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p53同系物Djp53在涡虫胚基早期发育阶段的组织特异性表达及其在再生中的作用 被引量:2
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作者 吴素格 杨武 +1 位作者 周鲁明 赵博生 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期561-567,共7页
为了探索东亚三角涡虫Djp53基因在涡虫组织中的表达和功能,利用整体原位杂交、RT-PCR技术,检测了涡虫Djp53基因在组织中的表达分布特点,结果表明,Djp53基因在再生1、3、5天的胚基中具有较强的阳性信号,且3天的表达量最高;而在再生7、10... 为了探索东亚三角涡虫Djp53基因在涡虫组织中的表达和功能,利用整体原位杂交、RT-PCR技术,检测了涡虫Djp53基因在组织中的表达分布特点,结果表明,Djp53基因在再生1、3、5天的胚基中具有较强的阳性信号,且3天的表达量最高;而在再生7、10天和成虫的实质组织中表达较弱.RNA干扰后的RT-PCR检测显示,Djp53表达量显著下降,涡虫不能正常再生或出现眼点缺陷.由此推断,东亚三角涡虫Djp53基因在早期胚基发育阶段,通过调节多功能干细胞的迁移和增殖分化影响早期胚基的形成,是涡虫早期胚基发育必不可少的一个基因,并且在涡虫成体和再生后期对多功能干细胞的维持具有重要的作用. 展开更多
关键词 东亚三角涡虫 Djp53基因 整体原位杂交技术 RT-PCR技术
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东亚三角涡虫DjWnt5a克隆及在胚胎不同发育阶段中的表达 被引量:2
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作者 甄辉 吴素格 +1 位作者 鹿晴晴 赵博生 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期199-206,共8页
WNT(wingless-type MMTV integration site family)蛋白是一类分泌性糖蛋白家族,Wnt5a为非经典Wnt蛋白的典型代表,在各种器官的发育中发挥重要作用。为了探索东亚三角涡虫Dj Wnt5a基因在涡虫胚胎不同发育阶段中的表达和功能,利用RT-PCR(... WNT(wingless-type MMTV integration site family)蛋白是一类分泌性糖蛋白家族,Wnt5a为非经典Wnt蛋白的典型代表,在各种器官的发育中发挥重要作用。为了探索东亚三角涡虫Dj Wnt5a基因在涡虫胚胎不同发育阶段中的表达和功能,利用RT-PCR(reverse transcription PCR)和RACE(rapid-amplification of c DNA ends)技术克隆并分析了Dj Wnt5a c DNA的表达。结果表明,Dj Wnt5a基因由1 523 bp组成,编码371个氨基酸,其中含有23个保守的半胱氨酸结构域。利用MAGE 5.2构建进化树分析发现,东亚三角涡虫与地中海涡虫的Wnt5a聚群,并位于两侧对称动物的基部,可能是Wnt5a的原始类型。利用整体原位杂交技术分析Dj Wnt5a基因的表达,结果显示,Dj Wnt5a基因在涡虫发育的第三阶段开始表达,主要集中在胚胎咽及胚带;随着胚胎发育直至完全孵化出幼虫,Dj Wnt5a基因逐步在神经原基和中枢神经系统表达。由此推断,东亚三角涡虫Dj Wnt5a基因在涡虫胚胎发育时,参与神经原基的形成和分化,是涡虫胚胎神经发育必不可少的基因之一。 展开更多
关键词 东亚三角涡虫 DjWnt5a基因 整体原位杂交技术 胚胎发育
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东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry的表达和酶活分析 被引量:2
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作者 周鲁明 刘殿辰 +1 位作者 孙欢欢 赵博生 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期609-614,共6页
通过对东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry氨基酸序列比对分析,发现保守的催化三联体结构中第一位的His被Lys所取代。为了探究这种突变是否会对胰蛋白酶的活性有影响,文章构建了原核表达重组质粒pET-28a-Djtry,转化到E.coli BL21中,利用IPTG诱... 通过对东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry氨基酸序列比对分析,发现保守的催化三联体结构中第一位的His被Lys所取代。为了探究这种突变是否会对胰蛋白酶的活性有影响,文章构建了原核表达重组质粒pET-28a-Djtry,转化到E.coli BL21中,利用IPTG诱导表达,对表达的重组蛋白进行变性、复性、纯化以及Westernblotting鉴定,获得成分均一的活性蛋白。利用牛胰蛋白酶为标准品,胰蛋白酶特异性底物BAEE,检测Djtry酶活力与比活力。SDS-PAGE电泳表明诱导表达的融合蛋白为包涵体,分子量约为26 kDa,Western blotting结果显示为目的蛋白,对复性纯化的目的蛋白进行酶活检测发现,突变型胰蛋白酶Djtry仍然保持了胰蛋白酶催化性质,但是催化活性相对较弱。 展开更多
关键词 东亚三角涡虫 胰蛋白酶 蛋白表达 酶活
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东亚三角涡虫PSA蛋白的表达、鉴定及抑菌分析
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作者 刘斌 赵博生 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期134-139,共6页
PCR扩增含酶切位点的DjPsa基因(ORF),构建了DjPsa基因的原核表达载体pET-28a(+)-DjPsa,转化入E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE、Western blotting(His-Tag抗体)分析表达蛋白,抑菌试验检测其活性。结果表明,重组质粒在E.... PCR扩增含酶切位点的DjPsa基因(ORF),构建了DjPsa基因的原核表达载体pET-28a(+)-DjPsa,转化入E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE、Western blotting(His-Tag抗体)分析表达蛋白,抑菌试验检测其活性。结果表明,重组质粒在E.coli BL21(DE3)中以包涵体的形式高效表达,其蛋白的分子大小约为25 kD;Western blotting检测说明得到的蛋白为PSA重组蛋白;抑菌试验显示复性后的PSA具有较强的抑菌作用,为进一步研究它的功能、活性提供基础。 展开更多
关键词 东亚三角涡虫 DjPsa基因 原核表达Western blotting抑菌
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青岛文昌鱼S-腺苷高半胱氨酸水解酶基因的组织特异性表达
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作者 杜晓琪 赵博生 《四川动物》 CSCD 北大核心 2011年第3期344-347,共4页
为了探索文昌鱼S-腺苷高半胱氨酸水解酶AdoHcyase基因在文昌鱼组织中的表达分布情况,利用组织原位杂交技术,以地高辛标记的反义RNA为探针,检测了文昌鱼AdoHcyase基因在组织中的表达分布特点。结果表明,AdoHcyase基因在雌性文昌鱼的卵巢... 为了探索文昌鱼S-腺苷高半胱氨酸水解酶AdoHcyase基因在文昌鱼组织中的表达分布情况,利用组织原位杂交技术,以地高辛标记的反义RNA为探针,检测了文昌鱼AdoHcyase基因在组织中的表达分布特点。结果表明,AdoHcyase基因在雌性文昌鱼的卵巢、肝盲囊和后肠杂交信号十分强烈,在内柱、鳃等组织中也有微弱信号表达,而精巢、肌肉、脊索等组织中没有阳性信号。结果初步表明,文昌鱼AdoHcyase的功能是动物AdoHcyase的基本功能,与卵母细胞的成熟和肝脏的功能有关。本实验为以文昌鱼作为模式生物开发用于抑制AdoHcyase的低毒性药物提供了依据。 展开更多
关键词 青岛文昌鱼 S-腺苷高半胱氨酸水解酶 原位杂交
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