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地钱素C衍生物F41对子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响 被引量:1
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作者 魏玉平 郭元芳 +4 位作者 孙高英 王小元 刘永青 胡中一 毕文祥 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期346-351,共6页
目的对地钱素C(MC)羟基衍生物进行筛选,寻找具有高抗肿瘤活性的MC衍生物,并初步探讨其抗肿瘤的细胞与分子生物学机制。方法用MTT法观察56种MC羟基衍生物对子宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,筛选其中细胞毒作用最强的MC衍生物,并比较其与MC对H... 目的对地钱素C(MC)羟基衍生物进行筛选,寻找具有高抗肿瘤活性的MC衍生物,并初步探讨其抗肿瘤的细胞与分子生物学机制。方法用MTT法观察56种MC羟基衍生物对子宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,筛选其中细胞毒作用最强的MC衍生物,并比较其与MC对HeLa细胞存活的抑制作用。用倒置显微镜、DAPI染色和DNA梯带检测其对细胞凋亡的影响。用流式细胞术检测其对细胞周期的影响。用Western印迹法检测其对细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响。结果在56种MC衍生物中,F41对HeLa细胞毒性最强,抑制HeLa细胞存活的IC50为(11.31±2.13)μmol·L-1,明显低于MC〔IC50为(17.19±3.28)μmol·L-1〕(P<0.01)。F41和MC与HeLa细胞作用24,48和72h,F41对HeLa细胞存活的抑制作用均明显强于MC(P<0.05)。形态学和DNA梯带检测显示,F41处理后,HeLa细胞皱缩变小,有空泡和凋亡小体出现,胞核浓缩变小,DNA电泳呈梯状条带。流式细胞分析显示,F41 15μmol·L-1处理HeLa细胞24h,G2/M期细胞占总细胞的比例为(43.8±3.0)%,明显高于对照组的(13.1±1.6)%(P<0.01);G1期细胞比例为(34.8±3.8)%,明显低于对照组的(63.6±5.5)%(P<0.01)。Western免疫印迹结果表明,F41可使HeLa细胞内磷酸化细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶1水平降低,细胞周期蛋白B1和P53蛋白表达增多。结论 F41可诱导HeLa细胞凋亡,抑制HeLa细胞分裂,其抗肿瘤活性可能强于MC。 展开更多
关键词 地钱素C 羟基衍生物 细胞周期 细胞凋亡
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MicroRNA let-7与肺癌关系的研究进展 被引量:6
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作者 任为正 叶鸿飞 +1 位作者 赵健 姜安丽 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期418-421,共4页
MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性、非编码的单链小分子RNA,作用广泛,参与生命活动中的一系列重要进程,并与肿瘤的发生、发展密切相关。miRNA let-7是最早发现的miRNA之一,是线虫时序性发育的关键性调控因子;在哺乳动物中调节多种细胞增殖... MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性、非编码的单链小分子RNA,作用广泛,参与生命活动中的一系列重要进程,并与肿瘤的发生、发展密切相关。miRNA let-7是最早发现的miRNA之一,是线虫时序性发育的关键性调控因子;在哺乳动物中调节多种细胞增殖,且在细胞周期调节中起关键作用。let-7与人类多种癌症的发生、发展有关,其中与肺癌的关系最为密切;hsa-let-7在肺癌中表达显著降低,在非小细胞肺癌(NSCLC)中尤为多见,其低表达可能与肿瘤预后不良有关,而高表达则直接抑制肺癌生长;let-7作为肿瘤抑制因子负性调控多种癌基因,如RAS、高迁移率蛋白A2基因(high mobility group proteinA2,HMGA2)等;同时也负性调控多种细胞周期调节因子,如CDC25A、CDK6、Cyclin D2。let-7在肺癌组织中起到了肿瘤抑制因子的作用,有望成为肺癌基因治疗和预后判断的一个新靶标。 展开更多
关键词 MICRORNA LET-7 肺肿瘤 RAS HAMGA2
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胃癌多药耐药细胞株BGC823/5-FU的建立及其耐药机制的研究 被引量:6
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作者 杨皎娃 牛建花 +3 位作者 曾季平 刘永 贾继辉 陈春燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2167-2170,共4页
目的:建立5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的胃癌多药耐药细胞株BGC823/5-FU,探讨凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2、Bax及caspase-3与其耐药性产生的关系。方法:采用反复短期暴露并逐渐增加5-FU浓度的方法建立胃癌耐药细胞株BGC823/5-FU,MTT法检测此... 目的:建立5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的胃癌多药耐药细胞株BGC823/5-FU,探讨凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2、Bax及caspase-3与其耐药性产生的关系。方法:采用反复短期暴露并逐渐增加5-FU浓度的方法建立胃癌耐药细胞株BGC823/5-FU,MTT法检测此耐药细胞株对5-FU的耐药倍数及其对临床常用化疗药物阿霉素、丝裂霉素和顺铂的交叉耐药性,流式细胞术检测细胞P-糖蛋白的表达和柔红霉素积累量;Western blotting法检测耐药胃癌细胞株BGC823/5-FU与其亲代药物敏感胃癌细胞株BGC823凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2、Bax及caspase-3的表达。结果:成功诱导出胃癌多药耐药细胞株BGC823/5-FU,较其亲代细胞BGC823对5-FU、阿霉素、丝裂霉素和顺铂的耐药性分别提高10.82、2.50、22.23和2.00倍。其P-糖蛋白表达较BGC823细胞增高(P<0.01),柔红霉素积累量较BGC823细胞减低(P<0.01)。与亲代药物敏感BGC823细胞相比,耐药细胞株BGC823/5-FU细胞Survivin表达上升(P<0.05),Bcl-2表达升高(P<0.05),Bax表达下降(P<0.05),caspase-3表达减低(P<0.05)。结论:胃癌细胞株BGC823在5-FU的诱导下可形成多药耐药细胞株BGC823/5-FU,P-糖蛋白、凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2、Bax及caspase-3可能参与其耐药性的形成。 展开更多
关键词 胃肿瘤 氟尿嘧啶 抗药性 多药 细胞凋亡
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姜黄素对裸鼠乳腺移植瘤p21及CD44V_6表达的影响 被引量:8
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作者 王晓蕾 张莲英 +3 位作者 孙道旭 王永胜 崔福爱 胡晓燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1524-1526,共3页
目的:研究姜黄素对裸鼠乳腺移植瘤p21及CD44V6表达的影响。方法:选用人乳腺癌细胞株MCF-7对裸鼠进行异种移植,成瘤后随机分为2组:(1)阴性对照组;(2)姜黄素组。观测移植瘤的出瘤时间、成瘤率,测量瘤体大小并计算瘤表面积。同时应用RT-PCR... 目的:研究姜黄素对裸鼠乳腺移植瘤p21及CD44V6表达的影响。方法:选用人乳腺癌细胞株MCF-7对裸鼠进行异种移植,成瘤后随机分为2组:(1)阴性对照组;(2)姜黄素组。观测移植瘤的出瘤时间、成瘤率,测量瘤体大小并计算瘤表面积。同时应用RT-PCR,检测2组肿瘤组织中cyclin D1、p21及CD44V6的表达。结果:姜黄素组瘤表面积明显低于阴性对照组;姜黄素组p21表达量高于阴性对照组,CD44V6表达量明显降低,2组的cyclin D1表达差异无显著。结论:姜黄素抑制裸鼠MCF-7乳腺移植瘤CD44V6的表达,增加p21的表达。 展开更多
关键词 姜黄素 乳腺肿瘤 细胞周期蛋白D1 小鼠
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姜黄素对前列腺癌细胞LNCaP增殖的影响 被引量:8
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作者 杨磊 张莲英 +3 位作者 陈蔚文 胡晓燕 张建业 崔福爱 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期2194-2197,共4页
目的:姜黄素对前列腺癌细胞株LNCap增殖和凋亡的影响。方法:用不同剂量的姜黄素分别处理LNCap细胞,显微镜下观察细胞形态;MTT法检测细胞生长情况;流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率;然后检测姜黄素处理LNCap细胞后培养液中总前列腺特异抗... 目的:姜黄素对前列腺癌细胞株LNCap增殖和凋亡的影响。方法:用不同剂量的姜黄素分别处理LNCap细胞,显微镜下观察细胞形态;MTT法检测细胞生长情况;流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率;然后检测姜黄素处理LNCap细胞后培养液中总前列腺特异抗原(PSA)的变化,并用免疫印迹W estern b lotting技术检测雄激素受体(AR)的表达。结果:姜黄素能够抑制前列腺癌细胞LNCap的增殖和生长,40μmol/L作用24 h最强,细胞存活率为对照的40%;姜黄素诱导LNCap细胞凋亡,细胞形态呈凋亡特征,且40μmol/L作用最强,凋亡率为9.23%;姜黄素抑制LNCap细胞PSA表达,且40μmol/L姜黄素处理细胞24 h对PSA表达的抑制作用最强,PSA含量仅为对照的20%;W estern b lotting检测结果显示姜黄素抑制AR的表达,并且对AR表达的抑制程度依赖于姜黄素的浓度。结论:姜黄素抑制LNCap细胞增殖,诱导细胞凋亡,且表现出时间和剂量依赖性。姜黄素抑制LNCap细胞PSA与AR受体的表达。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 姜黄素 细胞凋亡 LNCAP细胞
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海带岩藻-半乳聚糖硫酸酯对小鼠白细胞减少症的影响 被引量:15
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作者 张英慧 王琪琳 王海仁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期365-365,共1页
海带生物活性物质硫酸酯多糖具有抗肿瘤、血脂调节、血糖调节、提高机体免疫能力等功能[1-4].多糖的提取通常要用酸碱水解及乙醇分级沉淀的方法.但由于海带中纤维素及果胶含量较多,多糖成分复杂,此种方法得到的多糖其产率及纯度都会受... 海带生物活性物质硫酸酯多糖具有抗肿瘤、血脂调节、血糖调节、提高机体免疫能力等功能[1-4].多糖的提取通常要用酸碱水解及乙醇分级沉淀的方法.但由于海带中纤维素及果胶含量较多,多糖成分复杂,此种方法得到的多糖其产率及纯度都会受到限制. 展开更多
关键词 白细胞减少症 岩藻-半乳聚糖硫酸酯 动物实验 海带多糖 FGS 药物
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人同源盒基因NKX3·1对前列腺癌细胞的诱导凋亡作用 被引量:6
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作者 刘闻闻 于春晓 +5 位作者 崔福爱 张鹏举 陈蔚文 胡晓燕 姜安丽 张建业 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期996-1002,共7页
构建人同源盒基因NKX3·1cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP中的表达及对细胞的促凋亡作用.以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3·1基因全长编码片段,将NKX3·1cDNA重组到真核表达载... 构建人同源盒基因NKX3·1cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP中的表达及对细胞的促凋亡作用.以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3·1基因全长编码片段,将NKX3·1cDNA重组到真核表达载体pcDNA3·1(+)中;将pcDNA3·1-NKX3·1表达载体瞬时转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP细胞,用RT-PCR和Western印迹检测NKX3·1cDNA在转录水平和蛋白水平的表达;绘制细胞生长曲线,观察NKX3·1对前列腺癌细胞增殖的抑制作用;用DNA/ladder和流式细胞术检测NKX3·1对前列腺癌细胞凋亡的影响,进一步用RT-PCR检测凋亡相关基因caspase3、caspase8、caspase9、Apaf1、survivin和Bcl2表达的变化.人同源盒基因NKX3·1cDNA真核表达载体pcDNA3·1-NKX3·1经酶切及测序鉴定正确.pcDNA3·1-NKX3·1转染PC-3和LNCaP细胞后,经RT-PCR和Western印迹证明能有效表达NKX3·1.生长曲线显示,前列腺癌细胞转染NKX3·1cDNA后细胞增殖受到抑制;前列腺癌细胞转染NKX3·1cDNA48h后,DNA电泳呈现具有凋亡特征的DNAladder;流式细胞术检测出现明显凋亡峰;RT-PCR检测凋亡相关基因.结果显示,caspase3、caspase8、caspase9基因表达明显增加,Bcl2基因表达明显减少.本研究成功构建了真核表达载体pcDNA3·1-NKX3·1,转染PC-3和LNCaP细胞后能有效表达,并对细胞具有诱导凋亡作用. 展开更多
关键词 同源盒基因NKX3.1 真核表达载体 前列腺癌细胞 细胞凋亡
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乳腺癌细胞株MCF-7中锌和锌转运体表达的关系 被引量:6
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作者 孙道旭 王晓蕾 +4 位作者 徐同福 崔福爱 胡晓燕 康鲁东 张莲英 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1138-1142,共5页
目的:通过ZnCl2和TPEN处理培养人乳腺癌细胞株MCF-7,观察高锌和低锌两种状态下锌转运体mRNA的表达情况。方法:0、50、100、150和200μmol/L的ZnCl2以及0、5、10和15μmol/L的TPEN分别处理培养MCF-7细胞12h,细胞存活率用噻唑蓝(MTT)方法... 目的:通过ZnCl2和TPEN处理培养人乳腺癌细胞株MCF-7,观察高锌和低锌两种状态下锌转运体mRNA的表达情况。方法:0、50、100、150和200μmol/L的ZnCl2以及0、5、10和15μmol/L的TPEN分别处理培养MCF-7细胞12h,细胞存活率用噻唑蓝(MTT)方法检测;荧光锌离子探针Zinquin检测细胞内锌离子含量;RT-PCR方法检测锌转运体(ZnT)mRNA的表达。结果:ZnCl2(浓度为150μmol/L和200μmol/L时)以及TPEN对MCF-7细胞均有生长抑制作用。ZnCl2处理后的MCF-7细胞内锌离子含量显著升高,TPEN处理后的MCF-7细胞内锌离子含量显著降低。与对照细胞相比,ZnCl2处理的细胞ZnT-1mRNA的表达水平随着ZnCl2浓度增加而依次升高;TPEN处理的细胞ZnT-1mRNA表达水平则普遍降低;ZIP2和ZIP10mRNA的表达水平随TPEN浓度的增加而依次升高。结论:高锌促进人乳腺癌MCF-7细胞ZnT-1mRNA的表达;低锌抑制人乳腺癌MCF-7细胞ZnT-1mRNA表达,促进ZIP2和ZIP10mRNA的表达。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 锌转运体 基因表达
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9-顺维甲酸对肺鳞癌细胞生长、分化及凋亡的作用 被引量:4
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作者 张世国 于雪艳 +2 位作者 孔立新 鲁秀华 田克力 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期73-75,I002,共4页
为探讨 9 顺维甲酸(9 cisRA)对肺鳞癌细胞的生物学作用 ,应用流式细胞术等对 9 cisRA处理前后L78和A2 两肺鳞癌细胞株的生长、分化和凋亡等特性进行检测观察。结果显示 ,9 cisRA对两肺癌细胞株的生长产生明显的抑制作用 ;应用 9 cisRA... 为探讨 9 顺维甲酸(9 cisRA)对肺鳞癌细胞的生物学作用 ,应用流式细胞术等对 9 cisRA处理前后L78和A2 两肺鳞癌细胞株的生长、分化和凋亡等特性进行检测观察。结果显示 ,9 cisRA对两肺癌细胞株的生长产生明显的抑制作用 ;应用 9 cisRA后 ,两株细胞分化特征明显 ;经 9 cisRA处理后的两肺鳞癌细胞凋亡率明显高于对照组。研究表明 ,9 cisRA具有抑制肺鳞癌细胞的生长、诱导其分化和凋亡等生物学作用。 展开更多
关键词 9-顺维甲酸 肺鳞癌 细胞生长 分化 细胞凋亡
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反义核酸抑制miR-20、miR-106表达对293T细胞增殖的影响 被引量:3
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作者 李有杰 张帅 +4 位作者 高宗华 张文娟 谢书阳 张鹏举 姜安丽 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1665-1669,共5页
目的:通过反义核酸技术抑制miR-20、miR-106的表达,检测对293T细胞增殖的影响。方法:应用特异性针对miR-20、miR-106的反义核酸转染293T细胞,用形态学、流式细胞技术研究反义核酸对细胞增殖的抑制作用,用定量PCR和ELISA研究miRNA和相关... 目的:通过反义核酸技术抑制miR-20、miR-106的表达,检测对293T细胞增殖的影响。方法:应用特异性针对miR-20、miR-106的反义核酸转染293T细胞,用形态学、流式细胞技术研究反义核酸对细胞增殖的抑制作用,用定量PCR和ELISA研究miRNA和相关靶基因的表达。结果:研究发现反义核酸可有效抑制miR-20和miR-106的表达,并明显抑制293T细胞的增殖;研究还表明反义miR-106可明显上调抑癌基因Rb的表达。结论:反义核酸通过抑制miRNA表达,上调抑癌基因Rb的表达,能明显抑制293T细胞增殖。 展开更多
关键词 RNA 反义 MIRNA 293T细胞 细胞增殖 基因表达
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肿瘤抑制因子RUNX3对人胃癌细胞中凋亡相关基因表达的影响 被引量:4
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作者 张春艳 刘志方 +3 位作者 徐霞 曾季平 于晗 贾继辉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1249-1253,共5页
目的:研究肿瘤抑制因子人类Runt相关转录因子3(RUNX3)对人胃癌细胞BGC823中凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(bcl-2)、bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(caspase-8)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9... 目的:研究肿瘤抑制因子人类Runt相关转录因子3(RUNX3)对人胃癌细胞BGC823中凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(bcl-2)、bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(caspase-8)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)表达的影响,以揭示RUNX3促进胃癌细胞凋亡的作用机制。方法:首先构建人Runx3的真核生物表达载体pcDNA3.1-Runx3,将pcDNA3.1-Runx3及空载体pcDNA3.1分别转染BGC823细胞48h后,提取细胞的总RNA和蛋白质,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)分别检测转染不同载体的细胞内RUNX3的表达情况,然后用RT-PCR和West-ern blotting检测凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达及蛋白的表达,β-actin作为内对照。结果:我们成功构建了人Runx3的真核生物表达载体pcDNA3.1-Runx3,将其转染BGC823细胞后,RT-PCR和Western blotting结果均显示:转染pcDNA3.1-Runx3的细胞中RUNX3的表达水平明显高于转染空载体pcDNA3.1的细胞(P<0.05);转染pcDNA3.1-Runx3的细胞中bcl-2基因的表达水平明显降低,caspase-3、caspase-9基因的表达水平明显增加(P<0.05)。结论:在BGC823细胞中,RUNX3通过下调bcl-2,上调caspase-3、caspase-9的表达促进细胞的凋亡。 展开更多
关键词 RUNT相关转录因子3 BGC823细胞 细胞凋亡
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9-顺-维甲酸对肺腺癌细胞cyclin D1、cdk4转录的影响 被引量:3
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作者 任桂杰 刘志方 +11 位作者 丁磊 胡国强 胡晓燕 田克立 于雪艳 任桂杰 刘志方 丁磊 胡国强 胡晓燕 田克立 于雪艳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期359-362,共4页
目的:检测9-顺-维甲酸处理前后人肺腺癌细胞株PG、A_(549)、SPC-A_1的cyclinD1、cdk4转录水平的变化,探讨9-顺-维甲酸抑制肺腺癌细胞生长的分子机制。方法:采用相对定量逆转录PCR方法,分析细胞周期因子cyclinD1、cdk4转录的变化。结果:9... 目的:检测9-顺-维甲酸处理前后人肺腺癌细胞株PG、A_(549)、SPC-A_1的cyclinD1、cdk4转录水平的变化,探讨9-顺-维甲酸抑制肺腺癌细胞生长的分子机制。方法:采用相对定量逆转录PCR方法,分析细胞周期因子cyclinD1、cdk4转录的变化。结果:9-顺-维甲酸既可以降低PG、A_(549)的cyclinD1转录(P<0.01),又可以降低PG、SPC-A_1的cdk4的转录(P<0.01或P<0.05)。结论:9-顺-维甲酸对肺腺癌细胞的生长抑制作用,与其调控细胞周期因子cyclinD1、cdk4的表达密切相关。 展开更多
关键词 维甲酸 肺肿瘤 细胞周期蛋白D1 CDK4
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人前列腺特异性膜抗原基因启动子/增强子表达载体的构建及组织特异性鉴定 被引量:4
13
作者 康鲁东 吴伟芳 +3 位作者 崔福爱 王秀利 胡晓燕 孔峰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期120-123,共4页
目的:构建前列腺特异性表达的人前列腺特异膜抗原(PSMA)基因启动子/增强子表达载体,并进行组织特异性鉴定。方法:从人外周血中提取基因组DNA,采用PCR技术分别扩增PSMA上游1175bp的启动子序列,及第三内含子中258bp的增强子序列,将两个序... 目的:构建前列腺特异性表达的人前列腺特异膜抗原(PSMA)基因启动子/增强子表达载体,并进行组织特异性鉴定。方法:从人外周血中提取基因组DNA,采用PCR技术分别扩增PSMA上游1175bp的启动子序列,及第三内含子中258bp的增强子序列,将两个序列定向克隆至荧光素酶报告基因表达质粒pGL3-Basic,构建前列腺特异性表达载体pGL3-PSMP-PSME。将构建载体用脂质体分别转染前列腺癌PC-3M细胞株及4种非前列腺癌细胞株,48h后通过检测荧光素酶表达活性,确定克隆的启动子及增强子的活性及其组织特异性表达活性。结果:构建的pGL3-PSMP-PSME质粒经酶切及DNA测序分析鉴定,证实克隆片段的大小、插入方向及其序列正确。细胞转染结果显示,pGL3-PSMP-PSME在PC-3M细胞株中表达活性明显高于其它4种非前列腺癌细胞株。结论:构建的前列腺表达载体具有较高的组织特异性,为进一步研究PSMA调控序列驱动治疗基因进行前列腺癌的靶向生物治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 前列腺特异抗原
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esiRNA分析人源驱动蛋白MKLP1在胞质分裂中的功能 被引量:1
14
作者 陈蔚文 赵健 +4 位作者 Changjun ZHU 孔峰 吴伟芳 张建业 Wei JIANG 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期554-560,共7页
为探讨人源驱动蛋白MKLP1在有丝分裂和胞质分裂中的作用,以E.coliRNaseⅢ制备MKLP1的3′UTResiRNA转染HeLa细胞,通过定量RTPCR、Western印迹检测MKLP1esiRNA对MKLP1基因的沉默效率.再利用FACS分析、免疫荧光染色和活细胞成像分析检测MK... 为探讨人源驱动蛋白MKLP1在有丝分裂和胞质分裂中的作用,以E.coliRNaseⅢ制备MKLP1的3′UTResiRNA转染HeLa细胞,通过定量RTPCR、Western印迹检测MKLP1esiRNA对MKLP1基因的沉默效率.再利用FACS分析、免疫荧光染色和活细胞成像分析检测MKLP1表达缺失后在有丝分裂和胞质分裂不同时期的细胞形态学、细胞分裂指数、细胞百分数,动态观察有丝分裂和胞质分裂期间的表型改变,以系统分析MKLP1的功能.最后通过挽救实验验证MKLP1esiRNA的作用特异性.实验显示MKLP1esiRNA转染HeLa细胞能够有效地特异性消除MKLP1的表达,并被异位表达的MKLP1所挽救.MKLP1蛋白在有丝分裂后期和末期前期位于纺锤体中间带,在末期后期和胞质分裂的最后阶段集中于中间体的中心处.MKLP1表达缺失使中间体正确形成和胞质分裂的完成受到严重抑制,造成大量双多核细胞堆积.结果表明,MKLP1在胞质分裂中间体形成和有丝分裂末期前期向后期过渡过程中起关键作用,是纺锤体中间体中间带相关蛋白,为胞质分裂所必需. 展开更多
关键词 esiRNA 驱动蛋白 人源驱动蛋白1 胞质分裂 HeLa细胞 WESTERN印迹 定量RT-PCR 有丝分裂 E.COLI 细胞分裂指数
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Shh信号通路在神经胶质瘤发生发展中的作用 被引量:2
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作者 景芳邈 滕菲菲 张孟业 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期553-557,共5页
Sonic hedgehog(Shh)信号转导通路是脊椎动物hedgehog信号通路家族成员之一,主要由分泌型糖蛋白Shh配体、跨膜蛋白受体Ptch和Smo以及下游转录因子Gli蛋白组成,在胚胎发育尤其是神经系统发育中起着重要的作用。近年研究发现Shh信号通路... Sonic hedgehog(Shh)信号转导通路是脊椎动物hedgehog信号通路家族成员之一,主要由分泌型糖蛋白Shh配体、跨膜蛋白受体Ptch和Smo以及下游转录因子Gli蛋白组成,在胚胎发育尤其是神经系统发育中起着重要的作用。近年研究发现Shh信号通路与多种肿瘤的形成有着密切的关系。神经胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤,生长迅速且多呈浸润性,易复发,是脑肿瘤中治疗效果最差的肿瘤之一,主要原因是多种信号通路的异常激活增强了胶质瘤细胞的增殖能力。此外,神经胶质瘤是由不同属性的肿瘤细胞混合构成,胶质瘤中的肿瘤干细胞具有无限增殖能力,这一特性也对胶质瘤的发生、发展和复发起着重要作用。有研究发现Shh信号通路与神经胶质瘤的发生、增殖及胶质瘤干细胞有密切关系。本文主要就Shh信号通路的组成和其在神经胶质瘤发生及胶质瘤干细胞中的相关作用作一综述。 展开更多
关键词 Sonic HEDGEHOG信号通路 神经胶质瘤 肿瘤干细胞
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p53过表达抑制同源盒基因NKX3.1启动子活性 被引量:1
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作者 于春晓 刘闻闻 +5 位作者 吴伟芳 陈蔚文 张鹏举 张琦 姜安丽 张建业 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期560-565,共6页
NKX3.1是前列腺特异表达的同源盒基因,在前列腺癌的发生发展中起重要作用,而在前列腺癌进展中常会发生p53的基因突变.为研究两者之间的关系,构建NKX3.1启动子(1040bp)-荧光素酶报告基因重组质粒(pGL3-1040)及其缺失突变体,瞬时转染前列... NKX3.1是前列腺特异表达的同源盒基因,在前列腺癌的发生发展中起重要作用,而在前列腺癌进展中常会发生p53的基因突变.为研究两者之间的关系,构建NKX3.1启动子(1040bp)-荧光素酶报告基因重组质粒(pGL3-1040)及其缺失突变体,瞬时转染前列腺癌细胞LNCaP.通过荧光素酶表达活性分析,检测p53过表达对NKX3.1启动子活性的影响.结果表明:p53在LNCaP细胞中过表达可明显抑制NKX3.1启动子活性;RT-PCR及Western引迹检测p53过表达对NKX3.1表达的影响.结果表明,p53过表达可以明显抑制同源盒基因NKX3.1的表达.通过TRANSFAC软件分析,在NKX3.1基因上游-526至-507区存在一个p53反应元件的5′核心序列.缺失pGL3-1040中的p53反应元件核心序列并不能消除p53对NKX3.1启动子的抑制作用,表明p53不是通过p53反应元件直接抑制NKX3.1启动子活性.进一步通过5′缺失突变分析,发现NKX3.1启动子-140~+8bp区仍受p53负调控.此148bp区域中含有一个Sp1和一个CREB元件,瞬时共转染Sp1表达载体或CREB表达载体的结果表明,p53并不是通过与Sp1或CREB相互作用对NKX3.1启动子发挥抑制作用的.上述结果表明,p53过表达可以抑制同源盒基因NKX3.1启动子活性,下调NKX3.1基因的转录,其调控机制有待进一步研究. 展开更多
关键词 同源盒基因NKX3.1 启动子 P53 负调控
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MADD在肺腺癌组织中的表达及对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响 被引量:1
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作者 魏玉平 吴金香 +4 位作者 郭元芳 孙高英 张强 毕文祥 董亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期354-357,共4页
目的:探讨MADD在肺正常组织及肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:收集肺临床病理组织标本,免疫组化法检测肺正常组织和肺癌组织MADD表达;培养人肺腺癌A549细胞,逆转录PCR检测其IG20基因表达;用携带MADD基因的... 目的:探讨MADD在肺正常组织及肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:收集肺临床病理组织标本,免疫组化法检测肺正常组织和肺癌组织MADD表达;培养人肺腺癌A549细胞,逆转录PCR检测其IG20基因表达;用携带MADD基因的质粒和能够沉默MADD表达的慢病毒载体分别转染A549细胞,Western blot、MTT分析和流式细胞术检测其MADD表达、增殖及凋亡。结果:肺腺癌组织MADD表达水平明显高于肺正常组织和肺鳞癌组织;A549细胞能够表达MADD;高表达MADD能抑制A549细胞凋亡,提高其增殖活力,而沉默MADD表达则能促进A549细胞凋亡,降低其增殖活力。结论:肺腺癌组织MADD表达明显增高;MADD可通过抑制凋亡来促进肺腺癌细胞生存。 展开更多
关键词 肺癌 MADD 免疫组化 细胞凋亡 TRAIL
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载体介导的哺乳动物细胞RNA干扰技术与基因治疗
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作者 宋现让 柳永蕾 于金明 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第3期223-225,共3页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是生物在进化过程中,抵御病毒感染及由重复序列和突变引起基因组不稳定 性的保护机制。RNAi是由双链RNA引发的靶基因mRNA降解而导致基因转录后沉默的现象,研究者利用这一现象对要研 究的基因进行抑制,从... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是生物在进化过程中,抵御病毒感染及由重复序列和突变引起基因组不稳定 性的保护机制。RNAi是由双链RNA引发的靶基因mRNA降解而导致基因转录后沉默的现象,研究者利用这一现象对要研 究的基因进行抑制,从而形成了RNAi技术。RNAi具有特异高效的特点,因此该技术已在研究基因功能和进行基因治疗中得 到广泛应用。RNAi的实现途径有多种,每种方式都各有优缺点。 展开更多
关键词 RNA干扰 SIRNA SHRNA 基因治疗
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miRNA let-7a1真核表达载体的构建及对肺癌细胞增殖的影响 被引量:3
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作者 张菊 关恒云 +5 位作者 张鹏举 陈蔚文 刘闻闻 赵健 胡晓燕 姜安丽 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1495-1500,共6页
目的:构建miRNA let-7a1真核表达载体,研究其在肺癌A549细胞株的表达及对A549细胞增殖的影响。方法:以人肺癌细胞A549的总RNA为模板,RT-PCR扩增miRNApre-let-7a1基因序列,将miRNApre-let-7a1基因克隆到真核表达载体pSilencerTM4.1-CMVne... 目的:构建miRNA let-7a1真核表达载体,研究其在肺癌A549细胞株的表达及对A549细胞增殖的影响。方法:以人肺癌细胞A549的总RNA为模板,RT-PCR扩增miRNApre-let-7a1基因序列,将miRNApre-let-7a1基因克隆到真核表达载体pSilencerTM4.1-CMVneo中,构建成pSilencerTM4.1-let-7a1重组体。将pSilencerTM4.1-let-7a1表达载体瞬时转染肺癌A549细胞,RT-PCR法检测miRNAlet-7a1在转录水平的表达。根据miRBaseTargets数据库,查hsa-let-7a1靶序列,构建let-7a1靶序列-报道基因融合质粒pMIR-report-let-7a1T,与pSilencerTM4.1-let-7a1表达载体共转染A549细胞,通过荧光素酶活性检测pSilencerTM4.1-let-7a1质粒对其靶序列的作用。MTT法检测pSilencerTM4.1-let-7a1转染A549细胞后,对细胞增殖的影响。结果:pSilencerTM4.1-let-7a1真核表达栽体和let-7a1靶序列-报道基因融合质粒经酶切及测序鉴定正确。pSilen-cerTM4.1-let-7a1转染A549细胞后,经RT-PCR证明能有效表达miRNAlet-7a1。pSilencerTM4.1-let-7a1质粒和pMIR-report-let-7a1T质粒共转染A549细胞后,通过报告基因检测,相对荧光素酶活性明显降低,表明pSilencerTM4.1-let-7a1转染A549细胞后,可表达let-7a1并具有生物学活性。MTT检测结果显示:pSilencerTM4.1-let-7a1转染后的A549活细胞数目明显减少。结论:成功构建了真核表达载体pSilencerTM4.1-let-7a1,转染肺腺癌A549细胞后能有效表达,miRNAlet-7a1基因过表达抑制A549细胞的增殖。 展开更多
关键词 MIRNA let-7a1 真核表达载体 A549细胞 细胞增殖 基因表达
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NKX3.1下调前列腺癌PC-3细胞中抗凋亡基因bcl-2的表达 被引量:3
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作者 陈兆波 刘春艳 +5 位作者 倪娜娜 于洋 张鹏举 陈蔚文 崔福爱 姜安丽 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1902-1906,共5页
目的:研究前列腺特异转录因子NKX3.1对bcl-2基因表达以及前列腺癌细胞凋亡的影响。方法:转染pcDNA3.1-NKX3.1于前列腺癌PC-3细胞中,得到瞬时转染NKX3.1的PC-3细胞,通过RT-PCR和Western blotting方法研究NKX3.1对bcl-2基因的表达的影响,... 目的:研究前列腺特异转录因子NKX3.1对bcl-2基因表达以及前列腺癌细胞凋亡的影响。方法:转染pcDNA3.1-NKX3.1于前列腺癌PC-3细胞中,得到瞬时转染NKX3.1的PC-3细胞,通过RT-PCR和Western blotting方法研究NKX3.1对bcl-2基因的表达的影响,并通过EMSA技术,研究NKX3.1诱导bcl-2基因下调的分子机制;进一步通过流式细胞术、凋亡小体染色等方法研究NKX3.1对细胞凋亡的影响。结果:NKX3.1可明显下调PC-3细胞中bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白的表达;EMSA结果证明NKX3.1可与bcl-2基因上游调控区中的NKX3.1结合元件相互作用;流式细胞术结果显示,PC-3细胞转染NKX3.1后,细胞凋亡数增加了1.41倍;用Hoechst 33258细胞染色发现NKX3.1可使PC-3细胞凋亡小体数量明显增加。结论:NKX3.1可下调抗凋亡基因bcl-2的表达,促进前列腺癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 NKX3.1蛋白 PC-3细胞 基因 BCL-2 细胞凋亡
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