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鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体TaqMan-MGB双重荧光定量PCR检测方法的建立和应用
被引量：
12
1
作者
韩勇
刘玉洁
+4 位作者
马珍驰
吕桂霞
范承祥
任增超
吴凤笋
《中国家禽》
北大核心
2022年第12期59-64,共6页
为建立一种快速鉴别诊断鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的方法,试验针对鸡毒支原体pvpA基因和鸡滑液囊支原体vlhA基因保守序列,分别设计引物和TaqMan-MGB探针;人工合成包含荧光PCR扩增目的基因的序列,并与载体连接后构建重组质粒MG-pvpA和M...
为建立一种快速鉴别诊断鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的方法,试验针对鸡毒支原体pvpA基因和鸡滑液囊支原体vlhA基因保守序列,分别设计引物和TaqMan-MGB探针;人工合成包含荧光PCR扩增目的基因的序列,并与载体连接后构建重组质粒MG-pvpA和MSvlhA,测序正确后作为标准质粒;优化反应条件建立了MG和MS的TaqMan-MGB双重荧光定量PCR方法,对方法的敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果显示,该方法特异性良好,与其他常见鸡病原不发生交叉反应,检测MG-pvpA、MS-vlhA的灵敏度分别达到1.58×10^(1)拷贝/μL、1.21×10^(1)拷贝/μL,批内与批间的变异系数均小于2%,从36份临床样品中分别检出MG和MS阳性样品11份、8份,与商品荧光PCR试剂盒符合率达到100%。研究表明建立的TaqMan-MGB双重荧光定量PCR方法特异性强、重复性好、敏感性高,可用于检测临床样品,快速准确地鉴别MG和MS,有利于鸡群中支原体的监测和净化。
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关键词
鸡毒支原体
鸡滑液囊支原体
荧光定量PCR
净化
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职称材料
TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测PCV2、PCV3和PCV4方法的建立和应用
被引量：
3
2
作者
韩勇
刘玉洁
+3 位作者
吕桂霞
马珍驰
任增超
范承祥
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2023年第8期29-34,共6页
为建立一种可同时鉴别致病性猪圆环病毒(PCV)不同基因型的检测方法,本试验针对PCV2、PCV3和PCV4的ORF2基因保守区域设计引物和探针,将人工合成目的基因与质粒连接,构建阳性质粒PCV2-ORF2、PCV3-ORF2和PCV4-ORF2。通过优化引物浓度、探...
为建立一种可同时鉴别致病性猪圆环病毒(PCV)不同基因型的检测方法,本试验针对PCV2、PCV3和PCV4的ORF2基因保守区域设计引物和探针,将人工合成目的基因与质粒连接,构建阳性质粒PCV2-ORF2、PCV3-ORF2和PCV4-ORF2。通过优化引物浓度、探针浓度、退火温度等参数,建立PCV2、PCV3和PCV4 TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的特异性、敏感性和重复性。应用建立的方法对38份临床样品进行应用检测,对24个养猪场(户)进行流行病学调查。结果显示,建立的方法能特异性区分PCV2、PCV3和PCV4,且与其他常见猪病病原不发生交叉反应;对PCV2、PCV3和PCV4的最低检出浓度分别为1.56×10、1.28×10和1.76×10拷贝/μL;批内和批间变异系数均小于2%,重复性好;38份临床样品中PCV2、PCV3和PCV4阳性样品分别为17、3和1份,从24个养猪场(户)采集的689份样品中PCV2、PCV3和PCV4阳性率分别为33.33%、12.50%和8.33%。结果表明,本试验建立的PCV2、PCV3和PCV4 TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于PCV的快速分型检测,为PCV的临床诊断和流行病学调查提供了检测工具。
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关键词
猪圆环病毒2型
猪圆环病毒3型
猪圆环病毒4型
荧光定量PCR
净化
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职称材料
日照麻鸡禽白血病的流行病学调查
被引量：
1
3
作者
韩勇
王春平
+2 位作者
刘玉洁
吕桂霞
范承祥
《中国畜禽种业》
2022年第1期52-53,共2页
为掌握日照麻鸡禽白血病流行状况,更好地开展禽白血病净化工作,在全市19个鸡场抽检血清710份,泄殖腔拭子710份,通过ELISA试验进行检测。结果显示,禽白血病J抗体、 A/B抗体和P27抗原样品总体阳性率分别为8.0%、 3.7%和11.0%。表明日照麻...
为掌握日照麻鸡禽白血病流行状况,更好地开展禽白血病净化工作,在全市19个鸡场抽检血清710份,泄殖腔拭子710份,通过ELISA试验进行检测。结果显示,禽白血病J抗体、 A/B抗体和P27抗原样品总体阳性率分别为8.0%、 3.7%和11.0%。表明日照麻鸡这一地方优良品种禽白血病感染较为普遍,开展净化工作迫在眉睫。
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关键词
禽白血病
流行病学调查
ELISA
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职称材料
题名
鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体TaqMan-MGB双重荧光定量PCR检测方法的建立和应用
被引量：
12
1
作者
韩勇
刘玉洁
马珍驰
吕桂霞
范承祥
任增超
吴凤笋
机构
山东省
日照市动物疫病预防控制
中心
山东省
枣庄市
畜牧
渔业事业
发展中心
山东省东营市现代畜牧业发展中心
河南
牧业
经济学院
出处
《中国家禽》
北大核心
2022年第12期59-64,共6页
基金
日照市动物防疫项目(WT-RZCG2017-1379)
2020—2021年日照市动物疫病防控项目(SDGD-2020-002、QX20210124)
文摘
为建立一种快速鉴别诊断鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的方法,试验针对鸡毒支原体pvpA基因和鸡滑液囊支原体vlhA基因保守序列,分别设计引物和TaqMan-MGB探针;人工合成包含荧光PCR扩增目的基因的序列,并与载体连接后构建重组质粒MG-pvpA和MSvlhA,测序正确后作为标准质粒;优化反应条件建立了MG和MS的TaqMan-MGB双重荧光定量PCR方法,对方法的敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果显示,该方法特异性良好,与其他常见鸡病原不发生交叉反应,检测MG-pvpA、MS-vlhA的灵敏度分别达到1.58×10^(1)拷贝/μL、1.21×10^(1)拷贝/μL,批内与批间的变异系数均小于2%,从36份临床样品中分别检出MG和MS阳性样品11份、8份,与商品荧光PCR试剂盒符合率达到100%。研究表明建立的TaqMan-MGB双重荧光定量PCR方法特异性强、重复性好、敏感性高,可用于检测临床样品,快速准确地鉴别MG和MS,有利于鸡群中支原体的监测和净化。
关键词
鸡毒支原体
鸡滑液囊支原体
荧光定量PCR
净化
Keywords
Mycoplasma galisepticum
Mycoplasma synoviae
fluorescent quantitative PCR
eradication
分类号
S852.62 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测PCV2、PCV3和PCV4方法的建立和应用
被引量：
3
2
作者
韩勇
刘玉洁
吕桂霞
马珍驰
任增超
范承祥
机构
山东省
日照市动物疫病预防控制
中心
山东省东营市现代畜牧业发展中心
山东省
枣庄市
畜牧
渔业事业
发展中心
出处
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2023年第8期29-34,共6页
基金
山东省动物疫情监测与防治项目(201811-1)
日照市动物疫病监测项目(日牧动卫发[2020]10号,日牧动卫发[2021]9号)。
文摘
为建立一种可同时鉴别致病性猪圆环病毒(PCV)不同基因型的检测方法,本试验针对PCV2、PCV3和PCV4的ORF2基因保守区域设计引物和探针,将人工合成目的基因与质粒连接,构建阳性质粒PCV2-ORF2、PCV3-ORF2和PCV4-ORF2。通过优化引物浓度、探针浓度、退火温度等参数,建立PCV2、PCV3和PCV4 TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的特异性、敏感性和重复性。应用建立的方法对38份临床样品进行应用检测,对24个养猪场(户)进行流行病学调查。结果显示,建立的方法能特异性区分PCV2、PCV3和PCV4,且与其他常见猪病病原不发生交叉反应;对PCV2、PCV3和PCV4的最低检出浓度分别为1.56×10、1.28×10和1.76×10拷贝/μL;批内和批间变异系数均小于2%,重复性好;38份临床样品中PCV2、PCV3和PCV4阳性样品分别为17、3和1份,从24个养猪场(户)采集的689份样品中PCV2、PCV3和PCV4阳性率分别为33.33%、12.50%和8.33%。结果表明,本试验建立的PCV2、PCV3和PCV4 TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于PCV的快速分型检测,为PCV的临床诊断和流行病学调查提供了检测工具。
关键词
猪圆环病毒2型
猪圆环病毒3型
猪圆环病毒4型
荧光定量PCR
净化
Keywords
porcine circovirus type 2
porcine circovirus type 3
porcine circovirus type 4
fluorescence quantitative PCR
purification
分类号
S855.1 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
日照麻鸡禽白血病的流行病学调查
被引量：
1
3
作者
韩勇
王春平
刘玉洁
吕桂霞
范承祥
机构
山东省
日照市动物疫病预防控制
中心
山东省东营市现代畜牧业发展中心
出处
《中国畜禽种业》
2022年第1期52-53,共2页
文摘
为掌握日照麻鸡禽白血病流行状况,更好地开展禽白血病净化工作,在全市19个鸡场抽检血清710份,泄殖腔拭子710份,通过ELISA试验进行检测。结果显示,禽白血病J抗体、 A/B抗体和P27抗原样品总体阳性率分别为8.0%、 3.7%和11.0%。表明日照麻鸡这一地方优良品种禽白血病感染较为普遍,开展净化工作迫在眉睫。
关键词
禽白血病
流行病学调查
ELISA
分类号
S858.31 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体TaqMan-MGB双重荧光定量PCR检测方法的建立和应用
韩勇
刘玉洁
马珍驰
吕桂霞
范承祥
任增超
吴凤笋
《中国家禽》
北大核心
2022
12
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测PCV2、PCV3和PCV4方法的建立和应用
韩勇
刘玉洁
吕桂霞
马珍驰
任增超
范承祥
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2023
3
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下载PDF
职称材料
3
日照麻鸡禽白血病的流行病学调查
韩勇
王春平
刘玉洁
吕桂霞
范承祥
《中国畜禽种业》
2022
1
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