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应用巢式RT-PCR结合RFLP、SSCP对山东肾综合征出血热病人血清中HV基因检测和分型研究
被引量：
4
1
作者
刘运喜
赵仲堂
+6 位作者
许晓群
李健
高媛
江佳富
张景兰
杨占清
曹务春
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第7期624-628,共5页
目的探讨山东肾综合征出血热重疫区病人血清中HV分子生物学特征,同时寻找准确、简便、迅速的HV检测与分型方法,从而为制定防治决策提供科学根据。方法从山东肾综合征出血热重疫区临沂市费县收集病人早期血清,应用巢式RT-PCR对病人血清中...
目的探讨山东肾综合征出血热重疫区病人血清中HV分子生物学特征,同时寻找准确、简便、迅速的HV检测与分型方法,从而为制定防治决策提供科学根据。方法从山东肾综合征出血热重疫区临沂市费县收集病人早期血清,应用巢式RT-PCR对病人血清中的HV进行基因扩增,采用RFLP、SSCP分型,并进行序列测定与分析。结果48份临床和ELISA检测确诊的HFRS病人血清经巢式RT-PCR扩增后,41份阳性,阳性率85.42%。41份阳性标本巢式RT-PCR产物经HindIII、HinfI酶切后,呈现2种不同的RFLP图谱:33份显示与R22株相似的酶切图谱,应属SEOV型;另外8份显示出与HTN76-118株相似的图谱,属HTNV型,这8份HTNV型标本均为10-12月间收集的病人血清。41份阳性标本巢式RT-PCR产物经SSCP分析,亦呈现2种不同的图谱:33份具有与R22株相似的SSCP图谱,应属SEOV型;而另8份则与HTN76-118株具有相似的SSCP图谱,属HTNV型。对部分扩增产物序列采用系统进化树分析也得出类似的结果:sdp1、sdp2、sdp3与HTN型76-118株亲缘关系相近,属同一簇,而sdp22、sdp37与SEOV型Z37、R22株亲缘关系相近,属另外一簇,这与RFLP和SSCP获得的结果相一致。结论山东肾综合征出血热重疫区病人基因型以SEOV型为主,但在秋冬季节也存在HTNV型。巢式RT-PCR结合RFLP、SSCP法可对HV准确分型,而且简便、迅速,适合于大规模流行病学调查。
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关键词
HV
巢式RT-PCR
RFLP
SSCP
序列分析
基因型
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职称材料
应用PCR/RFLP对山东地区恙虫病东方体的基因型分析
被引量：
3
2
作者
刘运喜
赵仲堂
+4 位作者
高媛
张景兰
杨占清
步秀萍
苏静静
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004年第5期425-428,共4页
目的 鉴定山东地区恙虫病东方体的基因型。方法 采用聚合酶链反应 /限制性片段长度多态性分析 (PCR/RFLP)技术对恙虫病东方体山东分离株、小盾纤恙螨匀浆及恙虫病病人全血中提取的DNASta5 6基因进行分析研究 ,并与NestedPCR基因分型...
目的 鉴定山东地区恙虫病东方体的基因型。方法 采用聚合酶链反应 /限制性片段长度多态性分析 (PCR/RFLP)技术对恙虫病东方体山东分离株、小盾纤恙螨匀浆及恙虫病病人全血中提取的DNASta5 6基因进行分析研究 ,并与NestedPCR基因分型的结果进行比较。结果 山东地区 35份标本 ( 2 3株恙虫病东方体山东分离株、2份采自黑线姬鼠体外的小盾纤恙螨匀浆及 10份恙虫病人全血 )提取的DNA群引物扩增产物经HinfⅠ、HhaⅠ、SnaBⅠ酶切后呈现 2种不同的RFLP图谱 ,经与已知序列的Ot内切酶图谱相比 :33份Ot内切酶图谱与文献报告的日本地方株—Kawasaki株具有相似的酶切图谱 ,但缺乏HhaⅠ的酶切位点 ;另 2份与Karp参考株具有相同的酶切图谱。该结果与NestedPCR基因分型的结果相一致。结论 山东地区恙虫病东方体流行株主要基因型与日本地方株Kawasaki型类似 ,但与日本地方株存在遗传差异 ;同时还有Karp型Ot存在。采用PCR/RFLP方法可以准确对Ot-Sta5 6基因分型。
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关键词
聚合酶链反应/限制性片段长度多态性分析(PCR/RFLP)
恙虫病东方体
基因型
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职称材料
题名
应用巢式RT-PCR结合RFLP、SSCP对山东肾综合征出血热病人血清中HV基因检测和分型研究
被引量：
4
1
作者
刘运喜
赵仲堂
许晓群
李健
高媛
江佳富
张景兰
杨占清
曹务春
机构
病原微生物生物安全国家重点实验室
济南军区联勤部疾病预防控制中心
山东大学公共卫生学院流行病学与卫生统计学研究所
山东
省医
学
科
学院
基础医
学
研究所
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第7期624-628,共5页
基金
山东省医药卫生重大创新研究计划课题(No.CX02207)
北京市自然科学基金重点项目(No.7021004)
济南军区军事医学研究所所长基金资助(No.200202)。
文摘
目的探讨山东肾综合征出血热重疫区病人血清中HV分子生物学特征,同时寻找准确、简便、迅速的HV检测与分型方法,从而为制定防治决策提供科学根据。方法从山东肾综合征出血热重疫区临沂市费县收集病人早期血清,应用巢式RT-PCR对病人血清中的HV进行基因扩增,采用RFLP、SSCP分型,并进行序列测定与分析。结果48份临床和ELISA检测确诊的HFRS病人血清经巢式RT-PCR扩增后,41份阳性,阳性率85.42%。41份阳性标本巢式RT-PCR产物经HindIII、HinfI酶切后,呈现2种不同的RFLP图谱:33份显示与R22株相似的酶切图谱,应属SEOV型;另外8份显示出与HTN76-118株相似的图谱,属HTNV型,这8份HTNV型标本均为10-12月间收集的病人血清。41份阳性标本巢式RT-PCR产物经SSCP分析,亦呈现2种不同的图谱:33份具有与R22株相似的SSCP图谱,应属SEOV型;而另8份则与HTN76-118株具有相似的SSCP图谱,属HTNV型。对部分扩增产物序列采用系统进化树分析也得出类似的结果:sdp1、sdp2、sdp3与HTN型76-118株亲缘关系相近,属同一簇,而sdp22、sdp37与SEOV型Z37、R22株亲缘关系相近,属另外一簇,这与RFLP和SSCP获得的结果相一致。结论山东肾综合征出血热重疫区病人基因型以SEOV型为主,但在秋冬季节也存在HTNV型。巢式RT-PCR结合RFLP、SSCP法可对HV准确分型,而且简便、迅速,适合于大规模流行病学调查。
关键词
HV
巢式RT-PCR
RFLP
SSCP
序列分析
基因型
Keywords
HV
RT-Nested PCR
RFLP
SSCP
sequence analysis
genotype.
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
应用PCR/RFLP对山东地区恙虫病东方体的基因型分析
被引量：
3
2
作者
刘运喜
赵仲堂
高媛
张景兰
杨占清
步秀萍
苏静静
机构
济南军区军事医
学
研究所
流行病
研究
室
山东大学公共卫生学院流行病学与卫生统计学研究所
出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004年第5期425-428,共4页
基金
国家自然科学基金 (No 3 0 3 712 3 7)
解放军总后勤部卫生部全军医药卫生科研基金 (No 0 1Q0 16)
山东省科学技术发展计划(No 0 2 2 13 0 111)资助项目
文摘
目的 鉴定山东地区恙虫病东方体的基因型。方法 采用聚合酶链反应 /限制性片段长度多态性分析 (PCR/RFLP)技术对恙虫病东方体山东分离株、小盾纤恙螨匀浆及恙虫病病人全血中提取的DNASta5 6基因进行分析研究 ,并与NestedPCR基因分型的结果进行比较。结果 山东地区 35份标本 ( 2 3株恙虫病东方体山东分离株、2份采自黑线姬鼠体外的小盾纤恙螨匀浆及 10份恙虫病人全血 )提取的DNA群引物扩增产物经HinfⅠ、HhaⅠ、SnaBⅠ酶切后呈现 2种不同的RFLP图谱 ,经与已知序列的Ot内切酶图谱相比 :33份Ot内切酶图谱与文献报告的日本地方株—Kawasaki株具有相似的酶切图谱 ,但缺乏HhaⅠ的酶切位点 ;另 2份与Karp参考株具有相同的酶切图谱。该结果与NestedPCR基因分型的结果相一致。结论 山东地区恙虫病东方体流行株主要基因型与日本地方株Kawasaki型类似 ,但与日本地方株存在遗传差异 ;同时还有Karp型Ot存在。采用PCR/RFLP方法可以准确对Ot-Sta5 6基因分型。
关键词
聚合酶链反应/限制性片段长度多态性分析(PCR/RFLP)
恙虫病东方体
基因型
Keywords
PCR/RFLP
Orientia tsutsugamushi
gene type
分类号
R376.2 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用巢式RT-PCR结合RFLP、SSCP对山东肾综合征出血热病人血清中HV基因检测和分型研究
刘运喜
赵仲堂
许晓群
李健
高媛
江佳富
张景兰
杨占清
曹务春
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
4
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职称材料
2
应用PCR/RFLP对山东地区恙虫病东方体的基因型分析
刘运喜
赵仲堂
高媛
张景兰
杨占清
步秀萍
苏静静
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004
3
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