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猪繁殖与呼吸综合征病毒重组M蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及应用
被引量：
8
1
作者
吴忆春
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2013年第7期51-55,共5页
为建立一种敏感、特异、快速、高通量的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体血清学检测方法,本研究利用原核表达技术表达了PRRSV M蛋白,将纯化后的重组M蛋白作为包被抗原建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。参照已发表的PRRSV基因组M...
为建立一种敏感、特异、快速、高通量的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体血清学检测方法,本研究利用原核表达技术表达了PRRSV M蛋白,将纯化后的重组M蛋白作为包被抗原建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。参照已发表的PRRSV基因组M基因序列,设计合成1对特异性引物,RT-PCR扩增了长约435bp的M基因片段,将目的片段亚克隆至pET32a(+)表达载体中,经IPTG诱导获得了以包涵体形式表达的重组M蛋白,重组蛋白纯化后,免疫印迹检测结果表明具有良好的抗原性和特异性。以重组M纯化蛋白为包被抗原,经间接ELISA反应条件的优化,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法,该方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪圆环病毒2型(PCV2)其他6种常见猪病病原的阳性血清均为阴性;该方法批内与批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%;该方法与商品化ELISA试剂盒的符合率为95.3%。本研究建立的M-ELISA检测方法将为猪群免疫PRRS疫苗后抗体水平监测及PRRSV野毒感染的快速诊断与流行病学调查等提供了一种简便易行、快速、高通量的血清学抗体检测方法。
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关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
重组M蛋白
间接ELISA
抗体检测
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职称材料
猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究新进展
被引量：
5
2
作者
吴忆春
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011年第11期191-194,共4页
当前疫苗免疫接种是预防和控制猪繁殖与呼吸综合征的重要手段。传统的猪繁殖与呼吸综合征疫苗在猪繁殖与呼吸综合征的防控过程中发挥了重大作用,近年来随着猪繁殖与呼吸综合征病毒变异的加快,传统的猪繁殖与呼吸综合征疫苗已不能充分发...
当前疫苗免疫接种是预防和控制猪繁殖与呼吸综合征的重要手段。传统的猪繁殖与呼吸综合征疫苗在猪繁殖与呼吸综合征的防控过程中发挥了重大作用,近年来随着猪繁殖与呼吸综合征病毒变异的加快,传统的猪繁殖与呼吸综合征疫苗已不能充分发挥保护作用。随着基因工程技术的发展,一些新型疫苗发展十分迅速,部分疫苗已商品化投放市场,广泛应用到生产中去,它给人类以及动物疫病的预防和治疗带来了新的希望。尽管新型疫苗还存在缺陷,但随着分子生物学,免疫学等学科的发展,新型疫苗经过不断改造,将会更理想地服务于人类和畜牧业的可持续发展。
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关键词
猪繁殖与呼吸综合征疫苗
传统疫苗
新型疫苗
研究新进展
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职称材料
黄河三角洲地区PRRSV的分离鉴定及ORF4、ORF5基因遗传特性分析
3
作者
吴忆春
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2012年第6期37-41,共5页
采集黄河三角洲地区某猪场发生高热症死亡的仔猪病料,处理后接种Marc-145细胞,传代2代以后出现明显细胞病变,其病毒TCID50为10-4.625/mL,采用PCR检测细胞培养物中伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒,均为阴性。采用第2代细胞培养物人...
采集黄河三角洲地区某猪场发生高热症死亡的仔猪病料,处理后接种Marc-145细胞,传代2代以后出现明显细胞病变,其病毒TCID50为10-4.625/mL,采用PCR检测细胞培养物中伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒,均为阴性。采用第2代细胞培养物人工感染仔猪,仔猪出现高热、咳嗽、发绀、耳朵发紫、死亡等临床表现,剖检发病猪可见明显的间质性肺炎表现,采集肺、脾、肾和淋巴结等组织进行PCR检验,均能检测到PRRSV,初步认为分离到一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒,命名为HSJ-1102株。对该分离株ORF4、ORF5基因进行扩增与克隆测序,序列分析表明,该分离株ORF4基因序列与JXA1、Ch1-a等毒株的同源性较高,在97.4%～99.3%之间,与VR2332等毒株同源性低于90%;分离株ORF5基因序列与JXA1等毒株同源性为97%～99.8%,与Ch1-a,VR2332等毒株同源性较低,分别为92.5%和86.4%。
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关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
分离鉴定
ORF4
ORF5
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职称材料
题名
猪繁殖与呼吸综合征病毒重组M蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及应用
被引量：
8
1
作者
吴忆春
机构
山东滨州职业学院生物工程学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2013年第7期51-55,共5页
基金
滨州职业学院科学研究基金项目(10xykt06)
文摘
为建立一种敏感、特异、快速、高通量的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体血清学检测方法,本研究利用原核表达技术表达了PRRSV M蛋白,将纯化后的重组M蛋白作为包被抗原建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。参照已发表的PRRSV基因组M基因序列,设计合成1对特异性引物,RT-PCR扩增了长约435bp的M基因片段,将目的片段亚克隆至pET32a(+)表达载体中,经IPTG诱导获得了以包涵体形式表达的重组M蛋白,重组蛋白纯化后,免疫印迹检测结果表明具有良好的抗原性和特异性。以重组M纯化蛋白为包被抗原,经间接ELISA反应条件的优化,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法,该方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪圆环病毒2型(PCV2)其他6种常见猪病病原的阳性血清均为阴性;该方法批内与批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%;该方法与商品化ELISA试剂盒的符合率为95.3%。本研究建立的M-ELISA检测方法将为猪群免疫PRRS疫苗后抗体水平监测及PRRSV野毒感染的快速诊断与流行病学调查等提供了一种简便易行、快速、高通量的血清学抗体检测方法。
关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
重组M蛋白
间接ELISA
抗体检测
Keywords
porcine reproductive and respiratory syndrome virus
recombinant M protein
indirect ELISA
antibody detection
分类号
S852.5 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究新进展
被引量：
5
2
作者
吴忆春
机构
山东滨州职业学院生物工程学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011年第11期191-194,共4页
基金
滨州职业学院课题(10xykt06)
文摘
当前疫苗免疫接种是预防和控制猪繁殖与呼吸综合征的重要手段。传统的猪繁殖与呼吸综合征疫苗在猪繁殖与呼吸综合征的防控过程中发挥了重大作用,近年来随着猪繁殖与呼吸综合征病毒变异的加快,传统的猪繁殖与呼吸综合征疫苗已不能充分发挥保护作用。随着基因工程技术的发展,一些新型疫苗发展十分迅速,部分疫苗已商品化投放市场,广泛应用到生产中去,它给人类以及动物疫病的预防和治疗带来了新的希望。尽管新型疫苗还存在缺陷,但随着分子生物学,免疫学等学科的发展,新型疫苗经过不断改造,将会更理想地服务于人类和畜牧业的可持续发展。
关键词
猪繁殖与呼吸综合征疫苗
传统疫苗
新型疫苗
研究新进展
Keywords
PRRSV vaccines
traditional vaccines
new vaccines
new progress
分类号
S852.5 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
黄河三角洲地区PRRSV的分离鉴定及ORF4、ORF5基因遗传特性分析
3
作者
吴忆春
机构
山东滨州职业学院生物工程学院
出处
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2012年第6期37-41,共5页
基金
滨州职业学院科研项目(10xykt06)
文摘
采集黄河三角洲地区某猪场发生高热症死亡的仔猪病料,处理后接种Marc-145细胞,传代2代以后出现明显细胞病变,其病毒TCID50为10-4.625/mL,采用PCR检测细胞培养物中伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒,均为阴性。采用第2代细胞培养物人工感染仔猪,仔猪出现高热、咳嗽、发绀、耳朵发紫、死亡等临床表现,剖检发病猪可见明显的间质性肺炎表现,采集肺、脾、肾和淋巴结等组织进行PCR检验,均能检测到PRRSV,初步认为分离到一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒,命名为HSJ-1102株。对该分离株ORF4、ORF5基因进行扩增与克隆测序,序列分析表明,该分离株ORF4基因序列与JXA1、Ch1-a等毒株的同源性较高,在97.4%～99.3%之间,与VR2332等毒株同源性低于90%;分离株ORF5基因序列与JXA1等毒株同源性为97%～99.8%,与Ch1-a,VR2332等毒株同源性较低,分别为92.5%和86.4%。
关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
分离鉴定
ORF4
ORF5
Keywords
PRRSV
isolation and identification
ORF4
ORF5
分类号
S852.659 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪繁殖与呼吸综合征病毒重组M蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及应用
吴忆春
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2013
8
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职称材料
2
猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究新进展
吴忆春
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
黄河三角洲地区PRRSV的分离鉴定及ORF4、ORF5基因遗传特性分析
吴忆春
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2012
0
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