最佳浓度0.5μg/mL,使用1%BSA溶液封闭效果最佳,血清最佳稀释度1∶600,酶标二抗最佳工作浓度1∶8000,且具有良好的特异性、灵敏性和重复性,与商品化试剂盒比较,符合率为90.2%。本试验在大肠杆菌中成功表达并纯化了FMDV的VP1蛋白,并建立了FMDV抗体间接ELISA方法,为口蹄疫的监测、诊断及试剂盒的开发提供了参考。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 VP1蛋白 原核表达 间接ELISA
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病毒宏基因组学检测猪博卡病毒及其遗传进化分析 被引量:1
6
作者 孙晓瑜 单虎 黄娟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期50-57,共8页
为了探明导致某养猪场中仔猪腹泻的病原,本试验将患病仔猪样本处理并提取核酸后进行病毒宏基因组测序,对测序结果进行序列比对分析和遗传进化分析,并对样本核酸进行PCR检测验证。结果显示,RNA样本中只注释到A型流感病毒(H1N1和H3N2),读... 为了探明导致某养猪场中仔猪腹泻的病原,本试验将患病仔猪样本处理并提取核酸后进行病毒宏基因组测序,对测序结果进行序列比对分析和遗传进化分析,并对样本核酸进行PCR检测验证。结果显示,RNA样本中只注释到A型流感病毒(H1N1和H3N2),读数比为6.8%,未发现其他猪病相关RNA病毒。DNA样本注释到的病毒主要为猪博卡病毒(PBoV),读数比为34.5%,命名为PBoV-SDPD-2022;其余猪病相关病毒包括猪巨细胞病毒、猪乳腺腺病毒和猪细环病毒,读数比均小于1.0%。基于全基因组、NS 1基因和VP 1基因构建的系统发育进化树均显示,PBoV-SDPD-2022与参考毒株PBoV3_VIRES_HuB01_C1处于同一分支,属于PBoV G3群。与21株参考毒株相比,PBoV-SDPD-2022 NS1蛋白的编码基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为49.6%~97.2%和38.5%~95.3%;VP1蛋白的编码基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为47.9%~97.9%和34.8%~98.8%;NP1蛋白的编码基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为35.2%~98.5%和26.9%~97.4%。与G3群参考毒株相比,PBoV-SDPD-2022 NS1蛋白在第654位点处有1个氨基酸的缺失;VP1蛋白在第151、152位点处有2个氨基酸的插入,且包含基序YLGPF(VPl aa 18~22)和HDLAY(VP1 aa 41~45);NP1蛋白在第15、16、35、36、212位点处发生氨基酸的缺失,在第95位点处有1个氨基酸的插入。PCR检测证实样本核酸为PBoV阳性。结果表明,导致该养猪场仔猪腹泻的优势病原是G3群PBoV。本试验有助于进一步了解我国PBoV基因组序列特征,并为未来PBoV流行病学调查提供了参考依据。 展开更多
关键词 病毒宏基因组学 猪博卡病毒 遗传进化分析
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猪伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立 被引量:2
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作者 杨大为 刘书怡 +3 位作者 蔺雅婷 陈虎 张洪亮 李桂梅 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5439-5448,共10页
【目的】制备猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)gB蛋白单克隆抗体并建立竞争ELISA检测方法,为PRV的抗体检测及试剂盒开发提供参考。【方法】本研究使用PRV gB蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,使用PEG1500将小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行... 【目的】制备猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)gB蛋白单克隆抗体并建立竞争ELISA检测方法,为PRV的抗体检测及试剂盒开发提供参考。【方法】本研究使用PRV gB蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,使用PEG1500将小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合,用间接ELISA方法筛选出阳性杂交瘤细胞,采用有限稀释法经过2轮亚克隆,将阳性杂交瘤细胞通过体内诱生法制备腹水,并通过饱和硫酸铵法对腹水进行纯化制备单克隆抗体,用单克隆抗体建立竞争ELISA检测方法。使用棋盘法对反应条件进行优化,对阴性血清进行检测,计算该方法的临界值,并进行特异性、灵敏性和重复性试验,最后与商品化试剂盒同时对临床血清样品进行检测,比较二者的符合率。【结果】获得2D6、2D8两株杂交瘤细胞均为IgG1型,轻链为κ链,建立的竞争ELISA方法单克隆抗体最佳稀释度为1∶400,蛋白最佳包被浓度为1μg/mL,待检血清最佳稀释浓度为1∶4,最佳封闭液为1%BSA,酶标二抗的最佳稀释度为1∶4000。与其他临床常见的猪病病原不发生交叉反应,具有良好的特异性。阳性血清稀释至1∶256仍为阳性,证明该方法灵敏性好。批内和批间的变异系数均<10%,证明建立的竞争ELISA方法具有良好的重复性。与商品化试剂盒比较,总体符合率达93.3%。【结论】本研究成功制备针对PRV gB蛋白的单克隆抗体,并应用单克隆抗体建立了PRV gB抗体竞争ELISA检测方法。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒(PRV) gB蛋白 单克隆抗体 ELISA
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BVDV 1型和2型焦磷酸测序检测方法的建立 被引量:2
8
作者 刘海生 张永强 +7 位作者 赵永刚 吴延功 王清华 任炜杰 吕艳 刘春菊 王志亮 单虎 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第7期14-17,共4页
为了建立BVDV 1型和2型焦磷酸测序检测方法,用于BVDV的确诊和分型。根据GenBank中发表的BVDV 5'-UTR序列,设计通用扩增引物和分别针对BVDV 1型和2型的两条测序引物。以BVDV 1型BA株和BVDV 2型分离株为模板,用通用引物进行RT-PCR扩增... 为了建立BVDV 1型和2型焦磷酸测序检测方法,用于BVDV的确诊和分型。根据GenBank中发表的BVDV 5'-UTR序列,设计通用扩增引物和分别针对BVDV 1型和2型的两条测序引物。以BVDV 1型BA株和BVDV 2型分离株为模板,用通用引物进行RT-PCR扩增,用测序引物对扩增产物进行焦磷酸测序,建立BVDV 1型和BVDV 2型焦磷酸测序检测方法。结果显示,焦磷酸测序技术检测的序列为30个碱基以上,可用于BVDV的快速鉴定和分型。用该方法对奶牛场86份抗凝血样品进行检测。共检测出2份BVDV 1型,没有检测出BVDV 2型。将检测为阳性的RT-PCR产物测序,测序结果与焦磷酸测序结果一致,符合率为100%。表明本研究建立的BVDV 1型和2型焦磷酸测序检测方法,可用于BVDV的检测和分型,能一次性对待检样品进行确诊,是一种简便、快速的BVDV分型检测方法,对于BVDV的快速确诊具有重要意义。 展开更多
关键词 BVDV 焦磷酸测序 分型
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金黄口服液提取工艺的优化
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作者 张慧 尹文帅 +3 位作者 秦志华 邹明 单虎 张启迪 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第7期234-237,共4页
为获得金黄口服液的最佳提取条件,本试验通过uV法测定不同提取条件下取得的复方口服液中盐酸小檗碱的含量,选取含量最高的提取条件作为最佳提取条件。在波长350 nm处,盐酸小檗碱在浓度为1.5625~25μg/mL范围内,线性关系良好,回... 为获得金黄口服液的最佳提取条件,本试验通过uV法测定不同提取条件下取得的复方口服液中盐酸小檗碱的含量,选取含量最高的提取条件作为最佳提取条件。在波长350 nm处,盐酸小檗碱在浓度为1.5625~25μg/mL范围内,线性关系良好,回归方程为y=0.1493x+0.0583,R2=0.9996;口服液最佳提取条件为:浸泡45 min、加10倍量的水、煎煮45 min、共煎煮3次;结合实际生产和成本因素,确定中药复方水提工艺为:浸泡30 min、加10倍量的水、煎煮30 min、共煎煮3次,均接近正交方案中的最高值。 展开更多
关键词 盐酸小檗碱 金黄口服液 UV法
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非洲猪瘟病毒截短p54蛋白的原核表达与纯化 被引量:2
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作者 伦玉潇 李桂梅 单虎 《动物医学进展》 北大核心 2023年第2期1-7,共7页
旨在高效表达可溶性的非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白。去除可能影响p54蛋白可溶性表达的前50个氨基酸(aa),根据GenBank收录的ASFV p54基因序列设计引物,从第51个aa对应的基因序列起用PCR扩增截短的p54基因,并用分子克隆方法插入到带有TF及... 旨在高效表达可溶性的非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白。去除可能影响p54蛋白可溶性表达的前50个氨基酸(aa),根据GenBank收录的ASFV p54基因序列设计引物,从第51个aa对应的基因序列起用PCR扩增截短的p54基因,并用分子克隆方法插入到带有TF及His标签的冷休克表达载体pCold TF上,构建pCold TF-p54重组质粒。经菌液PCR及测序验证后将重组质粒转化到BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达p54重组截短蛋白,对IPTG诱导浓度、诱导时间进行优化,并对纯化重组蛋白时所用洗脱液的咪唑浓度进行探索。Western blot鉴定p54重组截短蛋白的反应原性,并探究TF标签对于该蛋白反应原性的影响。结果表明,成功构建了pCold TF-p54重组质粒,经终浓度为1 mmol/L的IPTG于16℃诱导9 h时,p54重组截短蛋白的表达量最高,分子质量约为76 ku。经50 mmol/L咪唑洗脱液洗脱可得到较纯的p54重组截短蛋白,经人鼻病毒(Human rhinovirus,HRV)3C Protease切除TF及His标签后,再次纯化可得到无标签且高纯度的p54截短蛋白。Western blot结果显示无标签的p54截短蛋白及有标签的p54重组截短蛋白均可被ASFV p54单克隆抗体特异性识别,均具有反应原性,且p54重组截短蛋白还可被ASFV阳性血清特异性识别。研究证实了原核表达的p54重组截短蛋白兼具可溶性、良好的反应原性,且重组蛋白上的TF标签不影响抗体对p54蛋白的识别,因此可用于后续ASFV抗体检测方法的研发。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p54蛋白 pCold TF载体 原核表达 纯化
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A型塞内卡病毒VP1蛋白的原核表达及纯化 被引量:7
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作者 杜文琪 夏立叶 +1 位作者 李桂梅 单虎 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第7期2708-2715,共8页
【目的】实现A型塞内卡病毒(Seneca virus A,SVA)VP1蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达,以建立SVA抗体液相芯片技术检测方法。【方法】根据GenBank收录的SVA VP1基因序列(登录号:KY747514.1),基于大肠杆菌的密码子偏好性优化合成VP1基因... 【目的】实现A型塞内卡病毒(Seneca virus A,SVA)VP1蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达,以建立SVA抗体液相芯片技术检测方法。【方法】根据GenBank收录的SVA VP1基因序列(登录号:KY747514.1),基于大肠杆菌的密码子偏好性优化合成VP1基因,克隆到pCold TF载体,构建重组质粒pCold TF-VP1。将重组质粒pCold TF-VP1转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,进行IPTG诱导表达。通过优化诱导时间及IPTG浓度得出最佳诱导表达条件。采用His标签镍柱纯化VP1重组蛋白,将纯化后的SVA VP1蛋白与荧光微球进行偶联,偶联好的微球与阴阳性血清反应,利用Luminex 200系统上机检测背景及阴阳性血清的中值荧光强度(MFI),从而判断阴阳性,以用于猪血清中SVA抗体的检测。【结果】重组质粒pCold TF-VP1成功转入大肠杆菌BL21感受态细胞,并以可溶性蛋白形式表达。经诱导表达在约82 ku处出现阳性条带。当重组菌株诱导条件为16℃、IPTG终浓度为1.2 mmol/L、诱导时间为3 h时,VP1蛋白表达量最高;经Western blotting分析,可在82 ku处出现明显条带。将VP1蛋白与荧光微球偶联,阴性对照(背景)的平均荧光值为17(<100)。测试孔的平均MFI为2339.5(>2000),证明SVA VP1蛋白与微球偶联成功,偶联成功的荧光微球可用于检测猪血清中SVA抗体的检测。【结论】本研究在大肠杆菌中成功表达并纯化了SVA VP1蛋白,初步建立了SVA抗体液相芯片检测方法,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒(SVA) VP1蛋白 大肠杆菌 蛋白纯化 可溶性表达 液相芯片
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非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立 被引量:3
12
作者 张芳源 蔺雅婷 +3 位作者 杨大为 陈虎 李桂梅 单虎 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2012-2022,共11页
【目的】建立快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的间接ELISA方法。【方法】根据GenBank收录的ASFV分离株全基因组中的CP 204 L基因序列,在不影响氨基酸序列的前提下进行密码子优化,克隆到pCold TF冷休克... 【目的】建立快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的间接ELISA方法。【方法】根据GenBank收录的ASFV分离株全基因组中的CP 204 L基因序列,在不影响氨基酸序列的前提下进行密码子优化,克隆到pCold TF冷休克表达载体,构建重组质粒pCold TF-p30。利用大肠杆菌原核表达系统进行IPTG诱导表达并对诱导时间和诱导浓度进行优化。用His标签镍柱对重组蛋白P30进行纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定后,用纯化后的P30重组蛋白作为抗原,建立ASFV抗体间接ELISA检测方法并对反应条件进行优化,检验该方法的特异性、灵敏性和重复性,并用该方法与商品化试剂盒进行对比。【结果】重组质粒成功转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后以可溶性蛋白形式表达,在约82 ku处有目的蛋白特异性条带。当16℃诱导12 h时蛋白表达量最高,不同IPTG浓度诱导无明显差异。Western blotting结果显示,P30重组蛋白可与ASFV阳性血清产生特异性反应,表明其具有良好的反应原性。建立的ASFV抗体间接ELISA检测方法抗原最佳包被浓度为1μg/mL,使用1%BSA溶液封闭效果最佳,血清最佳稀释度为1∶600,酶标二抗最佳工作浓度为1∶8000,该方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,与商品化试剂盒总符合率达到96.7%。【结论】本试验成功表达并纯化了ASFV的P30蛋白,建立了ASFV抗体间接ELISA检测方法,为非洲猪瘟的监测、诊断及试剂盒开发提供了参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) P30蛋白 原核表达 间接ELISA
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非洲猪瘟病毒P30蛋白的表达及抗体液相芯片检测方法的建立
13
作者 张芳源 杨大为 +3 位作者 仇德洋 姜国骞 李桂梅 单虎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4300-4310,共11页
本研究旨在为建立高效、快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的抗体液相芯片检测方法。首先构建pET-28a-p30表达载体,利用大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统表达ASFV重组P30蛋白,然后将重组P30蛋白与羧... 本研究旨在为建立高效、快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的抗体液相芯片检测方法。首先构建pET-28a-p30表达载体,利用大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统表达ASFV重组P30蛋白,然后将重组P30蛋白与羧基化的荧光微球偶联,建立ASFV P30抗体液相芯片检测方法。经鉴定,重组质粒成功转入大肠杆菌BL21感受态细胞,并以包涵体形式表达,Western blot结果显示重组P30蛋白可以与ASFV阳性血清产生特异性反应,证明其具有良好的反应原性。建立的ASFV抗体液相芯片检测方法检测中值荧光强度(median fluorescent intensity,MFI)阈值为1575.7,最佳结合蛋白浓度为每1.25×10^(6)个微球6μg,最佳血清稀释度为1∶600,最佳二抗浓度为1μg·mL^(-1),该方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。用建立的方法和商品化ELISA试剂盒同时对92份临床采集的猪血清样本进行检测,结果显示二者符合率为92.39%。本研究成功表达重组P30蛋白,并建立了ASFV P30抗体液相芯片检测方法,为ASFV感染早期的血清学检测提供了新的方法,也为多种病原体的抗体检测奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 P30蛋白 原核表达 液相芯片技术 抗体检测
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犬瘟热病毒受体SLAM TaqMan荧光定量PCR方法的建立
14
作者 王介淞 林佳旭 +1 位作者 王鑫磊 黄娟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第3期41-44,I0003,共5页
为了建立TaqMan荧光定量PCR方法来快速检测水貂淋巴细胞上的犬瘟热病毒受体信号淋巴细胞激活分子(SLAM),根据水貂SLAM基因的保守区域,设计1对特异引物和探针,通过优化反应条件,并进行敏感性试验、重复性试验和水貂外周血淋巴细胞检测试... 为了建立TaqMan荧光定量PCR方法来快速检测水貂淋巴细胞上的犬瘟热病毒受体信号淋巴细胞激活分子(SLAM),根据水貂SLAM基因的保守区域,设计1对特异引物和探针,通过优化反应条件,并进行敏感性试验、重复性试验和水貂外周血淋巴细胞检测试验。结果表明,建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法最低检出量可达4.9个拷贝;组内重复和组间重复Cq值变异系数均小于1%;应用该方法可成功检出犬瘟热病毒感染前后水貂外周血淋巴细胞中的SLAM基因的表达情况。表明建立的检测方法敏感性高,重复性好,可以用于犬瘟热病毒与SLAM受体互作以及致病机制的研究。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 SLAM受体 荧光定量RT-PCR TAQMAN
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犬瘟热病毒强毒株在Vero-SLAM细胞上传代后的基因突变分析
15
作者 吴佳琦 李贝影 +2 位作者 王介淞 黄娟 单虎 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第3期7-10,共4页
为了了解犬瘟热病毒强毒株全基因组序列在Vero-SLAM细胞上传代培养后的突变情况,本试验利用犬瘟热病毒强毒分离株HeBei株第12代细胞毒,通过RT-PCR方法分段扩增犬瘟热病毒全基因,对扩增出的各个片段进行克隆和鉴定,并应用SeqMan程序将所... 为了了解犬瘟热病毒强毒株全基因组序列在Vero-SLAM细胞上传代培养后的突变情况,本试验利用犬瘟热病毒强毒分离株HeBei株第12代细胞毒,通过RT-PCR方法分段扩增犬瘟热病毒全基因,对扩增出的各个片段进行克隆和鉴定,并应用SeqMan程序将所测得的序列进行拼接成Hebei株全长cDNA序列。结果表明,全基因与原始序列相比有24处碱基突变,总突变率为0.15%,其中3处为非编号码区的突变,其余21处在编码区,碱基突变率最高的蛋白基因为F(0.36%),最低为N(无突变)。氨基酸突变率分别为N蛋白0.00%;P蛋白0.39%;M蛋白0.30%;F蛋白0.60%;H蛋白0.50%;L蛋白0.18%。表明犬瘟热病毒强毒株经Vero-SLAM细胞传代培养后基因突变主要发生在F蛋白基因上。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 Vero-SLAM细胞 基因突变
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