气相色谱法测定线粒体脑肌病患者血清和脑脊液中的乳酸 被引量：17

1

作者 刘师莲 祁维平 +3 位作者 秦延江 刘传华 王晓明 王伟 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期480-482,共3页

血清和脑脊液样品经甲酯化处理,氯仿提取,氮气吹干,残留物用庚烷溶解后进样,用气相色谱法测定线粒体脑肌病患者血清和脑脊液中乳酸含量。结果显示,线粒体脑肌病患者的血清、脑脊液中乳酸含量分别为(294±101)mg/L和(312±103)mg... 血清和脑脊液样品经甲酯化处理,氯仿提取,氮气吹干,残留物用庚烷溶解后进样,用气相色谱法测定线粒体脑肌病患者血清和脑脊液中乳酸含量。结果显示,线粒体脑肌病患者的血清、脑脊液中乳酸含量分别为(294±101)mg/L和(312±103)mg/L,比正常人((192±37)mg/L和(153±81)mg/L)以及神经系统其他疾病患者((150±34)mg/L和(173±29)mg/L)显著增高(P<0.05)。该方法可作为筛选线粒体脑肌病的临床诊断方法。 展开更多

关键词 气相色谱法 测定 线粒体脑肌病 血清 脑脊液 乳酸

在线阅读 下载PDF 职称材料

ODC,AdoMetDC双反义腺病毒对肺癌增殖和侵袭抑制作用的体外和体内研究(英文) 被引量：9

2

作者 田辉 刘贤锡 +2 位作者 张冰 孙启峰 孙东峰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第7期709-717,共9页

鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)是多胺体内合成的2个关键酶.研究腺病毒Ad-ODC-AdoMetDCas介导的ODC和AdoMetDC反义RNA对肺癌多胺合成,细胞增殖以及侵袭的抑制作用.用活细胞计数和流式细胞术分别检测Ad-ODCas和Ad-ODC-Ad... 鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)是多胺体内合成的2个关键酶.研究腺病毒Ad-ODC-AdoMetDCas介导的ODC和AdoMetDC反义RNA对肺癌多胺合成,细胞增殖以及侵袭的抑制作用.用活细胞计数和流式细胞术分别检测Ad-ODCas和Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌A-549细胞增殖的影响,蛋白质印迹和HPLC方法分别检测腺病毒对肺癌A-549细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,TUNEL标记检测法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌细胞凋亡的影响,Matrigel侵袭实验分析腺病毒对肺癌A-549细胞侵袭活性的改变,裸鼠皮下移植瘤模型研究Ad-ODC-AdoMetDCas对体内肺癌生长的抑制作用.实验结果显示,Ad-ODC-AdoMetDCas明显抑制肺癌A-549细胞的增殖,导致细胞凋亡,显著降低肺癌A-549细胞的体外侵袭能力,肺癌A-549细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后细胞内3种多胺含量都明显降低,Ad-ODC-AdoMetDCas对已形成的裸鼠皮下移植瘤具有明显的抑制作用.实验表明,ODC和AdoMetDC双反义腺病毒具有显著抑制肺癌增殖和侵袭的作用,对于肺癌的防治研究具有一定的前景. 展开更多

关键词 鸟氨酸脱羧酶 S-甲硫氨酸脱羧酶 多胺 肺癌 基因治疗

在线阅读 下载PDF 职称材料

糖尿病大鼠肾脏组织氧化应激及其在糖尿病肾病发病中的意义 被引量：24

3

作者 李晓博 牟忠卿 +4 位作者 陈丽 付艺凌 张岩 咸玉欣 侯新国 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期806-809,共4页

目的:观察糖尿病大鼠肾脏组织中氧化应激水平,探讨氧化应激在糖尿病肾病中的作用。方法:糖尿病模型鼠采用STZ诱导。36只大鼠随机分为正常对照组、糖尿病维持组、糖尿病治疗组。喂养至12周,测定各组血糖、血中胆固醇、甘油三酯、尿素氮... 目的:观察糖尿病大鼠肾脏组织中氧化应激水平,探讨氧化应激在糖尿病肾病中的作用。方法:糖尿病模型鼠采用STZ诱导。36只大鼠随机分为正常对照组、糖尿病维持组、糖尿病治疗组。喂养至12周,测定各组血糖、血中胆固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐、糖化血红蛋白水平、尿肌酐水平和24h尿蛋白含量。运用比色法测定肾脏皮质中抗氧化酶的活性,包括总超氧化物歧化酶(TSOD)、铜锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn SOD)、锰超氧化物歧化酶(Mn SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)以及丙二醛(MDA)的含量。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量测定肾脏组织中各抗氧化酶mRNA的表达水平。结果:糖尿病治疗组与正常对照组间各指标无显著差异。糖尿病维持组中血糖、胆固醇、甘油三酯、糖化血红蛋白明显高于糖尿病治疗组和正常对照组;抗氧化酶中,TSOD、Cu-Zn SOD、CAT活性明显低于糖尿病治疗组和正常对照组,GSH-Px活性则高于糖尿病治疗组和正常对照组,Mn SOD活性在各组中无显著差异;而MDA水平则明显高于糖尿病治疗组和正常对照组。糖尿病维持组中GSH-Px、Cu-Zn SOD的mRNA表达水平高于其它组,而CAT mRNA的表达则低于其它组,Mn SOD的mRNA表达水平在各组无明显差异。糖尿病维持组尿蛋白含量明显高于其它组,而肌酐清除率则明显低于其它组。结论:高血糖可以影响大鼠肾脏组织中抗氧化酶的表达,升高糖尿病大鼠肾脏组织的氧化应激水平,在糖尿病肾病发病机制中起重要作用。 展开更多

关键词 糖尿病肾病 应激 抗氧化酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸟氨酸脱羧酶基因反义RNA对前列腺癌细胞生长的抑制作用 被引量：5

4

作者 张岩 刘贤锡 +2 位作者 张冰 胡海燕 龚磊 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期128-133,共6页

为研究鸟氨酸脱羧酶 (ODC)基因反义RNA对前列腺癌细胞的生长抑制作用 ,将表达ODC第 3外显子反义RNA的重组腺病毒rAd ODC Ex3as分别感染前列腺癌细胞株PC 3和LNCap .通过MTT法观察其对前列腺癌细胞增殖的影响 ,并确定不同细胞合适的感染... 为研究鸟氨酸脱羧酶 (ODC)基因反义RNA对前列腺癌细胞的生长抑制作用 ,将表达ODC第 3外显子反义RNA的重组腺病毒rAd ODC Ex3as分别感染前列腺癌细胞株PC 3和LNCap .通过MTT法观察其对前列腺癌细胞增殖的影响 ,并确定不同细胞合适的感染滴度 ,再采用Western印迹和流式细胞术检测rAd ODC Ex3as对细胞中ODC表达的抑制作用、对细胞周期和凋亡的影响以及与CDK抑制物p2 1的关系 .实验显示 ,rAd ODC Ex3as分别以 5 0MOI、2 5MOI感染PC 3和LNCap细胞可明显抑制其生长增殖 ,而不引起细胞毒性作用 ;其对两种细胞中ODC表达的抑制作用分别为4 5 %和 5 9% .流式细胞DNA含量分析证实 ,rAd ODC Ex3as可引起PC 3和LNCap细胞周期G1期阻滞 ,但并未引起凋亡 .通过Western印迹发现 ,细胞中ODC表达的降低可诱导p2 1蛋白的过表达 .结果表明 ,rAd ODC Ex3as在体外能有效地干扰ODC基因的表达 ,并通过诱导p2 1的过表达使其细胞周期停于G1期 ,从而抑制前列腺癌细胞PC 3和LNCap的增殖 ,为其进一步基因治疗的研究打下基础 . 展开更多

关键词 鸟氨酸脱羧酶 腺病毒 基因治疗 反义RNA 前列腺癌细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

抑癌基因p73 FHIT和PTEN蛋白表达与肺癌临床病理学特征及预后关系探讨 被引量：6

5

作者 田辉 刘贤锡 王善政 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期196-199,共4页

目的:探讨抑癌基因p73、FHIT和PTEN与肺癌发生、发展的关系。方法:应用免疫组化SABC法检测65例肺癌组织、癌旁组织和正常肺组织中p73、FHIT和PTEN基因蛋白的表达。结果:肺癌组织中p73蛋白阳性表达率明显高于正常肺组织和癌旁组织(P<0... 目的:探讨抑癌基因p73、FHIT和PTEN与肺癌发生、发展的关系。方法:应用免疫组化SABC法检测65例肺癌组织、癌旁组织和正常肺组织中p73、FHIT和PTEN基因蛋白的表达。结果:肺癌组织中p73蛋白阳性表达率明显高于正常肺组织和癌旁组织(P<0.05),正常肺组织和癌旁组织中FHIT和PTEN蛋白阳性表达率明显高于肺癌组织(P<0.05);不同类型和不同分化程度肺癌组织中p73、FHIT和PTEN蛋白的阳性表达率比较差异无显著性(P>0.05);肺癌组织中p73、FHIT和PTEN蛋白阳性表达率与临床分期和患者预后有明显相关性(P<0.05)。结论:p73、FHIT和PTEN基因蛋白表达缺失在不同类型和不同分化程度在肺癌发生、发展中可能存在着普遍意义,三者可作为判断肺癌生物学行为和患者预后的参考指标。 展开更多

关键词 肺肿瘤 抑癌基因p73 FHIT PTEN 免疫组织化学

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸟氨酸脱羧酶和S-甲硫氨酸脱羧酶双反义RNA腺病毒抑制食管癌细胞的增殖和侵袭 被引量：2

6

作者 宋旭 田辉 +3 位作者 刘贤锡 张冰 李文军 徐杰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第4期316-320,共5页

目的:探讨鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)和S-甲硫氨酸脱羧酶(s-adenosylmethionine decarboxylase,AdoMetDC)的双反义RNA腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞增殖和侵袭的抑制作用。方法:重组腺病毒载体Ad-OD... 目的:探讨鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)和S-甲硫氨酸脱羧酶(s-adenosylmethionine decarboxylase,AdoMetDC)的双反义RNA腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞增殖和侵袭的抑制作用。方法:重组腺病毒载体Ad-ODC-AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞,应用Western blotting和HPLC分别检测双反义RNA腺病毒对食管癌细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺合成的抑制作用。采用活细胞计数法观察其对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响,采用Matrigel侵袭实验检测重组腺病毒载体感染对食管癌Eca109细胞侵袭活性的影响。同时应用裸鼠皮下移植瘤模型观察Ad-ODC-AdoMetDCas对移植食管癌生长增殖的抑制作用。结果:Western bloting证实Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白的表达,HPLC结果显示食管癌Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas 后细胞内腐胺、精胺、精脒等3种多胺含量都明显降低(P<0.01)。活细胞计数法表明Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109 细胞生长增殖有明显抑制作用(P<0.01),Matrigel侵袭实验结果显示Ad-ODC-AdoMetDCas可显著降低食管癌Eca109细胞的体外侵袭能力(P<0.01)。体内实验显示,双反义RNA腺病毒载体对已形成的裸鼠皮下移植瘤具有明显的抑制作用(P< 0.05或P<0.01)。结论:ODC和AdoMetDC双反义RNA重组腺病毒能显著抑制食管癌细胞的增殖和侵袭,具有食管癌基因治疗临床应用的潜在价值。 展开更多

关键词 鸟氨酸脱羧酶 S-甲硫氨酸脱羧酶 反义RNA 重组腺病毒 食管癌 基因治疗

在线阅读 下载PDF 职称材料

中老年人肺癌抗血管和抗淋巴管生成治疗的可行性探讨 被引量：2

7

作者 田辉 刘贤锡 王善政 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第4期256-256,共1页

肿瘤的侵袭和转移是恶性肿瘤死亡的主要原因.基质金属蛋白酶9(MMP-9)是降解基底膜和细胞外基质成分的蛋白水解酶,可促进癌细胞对周围组织的浸润,在肿瘤血管生成及肿瘤侵袭和转移过程中起重要调节作用.乙酰肝素酶(HPSE)在多种人类恶性肿... 肿瘤的侵袭和转移是恶性肿瘤死亡的主要原因.基质金属蛋白酶9(MMP-9)是降解基底膜和细胞外基质成分的蛋白水解酶,可促进癌细胞对周围组织的浸润,在肿瘤血管生成及肿瘤侵袭和转移过程中起重要调节作用.乙酰肝素酶(HPSE)在多种人类恶性肿瘤中高度表达,具有促进肿瘤细胞侵袭和转移的重要作用,并且与肿瘤新生血管的形成具有密切关系.血管内皮生长因子C(VEGF-C)是迄今发现的唯一特异性促淋巴管生长因子.肺癌是人类最常见的恶性肿瘤,目前所有的各种治疗肺癌的方法效果均不能令人满意.本研究采用免疫组织化学染色方法检测了65例肺癌组织、癌旁组织和正常肺组织中MMP-9,HPSE和VEGF-C蛋白的表达,以探讨人肺癌抗血管和淋巴管生成治疗的可行性. 展开更多

关键词 治疗 淋巴管生成 人肺癌 中老年人 血管 侵袭 恶性肿瘤 人类 乙酰肝素酶 蛋白水解酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体对食管癌细胞凋亡影响的研究(英文) 被引量：1

8

作者 田辉 徐杰 +3 位作者 刘贤锡 张冰 李文军 宋旭 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第2期238-243,共6页

为探讨ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响,应用MTT法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响,采用Westernblot和HPLC的方法分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中OD... 为探讨ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响,应用MTT法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响,采用Westernblot和HPLC的方法分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,同时应用原位末端标记(TUNEL)法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响,透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变.实验结果显示,应用MTT法观察发现Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用.以Ad-ODC-AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞,可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达.HPLC结果显示,食管癌Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内3种多胺含量都明显降低.TUNEL标记检测结果显示Ad-ODC-AdoMetDCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡.透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征(表现细胞体积缩小,核皱缩、碎裂,染色质呈块状边集等).实验表明,ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)具有显著抑制食管癌细胞生长增殖,降低细胞多胺合成,促进细胞凋亡,为探讨食管癌基因治疗的可行性提供实验依据. 展开更多

关键词 鸟氨酸脱羧酶 S-甲硫氨酸脱羧酶 多胺 食管癌ECA109细胞 基因治疗

在线阅读 下载PDF 职称材料

ODC基因反义RNA对肺癌A-549细胞生长抑制作用的体外研究 被引量：1

9

作者 李林 田辉 +2 位作者 刘贤锡 张岩 张冰 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第16期905-907,911,共4页

目的:探讨重组腺病毒rAd-ODC/Ex3as对肺癌A-549细胞的体外抑制作用。方法:利用报告基因GFP测定病毒感染效率,采用MTT法实验观察rAd-ODC/Ex3as对肺癌细胞A-549生长增殖的影响,用WesternBlot检测rAd-ODC/Ex3as是否抑制鸟氨酸脱羧酶(ODC)... 目的:探讨重组腺病毒rAd-ODC/Ex3as对肺癌A-549细胞的体外抑制作用。方法:利用报告基因GFP测定病毒感染效率,采用MTT法实验观察rAd-ODC/Ex3as对肺癌细胞A-549生长增殖的影响,用WesternBlot检测rAd-ODC/Ex3as是否抑制鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因的表达,并应用TUNEL标记检测法观察rAd-ODC/Ex3as对细胞凋亡的影响。结果:当MOI为50时,腺病毒感染A-549细胞的效率约为75%;WesternBlot证实rAd-ODC/Ex3as可抑制ODC基因的表达;rAd-ODC/Ex3as以20MOI感染肺癌A-549细胞可明显抑制其生长增殖。TUNEL标记检测结果证实rAd-ODC/Ex3as可引起A-549细胞凋亡。结论:rAd-ODC/Ex3as在体外能有效地干扰ODC基因的表达,并可抑制肺癌A-549细胞的生长和增殖,诱导其凋亡,有望成为治疗肺癌的基因药物。 展开更多

关键词 鸟氨酸脱羧酶 腺病毒载体 肺肿瘤 A-549细胞 基因治疗

在线阅读 下载PDF 职称材料

双反义腺病毒载体Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌细胞凋亡及抑制细胞生长影响的研究 被引量：1

10

作者 徐杰 田辉 +3 位作者 刘贤锡 张冰 李文军 宋旭 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2008年第23期1359-1363,共5页

目的:探讨双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞凋亡作用及抑制细胞生长的影响。方法:应用MTT法测定不同MOI的腺病毒对肺癌Eca109细胞的基因转染效率,观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响;采用Wes... 目的:探讨双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞凋亡作用及抑制细胞生长的影响。方法:应用MTT法测定不同MOI的腺病毒对肺癌Eca109细胞的基因转染效率,观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响;采用Western印迹和HPLC的方法分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,采用流式细胞术检测腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA(Ad-ODCas)和Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞周期分布的影响,同时应用原位末端标记(TUNEL)法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响。结果:MTT法实验表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用(P<0.05)。以Ad-ODC-AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞,可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达(P<0.05)。流式细胞术结果显示感染了Ad-ODC-AdoMetDCas的食管癌Eca109细胞周期阻滞在G1期。HPLC结果显示,食管癌Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内3种多胺含量均明显降低(P<0.05)。TUNEL标记检测结果显示,Ad-ODC-AdoMet-DCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡(P<0.05)。结论:Ad-ODC-AdoMetDCas能显著抑制食管癌细胞生长,促进细胞凋亡,为探讨食管癌基因治疗的可行性提供实验依据。 展开更多

关键词 鸟氨酸脱羧酶 S-甲硫氨酸脱羧酶 多胺 食管肿瘤 基因治疗

在线阅读 下载PDF 职称材料

含有弓形虫表面抗原P22、P30复合基因的载体构建 被引量：1

11

作者 王伟 古钦民 +5 位作者 刘师莲 何深一 胡海燕 李瑛 卢翌 耿昭 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第6期43-45,共3页

目的　选择弓形虫表面抗原P2 2、P30的有效基因片段 ,共同构建在同一克隆载体pUC19和表达载体 pGE MEXTM- 1上 ,并保证其连接方向及开放读码框的正确。方法　根据已发表P30基因序列 ,用PCR技术调取所需基因片段 ,P2 2基因片段来自重组质... 目的　选择弓形虫表面抗原P2 2、P30的有效基因片段 ,共同构建在同一克隆载体pUC19和表达载体 pGE MEXTM- 1上 ,并保证其连接方向及开放读码框的正确。方法　根据已发表P30基因序列 ,用PCR技术调取所需基因片段 ,P2 2基因片段来自重组质粒pGEX - 2T -v2 2 ,将两片段定向克隆于克隆载体 pUC19及表达质粒pGEMEXTM- 1上 ,用酶切及测序的方法对重组子进行鉴定。结果　酶切产物经电泳显示条带清晰 ,P2 2、P30基因片段的泳动位置分别在 4 4 6bp和 86 0bp的位置 ,与预计结果一致 ;测序结果表明插入的复合基因片段方向及序列均正确。结论　成功构建的含有P2 2、P30基因片段的质粒重组体 ,保证了两基因连接方向、序列及开放读码框的正确 ,为今后两基因的进一步复合表达研究奠定了基础。 展开更多

关键词 弓形虫 P30基因 P22基因 克隆 疫苗

在线阅读 下载PDF 职称材料