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增强型绿色荧光蛋白的色谱分离和纯化
被引量：
5
1
作者
侯清华
宋淑亮
+2 位作者
梁浩
王伟莉
吉爱国
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期151-154,共4页
增强型绿色荧光蛋白(EGFP)是生物领域常用的标记物。在前期成功克隆表达EGFP的基础上,本实验建立了两步分离纯化EGFP的色谱方法,并验证其分离纯化效果,检验EGFP的活性。首先用金属螯合亲和色谱柱His-Trap HP对EGFP的重组菌体破碎上清液...
增强型绿色荧光蛋白(EGFP)是生物领域常用的标记物。在前期成功克隆表达EGFP的基础上,本实验建立了两步分离纯化EGFP的色谱方法,并验证其分离纯化效果,检验EGFP的活性。首先用金属螯合亲和色谱柱His-Trap HP对EGFP的重组菌体破碎上清液进行初步分离,再用葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephadex G-10 HR对其进行脱盐纯化。采用丙烯葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephacryl S-300 HR和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测分离纯化后的EGFP纯度。最后通过荧光分光检测器和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)验证分离纯化后的EGFP是否具有荧光活性。结果表明该方法可以简便快速地分离纯化EGFP,纯度超过98%,同时保持了EGFP的荧光活性。
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关键词
金属螯合亲和色谱
凝胶排阻色谱
增强型绿色荧光蛋白
分离
纯化
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职称材料
题名
增强型绿色荧光蛋白的色谱分离和纯化
被引量：
5
1
作者
侯清华
宋淑亮
梁浩
王伟莉
吉爱国
机构
山东大学
(
威海
)
国际
生物技术
研发
中心
山东大学
(
威海
)海洋学院
山东大学
药学院
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期151-154,共4页
文摘
增强型绿色荧光蛋白(EGFP)是生物领域常用的标记物。在前期成功克隆表达EGFP的基础上,本实验建立了两步分离纯化EGFP的色谱方法,并验证其分离纯化效果,检验EGFP的活性。首先用金属螯合亲和色谱柱His-Trap HP对EGFP的重组菌体破碎上清液进行初步分离,再用葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephadex G-10 HR对其进行脱盐纯化。采用丙烯葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephacryl S-300 HR和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测分离纯化后的EGFP纯度。最后通过荧光分光检测器和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)验证分离纯化后的EGFP是否具有荧光活性。结果表明该方法可以简便快速地分离纯化EGFP,纯度超过98%,同时保持了EGFP的荧光活性。
关键词
金属螯合亲和色谱
凝胶排阻色谱
增强型绿色荧光蛋白
分离
纯化
Keywords
immobilized metal affinity chromatography （IMAC）
gel exclusion chromatography （ GEC ）
enhanced green fluorescent protein （EGFP）
separation
purification
分类号
O658 [理学—分析化学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
增强型绿色荧光蛋白的色谱分离和纯化
侯清华
宋淑亮
梁浩
王伟莉
吉爱国
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2013
5
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