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牛病毒性腹泻病毒NS5B蛋白的截短表达及多克隆抗体制备: 1; 作者秦春雪夏国建何成强《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期167-172,共6页; 本研究旨在克隆牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的非结构蛋白NS5B截短基因,采用原核表达系统表达获得截短蛋白,并进一步制备其多克隆抗体。构建的原核表达质粒pET-28a-NS5B转化至BL21感受态细胞,经IPTG诱导后,发现NS5B蛋白以包涵体为主。纯化蛋... 展开更多; 关键词牛病毒性腹泻病毒 NS5B蛋白原核表达多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：3: 2; 作者王炜韩慧慧 +1 位作者丁乃峥何成强《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第8期3131-3139,共9页; 【目的】应用大肠杆菌表达系统表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E0蛋白,纯化后免疫小鼠制备E0蛋白多克隆抗体用于BVDV的检测技术研究。【方法】采用PCR扩增BVDV的E0基因,将其连接至pET-28a(+)构建重组表达载体pET28a-E0。将重组质粒转化大肠... 展开更多; 关键词牛病毒性腹泻病毒(BVDV) E0基因原核表达多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

牛病毒性腹泻病毒E2抗体的制备: 3; 作者李胜文王炜 +4 位作者赵文栋丁乃峥王洪梅何洪彬何成强《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第4期189-194,共6页; 为获得牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2蛋白的多克隆抗体,本研究截短了BVDV E2氨基端前600个碱基,并构建原核表达载体pET28a-E2,优化E2序列并将重组载体转化到BL21感受态细胞中。37℃、1 mmol/L IPTG条件下诱导4 h,SDS-PAGE凝胶电泳观察在15 ... 展开更多; 关键词牛病毒性腹泻病毒 E2基因原核表达多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

仿刺参纵肌多糖的纯化及体外抗氧化: 4; 作者张健王茂剑 +4 位作者耿越陈涛赵云苹刘京熙高继庆《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第15期84-87,共4页; 目的:以仿刺参纵肌多糖为对象,探讨其纯化方法,并对其抗氧化活性进行研究。方法:仿刺参纵肌经木瓜蛋白酶水解、三氯乙酸去蛋白、Sephacryl S-400凝胶柱层析,得到一种多糖,进行红外光谱、分子质量和硫酸基含量测定,并进行硫酸酯化及体外... 展开更多; 关键词纵肌多糖仿刺参纯化抗氧化; 在线阅读下载PDF 职称材料

BVDV Singer_Arg株全基因组克隆及其感染性RNA制备被引量：1: 5; 作者秦春雪宋现梅 +3 位作者王洪梅丁乃峥何洪彬何成强《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第5期43-49,共7页; 克隆牛病毒性腹泻病毒Singer_Arg株全长cDNA,并获得其感染性RNA。将病毒基因组分段克隆后再拼接成全长cDNA;通过巨细胞病毒即早期启动子控制病毒cDNA转录,5'-UTR上游的锤头状核酶和3'-UTR下游的丁肝病毒核酶控制转录产物5'-... 展开更多; 关键词牛病毒性腹泻病毒反向遗传学全基因组克隆; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛病毒性腹泻病毒NS5B蛋白的截短表达及多克隆抗体制备: 1; 作者秦春雪夏国建何成强; 机构山东省药学科学院新药评价中心山东省生物制药重点实验室山东师范大学生命科学学院山东省动物抗性重点实验室; 出处《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期167-172,共6页; 基金山东省重点研发项目(2017GNC10125,2019GSF107020)。; 文摘本研究旨在克隆牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的非结构蛋白NS5B截短基因,采用原核表达系统表达获得截短蛋白,并进一步制备其多克隆抗体。构建的原核表达质粒pET-28a-NS5B转化至BL21感受态细胞,经IPTG诱导后,发现NS5B蛋白以包涵体为主。纯化蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体具有良好的反应性,能够特异性识别真核表达的NS5B蛋白。本研究中NS5B蛋白的截短表达及其多克隆抗体的制备为进一步研究NS5B蛋白的生物学功能,以及建立BVDV鉴别诊断的血清学检测方法奠定了基础。; 关键词牛病毒性腹泻病毒 NS5B蛋白原核表达多克隆抗体; Keywords Bovine viral diarrhea virus NS5B protein prokaryotic expression polyclonal antibody; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：3: 2; 作者王炜韩慧慧丁乃峥何成强; 机构山东师范大学生命科学学院; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第8期3131-3139,共9页; 基金山东省重点研发项目(2017GNC10125、2019GSF107020)。; 文摘【目的】应用大肠杆菌表达系统表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E0蛋白,纯化后免疫小鼠制备E0蛋白多克隆抗体用于BVDV的检测技术研究。【方法】采用PCR扩增BVDV的E0基因,将其连接至pET-28a(+)构建重组表达载体pET28a-E0。将重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导、亲和层析纯化后,通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定E0蛋白的表达情况。将纯化的E0蛋白免疫小鼠制备BVDV E0多克隆抗体,并通过Western blotting、细胞免疫荧光试验、ELISA等试验检测该多克隆抗体的特异性和效价,以及在BVDV检测中的应用。【结果】成功构建原核表达载体pET28a-E0,表达并纯化E0蛋白,制备的BVDV E0多克隆抗体可特异性识别纯化的E0蛋白及pET28a-E0在BL21中表达的总蛋白。进一步Western blotting、细胞免疫荧光试验、双抗夹心法ELISA证明制备的E0多克隆抗体可用于BVDV的检测。间接ELISA结果表明,E0多克隆抗体效价高于1∶64000。【结论】制备的BVDV E0多克隆抗体效价高、抗原结合特异性强,为BVDV E0蛋白的生物学功能研究及BVDV的检测提供了材料支持。; 关键词牛病毒性腹泻病毒(BVDV) E0基因原核表达多克隆抗体; Keywords Bovine viral diarrhea virus(BVDV) E0 gene prokaryotic expression polyclonal antibodies; 分类号 S852.653 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛病毒性腹泻病毒E2抗体的制备: 3; 作者李胜文王炜赵文栋丁乃峥王洪梅何洪彬何成强; 机构山东师范大学生命科学学院; 出处《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第4期189-194,共6页; 基金山东省重点研发项目(2017GNC10125,2019GSF107020)。; 文摘为获得牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2蛋白的多克隆抗体,本研究截短了BVDV E2氨基端前600个碱基,并构建原核表达载体pET28a-E2,优化E2序列并将重组载体转化到BL21感受态细胞中。37℃、1 mmol/L IPTG条件下诱导4 h,SDS-PAGE凝胶电泳观察在15 kDa处表达目的蛋白。Ni-NTA亲和层析纯化E2蛋白并免疫小鼠制备鼠抗血清。以获得的血清为一抗,Western blot检测pET28a-E2在BL21中表达的总蛋白,证明免疫性良好。利用BVDV感染MDBK细胞,Western blot成功检测到MDBK细胞表达的E2蛋白,证明E2抗体具有良好的特异性。ELISA检测E2多克隆抗体的效价达1∶128 000。本研究成功制备出BVDV E2多克隆抗体,为进一步研究该蛋白的功能及BVDV活载体疫苗的鉴定提供了技术和材料支持。; 关键词牛病毒性腹泻病毒 E2基因原核表达多克隆抗体; Keywords Bovine viral diarrhea virus E2gene prokaryotic expression polyclonal antibodies; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名仿刺参纵肌多糖的纯化及体外抗氧化: 4; 作者张健王茂剑耿越陈涛赵云苹刘京熙高继庆; 机构山东省海洋水产研究所山东省海洋生态修复重点实验室山东师范大学生命科学学院山东省动物抗性重点实验室; 出处《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第15期84-87,共4页; 基金国家海洋局海洋公益性行业科研专项(201105029) 国家海洋局海洋经济规划科技推进平台与运作项目(国海科字[2007]219); 文摘目的:以仿刺参纵肌多糖为对象,探讨其纯化方法,并对其抗氧化活性进行研究。方法:仿刺参纵肌经木瓜蛋白酶水解、三氯乙酸去蛋白、Sephacryl S-400凝胶柱层析,得到一种多糖,进行红外光谱、分子质量和硫酸基含量测定,并进行硫酸酯化及体外抗氧化实验。结果:红外光谱初步显示所得纯化多糖具有酸性糖胺聚糖结构,分子质量约为676kD,硫酸基含量为10.98%,取代度为0.285;硫酸酯化后硫酸基含量为17.43%,取代度为0.360;纯化多糖及酯化多糖都具有抗氧化活性。结论:仿刺参纵肌多糖随着硫酸基含量及取代度的提高,抗氧化活性逐渐增强。; 关键词纵肌多糖仿刺参纯化抗氧化; Keywords longitudinal muscle polysaccharide Apostichopus japonicus purification antioxidant activity; 分类号 TS254.1 [轻工技术与工程—水产品加工及贮藏工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名BVDV Singer_Arg株全基因组克隆及其感染性RNA制备被引量：1: 5; 作者秦春雪宋现梅王洪梅丁乃峥何洪彬何成强; 机构山东师范大学生命科学学院山东省动物抗性重点实验室; 出处《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第5期43-49,共7页; 基金山东省重点研发项目(2017GNC10125,2019GSF107020)。; 文摘克隆牛病毒性腹泻病毒Singer_Arg株全长cDNA,并获得其感染性RNA。将病毒基因组分段克隆后再拼接成全长cDNA;通过巨细胞病毒即早期启动子控制病毒cDNA转录,5'-UTR上游的锤头状核酶和3'-UTR下游的丁肝病毒核酶控制转录产物5'-UTR和3'-UTR的完整性和准确性,以获得不经体外转录,直接转染细胞产生病毒感染性RNA的反向遗传操作系统;并通过Western blot、RT-PCR技术、免疫荧光等方法对子代病毒进行了一系列鉴定与遗传稳定性分析。获得了Singer_Arg株全基因组序列并通过反向遗传拯救出该毒株。成功构建了基于Singer_Arg株的BVDV反向遗传操作系统,为BVDV疫苗研发和基础研究提供了技术平台。; 关键词牛病毒性腹泻病毒反向遗传学全基因组克隆; Keywords Bovine viral diarrhea virus reverse genetics system genome cloning; 分类号 S852.653 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	牛病毒性腹泻病毒NS5B蛋白的截短表达及多克隆抗体制备	秦春雪夏国建何成强	《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的原核表达及多克隆抗体制备	王炜韩慧慧丁乃峥何成强	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2022	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	牛病毒性腹泻病毒E2抗体的制备	李胜文王炜赵文栋丁乃峥王洪梅何洪彬何成强	《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心	2023	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	仿刺参纵肌多糖的纯化及体外抗氧化	张健王茂剑耿越陈涛赵云苹刘京熙高继庆	《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	BVDV Singer_Arg株全基因组克隆及其感染性RNA制备	秦春雪宋现梅王洪梅丁乃峥何洪彬何成强	《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心	2022	1	在线阅读下载PDF 职称材料