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槲皮素对前列腺癌细胞增殖及转录因子Sp1功能的抑制作用 被引量:21
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作者 苑辉卿 杨玲玲 +3 位作者 姜安丽 孔峰 张建业 Charles YF YOUNG 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期673-678,共6页
雄激素受体(androgenreceptor,AR)作为核转录因子,其高表达、基因突变以及AR辅激活因子的过表达等造成AR的异常激活与前列腺癌细胞的增殖、恶化转移、多药耐药等密切相关.天然黄酮槲皮素(quercetin),是一很有潜力的预防和治疗前列腺肿... 雄激素受体(androgenreceptor,AR)作为核转录因子,其高表达、基因突变以及AR辅激活因子的过表达等造成AR的异常激活与前列腺癌细胞的增殖、恶化转移、多药耐药等密切相关.天然黄酮槲皮素(quercetin),是一很有潜力的预防和治疗前列腺肿瘤的化合物.槲皮素不仅抑制前列腺癌细胞LNCaP的增殖,并呈剂量依赖性,而且下调前列腺癌中AR的表达、抑制AR的转录激活功能.GCbox是AR核心启动子的主要正调控元件,是转录因子Sp1的结合位点.细胞转染结果表明,槲皮素能抑制Sp1蛋白对AR启动子的激活作用,可能是槲皮素下调AR表达的机理之一.进一步研究显示,槲皮素还能明显抑制Sp1蛋白对AR转录激活功能的增强作用.Western印迹结果显示,槲皮素对Sp1蛋白表达无明显影响,但能够诱导c-Jun的高表达,而高表达的c-Jun蛋白能逆转Sp1蛋白对AR的转录激活作用,由此推测,槲皮素可能通过介导c-Jun与Sp1的蛋白质相互作用,抑制Sp1的功能,进而起到抑制AR表达和功能的作用.免疫沉淀结果又进一步证实了Sp1与c-Jun二者的相互作用.因此,槲皮素可能通过抑制前列腺癌细胞中AR的表达和功能抑制了细胞的增殖,其分子机理可能与槲皮素诱导的c-Jun与Sp1蛋白相互作用、降低Sp1对AR的转录激活作用有关. 展开更多
关键词 槲皮素 细胞增殖 SP1 前列腺癌细胞 抑制作用
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慢病毒介导的中性内肽酶对Aβ诱导的SK-N-SH细胞凋亡的影响 被引量:2
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作者 任凯 崔云燕 +5 位作者 邵世滨 张亚伦 杨玲玲 段珊 丁岩 崔行 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2470-2474,共5页
目的:探讨脑中性内肽酶(NEP)外源表达对神经毒物质β淀粉样肽(Aβ)诱导SK-N-SH细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体法将含中性内肽酶NEP的四质粒系统慢病毒载体转染293FT包装细胞,制备高滴度病毒载体,感染Aβ处理的SK-N-SH细胞,用Western b... 目的:探讨脑中性内肽酶(NEP)外源表达对神经毒物质β淀粉样肽(Aβ)诱导SK-N-SH细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体法将含中性内肽酶NEP的四质粒系统慢病毒载体转染293FT包装细胞,制备高滴度病毒载体,感染Aβ处理的SK-N-SH细胞,用Western blotting方法检测NEP对Aβ的降解作用、MTT法检测细胞存活率、流式细胞术分析细胞凋亡情况、RT-PCR技术测定凋亡相关基因bcl-2及bax的表达及caspase-3活性检测。结果:胞内高表达的NEP能够显著降解Aβ,其降解程度与NEP的表达量有剂量依赖关系。细胞存活率及流式细胞术检测结果显示NEP高表达可减轻Aβ诱导的细胞凋亡,细胞存活率于感染病毒后48 h最强,为对照的170%(P<0.01),NEP活性组的凋亡率为3.86%,低于对照组的6.41%;RT-PCR结果显示NEP对Aβ诱导的细胞凋亡保护作用可能是通过减少bax的表达,抑制了caspase-3的激活程度来实现的。结论:NEP可以降解Aβ,可以保护由Aβ沉积所致的神经细胞凋亡。 展开更多
关键词 中性内肽酶 慢病毒载体 Β淀粉样肽 细胞凋亡 阿尔茨海默病
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PSA启动子介导的TAT-p21^(WAF1/CIP1)融合蛋白在前列腺癌细胞中的特异表达及活性初探 被引量:1
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作者 蔡捷 苑辉卿 +5 位作者 孔峰 任凯 王小玲 吉恺 胡晓燕 张建业 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期498-503,共6页
目的:设计并构建含有前列腺组织特异性抗原(PSA)启动子的TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白真核表达载体(pPSA-TAT-p21),使由TAT蛋白转导结构域(TAT)介导的抑癌基因蛋白p21WAF1/CIP1(p21)能够在前列腺癌细胞中实现特异性的跨膜转运,增强p21对前... 目的:设计并构建含有前列腺组织特异性抗原(PSA)启动子的TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白真核表达载体(pPSA-TAT-p21),使由TAT蛋白转导结构域(TAT)介导的抑癌基因蛋白p21WAF1/CIP1(p21)能够在前列腺癌细胞中实现特异性的跨膜转运,增强p21对前列腺癌的抑制作用。方法:利用PCR技术构建含有PSA启动子、TAT蛋白转导序列和p21读码框架的真核表达载体pPSA-TAT-p21,并进行酶切、测序鉴定。脂质体法在前列腺癌LNCaP细胞和大肠癌HT-29细胞中转染上述表达载体及对照质粒后进行反转录PCR(RT-PCR),检测p21的mRNA以及蛋白在不同细胞中的表达情况。MTT法检测转染pPSA-TAT-p21后LNCaP细胞的增殖情况。结果:成功构建pPSA-TAT-p21真核表达载体。RT-PCR和Western blotting结果显示PSA-TAT-p21在前列腺癌细胞中有明显表达,在大肠癌细胞中基本不表达,呈现特异性的表达,而由CMV启动子介导的p21(pCMV-21)对照组在两个细胞株中均有表达。细胞增殖实验结果显示,含有TAT蛋白转导结构域的PSA-TAT-p21的融合蛋白对前列腺癌细胞增殖的抑制作用明显高于不含TAT的PSA-p21蛋白。结论:pPSA-TAT-p21能够在前列腺癌细胞中特异性地高效表达,为前列腺癌基因的靶向治疗提供了实验依据。 展开更多
关键词 前列腺特异抗原 TAT—p21^WAF1/CIP1融合蛋白 前列腺肿瘤 LNCAP细胞 HT-29细胞
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神经营养肽NP14基因的合成及其在大肠杆菌中的高表达
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作者 张之勇 苑辉卿 +5 位作者 姜安丽 蔡捷 任凯 胡晓燕 孔峰 张建业 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期2304-2308,共5页
目的:根据鞘脂激活蛋白原神经营养序列设计并构建短肽(neurotrophic peptide,NP)多拷贝串连表达载体,利用基因工程的方法制备短肽NP。方法:根据大肠杆菌的偏爱密码子设计并合成NP的碱基片段,通过PCR方法合成串联双拷贝2NP片段,经平端连... 目的:根据鞘脂激活蛋白原神经营养序列设计并构建短肽(neurotrophic peptide,NP)多拷贝串连表达载体,利用基因工程的方法制备短肽NP。方法:根据大肠杆菌的偏爱密码子设计并合成NP的碱基片段,通过PCR方法合成串联双拷贝2NP片段,经平端连接克隆到载体pUC18中。利用EcoT14I酶切pUC18-2NP后可产生非镜相对称黏性末端,与表达载体pETEcoT一次连接反应,得到一系列含有不同片段拷贝数的表达载体pETE-coT-multiNP,经PCR-array方法进行阳性克隆筛选、测序鉴定后转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行原核表达。结果:经IPTG诱导后,在BL21(DE3)菌中高效表达了2、4、8拷贝融合蛋白,并在每个单拷贝之间加入了溴化氢的切割位点,使融合蛋白切割后能够得到单拷贝的短肽。结论:短肽NP在大肠杆菌中获得高效表达,为进一步研究其生物活性奠定了基础。 展开更多
关键词 神经营养肽 融合蛋白质类 原核表达
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